血清lncRNAXIST和SIRT1水平与DR的关系及其诊断价值

目的:检测2型糖尿病(T2DM)患者血清长链非编码RNA(lncRNA)X非活性特异性转录本(XIST)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)表达水平,并探讨其与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性及其诊断价值。方法:前瞻性研究。选取2022-01/2023-02在我院收治T2DM患者214例作为研究对象。根据是否发生视网膜病变,分为非DR组126例126眼,DR组88例88眼。另选取同期体检健康者130例为对照组。检测三组血清lncRNA XIST、SIRT1水平并进行比较。采用Pearson法分析lncRNA XIST和SIRT1表达与DR的关系,受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA XIST、SIRT1单独及联合对DR的预测价值,多因素Logistic回归分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:与对照组比较,非DR组和DR组血清lncRNA XIST、SIRT1水平依次降低(均P<0.05);DR患者血清lncRNA XIST和SIRT1水平呈正相关(r=0.639,P<0.05);ROC分析显示,血清lncRNA XIST、SIRT1联合预测DR的曲线下面积(AUC)为0.940,高于血清lncRNA XIST、SIRT1单独检测的AUC(0.855、0.875)。Logistic回归分析显示,lncRNA XIST(OR=0.752)、SIRT1(OR=0.694)是DR发生的影响因素(均P<0.01)。结论:DR患者血清lncRNA XIST、SIRT1水平均降低,lncRNA XIST联合SIRT1对DR发生有较好的评估效能。

VIGS诱导MdHB-1沉默对苹果果实成熟的影响

为研究MdHB-1是否可调控苹果果实MdACO1表达及果实成熟进程,以‘澳洲青苹’果实为试材,通过病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术抑制果实MdHB-1表达,分析其对MdACO1表达情况和果实成熟相关指标的影响。结果显示,VIGS技术成功抑制果肉MdHB-1表达,使MdACO1表达量下调,果实的呼吸强度和乙烯释放速率受到显著抑制,果实硬度、可溶性固形物和可滴定酸质量分数的下降延缓。说明:MdHB-1不仅可以正向调控苹果果实MdACO1表达,还参与果实的成熟衰老过程。

补肾活血方对动脉粥样硬化新西兰兔miRNA-217/Sirt1/FoxO1信号通路的影响

目的观察补肾活血方对动脉粥样硬化新西兰兔MicroRNA-217(miRNA-217)/沉默信号调节器1(Sirt1)/叉头转录因子(FoxO1)信号通路的影响。方法将新西兰兔44只随机分为对照组、模型组、补肾活血方组和阿托伐他汀钙组,除对照组外,其余3组高脂饲料喂养16周,灌胃8周后实时荧光定量PCR检测miRNA-217基因表达水平,免疫印迹实验检测Sirt1、FoxO1蛋白表达水平。结果与模型组相比,补肾活血方组和阿托伐他汀钙组miRNA-217表达降低(P <0.01),Sirt1、FoxO1表达增高(P <0.01)。补肾活血方组miRNA-217水平低于阿托伐他汀钙组(P <0.05),Sirt1蛋白水平高于阿托伐他汀钙组(P <0.05)。结论补肾活血方可能通过调控miRNA-217/Sirt1/FoxO1信号通路延缓内皮细胞衰老从而起到抗动脉粥样硬化作用。

SIRT1与神经细胞凋亡关系的研究进展

随着人类平均寿命的延长、人口老龄化的加剧,神经退行性疾病成为研究的焦点,其中神经细胞凋亡在神经退行性疾病中起重要作用。凋亡是由基因控制的细胞程序性死亡,通过线粒体途径,外在途径或死亡受体途径以及内质网途径在胚胎发育、免疫耐受、肿瘤发生、炎症转归及正常组织更新等病理、生理过程中发挥重要的调节作用。长寿蛋白SIRT1在神经系统中具有保护性作用,通过去乙酰化作用于靶蛋白如p53、叉头蛋白转录因子O、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α、蛋白激酶B等影响凋亡因子、神经炎症、氧化应激、线粒体发生,达到对神经细胞凋亡的调控。

SIRT1、ATF4、KL-6蛋白在COPD患者肺组织中的表达及与气道重塑的相关性研究

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织标本的沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、活化转录因子4(ATF4)、涎液化糖链抗原-6(KL-6)蛋白水平差异及与气道重塑的相关性。方法 分别收集2020年1月至2021年5月在该院呼吸内科就诊的合并肺肿瘤的急性加重期COPD、稳定期COPD的肺叶切除组织蜡块标本各40例,分别纳入急性期组、稳定期组;另外选取40例该院实验室保存的行肺肿瘤肺叶切除术非COPD患者的组织蜡块标本作为对照组,采用Western blotting法检测3组肺组织标本的SIRT1、ATF4、KL-6蛋白水平并进行对比。绘制ROC曲线分析肺组织SIRT1、ATF4、KL-6蛋白在COPD患者病情诊断中的应用价值;以气道壁面积占总横截面积比(WA%)作为气道重塑评估指标,分为无气道重塑组、轻中度组、重度组,对比不同气道重塑程度COPD患者的肺组织SIRT1、ATF4、KL-6蛋白表达差异,分析肺组织SIRT1、ATF4、KL-6蛋白水平与COPD患者气道重塑程度的相关性。结果 (1)与对照组相比,急性期组、稳定期组的肺组织SIRT1蛋白水平均明显降低(P<0.05),急性期组、稳定期组的肺组织ATF4、KL-6蛋白水平明显升高(P<0.05);与稳定期组相比,急性期组的肺组织SIRT1蛋白水平明显降低(P<0.05),急性期组的肺组织ATF4、KL-6蛋白水平均明显升高(P<0.05)。(2)SIRT1、ATF4、KL-6蛋白单独检测以及联合检测诊断COPD的灵敏度、特异度均>70.00%,AUC均>0.740。(3)与无气道重塑组相比,轻中度组、重度组的肺组织ATF4、KL-6蛋白水平明显升高(P<0.05),且SIRT1蛋白水平明显降低(P<0.05);与轻中组相比,重度组的肺组织SIRT1蛋白水平明显降低(P<0.05),且ATF4、KL-6蛋白水平均明显升高(P<0.05)。(4)COPD患者肺组织的SIRT1蛋白表达与气道重塑WA%呈负相关(r=-0.635,P<0.001),ATF4、KL-6蛋白表达与气道重塑WA%呈正相关(r=0.768、0.892,P<0.001)。结论 SIRT1蛋白在COPD患者肺组织中呈低表达,ATF4、KL-6蛋白在COPD患者肺组织中呈高表达,SIRT1、ATF4、KL-6蛋白与COPD病情发展以及气道重塑有关。检测肺组织中SIRT1、ATF4、KL-6蛋白的表达对判断COPD病情发展均有良好的诊断效能,可将调控SIRT1、ATF4、KL-6蛋白在肺组织中的水平作为后续临床COPD、气道重塑治疗的新研究方向。

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗相关信号通路的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种好发于青春期及育龄期女性的涉及诸多因素的内分泌代谢性疾病,临床主要表现为闭经、体胖、多毛痤疮以及妊娠率显著降低,但目前其病因病机尚不清楚。胰岛素抵抗(IR)与多种慢性非传染性疾病(高血压、糖尿病、心脑血管疾病、PCOS等)相关,目前已知磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、肝激酶B1/AMP活化的蛋白激酶、沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O1、Toll样因子4/核因子κB信号通路参与了PCOS伴IR(PCOS-IR)的作用机制,因此充分认识PCOS-IR的发病机制在疾病预防中有重要临床意义。

siRNA表达框架对TNF-α和IL-1的特异性抑制

[目的]利用siRNA表达框架研究RNA干扰技术对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的抑制作用及其干扰序列的特异性。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α和IL-1的siRNA表达框架,转染细胞,用ELISA方法检测TNF-α和IL-1分泌情况。[结果]TNF-α干扰组TNF-α分泌量(21.87±1.20)pg/mL较IL-1干扰组(28.02±1.03)pg/mL及对照组(27.64±1.92)pg/mL均明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。IL-1干扰组IL-1分泌量(40.37±4.02)pg/mL较TNF-α干扰组(57.86±3.91)pg/mL及对照组(59.55±3.57)pg/mL均明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]构建的针对TNF-α和IL-1的siRNA表达框架能够明显抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1,且干扰作用具有序列特异性。

依托咪酯调控Sirt1/FOXO1通路对心肌缺血再灌注大鼠模型的保护作用

目的基于沉默信息调节因子1(Sirt1)/叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)通路探究依托咪酯(Eto)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型的保护作用。方法将60只大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MIRI组、依托咪酯低、高剂量组(L-Eto、H-Eto组,0.5、1 mg/kg)、通路抑制剂组(Eto+EX527组,1 mg/kg Eto+2 mg/kg EX527),每组12只。除Sham组外,其余大鼠采用手术结扎冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。给药组大鼠于再灌注后2 h尾静脉注射相应剂量药物;1次/d,持续28 d。于手术前和末次给药2 h后超声心电图检查大鼠心脏功能;生化法检测血清中肌酸激酶同工酶MB(CKMB)、肌钙蛋白I(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)水平和心肌组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织形态变化;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光探针测定心肌中活性氧(ROS)水平;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP)变化;Western blot检测心肌组织Sirt1/FOXO1通路和凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达。结果与Sham组相比,MIRI组大鼠左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、血清CKMB、cTnI、LDH水平、心肌MDA水平、心肌细胞的凋亡率、ROS水平、心肌乙酰化FOXO1(Ac-FOXO1)、Bax、Caspase-3的表达显著升高(均P<0.05),左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)、心肌SOD、GSH-Px水平、MMP、心肌Sirt1、Bcl-2的表达显著下降(均P<0.05),心肌纤维紊乱,细胞肿胀、坏死,大量炎性细胞浸润;与MIRI组相比,L-Eto、H-Eto组大鼠的LVESV、LVEDV、血清CKMB、cTnI、LDH水平、心肌MDA水平、心肌细胞的凋亡率、ROS水平、心肌Ac-FOXO1、Bax、Caspase-3的表达明显下降(均P<0.05),LVEF、LVFS、心肌SOD、GSH-Px水平、MMP、Sirt1、Bcl-2的表达明显升高(均P<0.05);心肌损伤明显减轻。EX527可逆转Eto的抗氧化活性和心肌保护作用。结论Eto对MIRI的保护作用可能与激活Sirt1,下调乙酰化FOXO1的表达,进而改善线粒体功能障碍,抑制氧化应激和细胞凋亡有关。

超极化激活的环核苷酸门控阳离子通道1在杏仁核快速电点燃癫痫大鼠神经元中表达下调

为研究杏仁核快速电点燃癫痫中超极化激活的环核苷酸门控阳离子通道1(hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel,HCN1)表达变化,成年Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(S)、癫痫模型2h组(EP-2 h)、癫痫模型14d组(EP-14 d)和癫痫模型35 d组(EP-35 d);采用快速电点燃刺激杏仁核方法建立癫痫大鼠模型,观察各组大鼠行为学的变化,研究了海马神经元中HCN1的免疫荧光及3,3-二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)免疫组化表达情况。结果表明:与S组比较,HCN1的免疫荧光显示EP各组海马部位HCN1阳性表达细胞数均减少,且EP-14 d及EP-35 d组减少最明显(P <0. 05); DAB免疫组化显示EP各组HCN1阳性表达均低于S组,且EP-14 d及EP-35 d组降低最明显(P <0. 05)。可见在杏仁核快速电点燃癫痫大鼠模型中,HCN1下调可能参与癫痫的发生和发展。

lncRNA TUG1对人牙髓干细胞成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine upregulated 1,TUG1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及成骨/牙本质向分化的影响。方法分离培养hDPSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD73、CD90、CD133、STRO-1,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定其分化能力。hDPSCs成骨诱导0、7、14 d收集RNA,qRT-PCR检测TUG1的表达水平。构建携带sh-TUG1的慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA(TUG1)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,并通过感染hDPSCs及嘌呤霉素筛选建立稳定沉默TUG1的hDPSCs细胞系,CCK-8检测hDPSCs增殖能力,ALP和茜素红染色及定量检测hDPSCs的早期ALP活性和晚期矿化结节的形成,qRT-PCR和Western blot检测成牙本质及成骨分化相关的基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白-1(dentine matrix protein 1,DMP-1)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因及蛋白表达变化。结果成功分离、培养和鉴定hDPSCs,hDPSCs成骨向分化过程中TUG1的表达明显增加(P<0.05)。沉默TUG1后hDPSCs的增殖能力下降(P<0.05),ALP活性降低,矿化结节形成减少;成牙本质分化基因DSPP、DMP-1以及成骨分化基因Runx2、OCN、OPN表达也显著降低(P<0.05)。结论沉默TUG1可抑制hDPSCs的增殖及成骨/成牙本质分化。

REST在宫颈鳞状细胞癌组织中表达及其对KCa3.1的影响

目的探讨抑制元件l沉默转录因子(REST)在宫颈鳞状细胞癌组织中表达及其对电导钙激活钾离子通道(KCa3. 1)的影响。方法收集宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织和正常宫颈组织,采用免疫组化、qRT-PCR分别检测不同组织中REST的蛋白和mRNA表达量。Ch IP-qPCR检测REST在KCa3. 1启动子区抑制元件1(RE1)位点处富集程度。结果宫颈鳞状细胞癌、癌旁、正常宫颈组织中REST基因相对表达量分别为0. 46±0. 06、0. 89±0. 13、1. 00±0. 12;宫颈鳞状细胞癌中REST基因相对表达量较癌旁组织和正常宫颈组织分别下降48%、54%;宫颈鳞状细胞癌、癌旁、正常宫颈组织中KCa3. 1基因表达量分别为2. 14±0. 35、1. 18±0. 21、1. 00±0. 13,宫颈鳞状细胞癌中KCa3. 1基因表达量较癌旁组织和正常宫颈组织分别上升81%、114%。在宫颈鳞状细胞癌组织中REST的蛋白表达和mRNA转录水平较正常宫颈组织和癌旁组织下调(P均<0. 05)。KCa3. 1的表达量在宫颈鳞状细胞癌中较癌旁组织及正常宫颈组织增加(P均<0. 05)。REST能与KCa3. 1启动子区RE1位点结合,且宫颈鳞状细胞癌组织中REST在KCa3. 1启动子RE1位点处的富集程度低于正常宫颈组织和癌旁组织(P均<0. 05)。结论 REST通过与KCa3. 1启动子RE1位点处结合负调控KCa3. 1表达。REST表达下调降低了对KCa3. 1基因表达的抑制,导致KCa3. 1基因表达量上升,增强KCa3. 1的活性,促进宫颈鳞状细胞癌的发生发展。

基于SIRT1/STAT3通路探讨盐酸戊乙奎醚对小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨高剂量盐酸戊乙奎醚(PHC)对小鼠学习记忆能力的影响及其作用机制。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(腹腔注射等量的0.9%NaCl)、低剂量实验组(腹腔注射0.12 mg·kg^(-1)PHC)、高剂量实验组(腹腔注射5.00 mg·kg^(-1)PHC)、SRT1720组[腹腔注射5.00 mg·kg^(-1)PHC和5 mg·kg^(-1)沉默信息调节因子1(SIRT1)激活药SRT1720],每组15只。给药6 h后,用Morris水迷宫实验和Y迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,用蛋白质印迹法检测小鼠海马组织中SIRT1和信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白的表达水平,用试剂盒检测小鼠海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)水平,用免疫荧光检测海马组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达情况。结果对照组、低剂量实验组、高剂量实验组和SRT1720组小鼠给药6 h后穿越平台次数分别为(6.07±0.44)、(6.00±0.37)、(3.00±0.97)和(4.47±1.31)次,逃避潜伏期分别为(14.02±1.79)、(14.16±1.67)、(51.55±4.07)和(32.84±2.40)s,Y迷宫交替率分别为(60.90±5.18)%、(59.38±5.99)%、(39.80±4.45)%和(46.65±5.02)%,SIRT1蛋白相对表达水平分别为1.05±0.09、1.08±0.12、0.52±0.07和0.77±0.11,STAT3蛋白相对表达水平分别为0.37±0.03、0.38±0.06、0.68±0.06和0.53±0.08,ChAT水平分别为(306.08±20.11)、(296.33±36.11)、(209.99±18.91)和(250.42±25.22)pg·mL-1,GFAP平均光密度值分别为0.05±0.00、0.05±0.00、0.08±0.01和0.06±0.01。高剂量实验组的上述指标与对照组比较,高剂量实验组的上述指标与低剂量实验组比较,SRT1720组的上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高剂量的PHC可能通过抑制SIRT1/STAT3通路导致小鼠学习记忆能力下降。

防己黄芪汤及穴位埋线在单纯性肥胖症患者中的应用效果

目的 探讨防己黄芪汤及穴位埋线在单纯性肥胖症患者中的应用效果。方法 选取2020年5月至2021年5月漯河市中医院收治的46例单纯性肥胖症患者为对照组,2021年6月至2022年6月收治入组并经过性别、年龄、病程匹配的55例单纯性肥胖症患者为观察组。两组患者均接受对症治疗和穴位埋线治疗,观察组在此基础上联合防己黄芪汤治疗。对比两组患者临床疗效,分析治疗前后的炎症指标和沉默信息调节因子1(SIRT1)、核转录因子κB(NF-κB)水平。结果 观察组临床总有效治疗率高于对照组(P<0.05)。治疗8周后,两组患者的炎症指标白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)及NF-κB水平均降低,SIRT1水平升高,且观察组IL-6、TNF-α、CRP水平低于对照组,SIRT1/NF-κB高于对照组(P<0.05)。结论 在穴位埋线治疗基础上联合防己黄芪汤方,可以提高单纯性肥胖症患者的临床疗效,通过SIRT1/NF-κB改善机体炎症状态。

榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用

目的观察榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株。采用MTT法测定榄香烯对SK-N-SH细胞的抑制率,应用实时qPCR和Western blotting法测定榄香烯对SK-N-SH细胞中神经元限制性沉默因子(REST)的调控作用,并进一步用实时qPCR检测SK-N-SH细胞中细胞周期相关基因CCND1和CCNE1的表达。结果榄香烯对SK-N-SH细胞的增殖有明显的抑制作用(P=0.001 16),并呈时间和浓度依赖性;榄香烯下调REST mRNA(P=0.000 38)和蛋白表达(P=0.003 39),并且抑制细胞周期相关基因CCND1 mRNA表达(P=0.001 91)和CCNE1 mRNA表达(P=0.000 15)。结论榄香烯对神经母细胞瘤的增殖有抑制作用,并且抑制其REST和细胞周期相关基因CCND1和CCNE1的表达。

AD中细胞状态改变与认知障碍相关性的实验研究

目的:为什么某些呈现阿尔茨海默症解剖性和分子性特征的个体仍然会保持认知能力,对此问题我们还未完全了解。为此我们展示了小胶质细胞和抑制性因素1沉默作用转录因子(REST,repressorelement1-silencing transcription factor)在不同浓度Aβ干预下的变化情况,以探讨AD病理特征与症状产生的相关性。方法:不同浓度Aβ处理BV2细胞和N2A细胞,用荧光显微镜下观察小胶质细胞的活性变化、凋亡和自噬情况;用Western Blot检测活化标志物MHC-Ⅱ蛋白表达水平;用荧光检测共聚焦显微镜观测REST蛋白在造模前后细胞内的定位的变化及海马神经元的凋亡;并采用Realtime PCR和Western blot的方法检测小鼠神经元中凋亡与自噬相关基因的表达。同时进一步探明REST核内缺失的原因。结果:随着Aβ浓度增加,细胞形态明显改变,变性小胶质细胞比例逐渐增加,静息态小胶质细胞比例逐渐减少,同时小胶质细胞活化标志物MHC-Ⅱ蛋白表达水平增加;不同浓度Aβ处理N2A细胞,发现N2A细胞活性逐渐减低,同时凋亡的BAX、CASP9和自噬标志基因LC-3的表达水平表达增强。而抑制凋亡的BCL2基因表达下降,而REST表达水平随着Aβ浓度升高而降低。酪蛋白激酶1(caseinkinnse-1,CK1)水平随Aβ浓度升高而升高,用CK1抑制剂D4476处理即可引起REST水平显著增加;荧光共聚焦显微镜观测发现6月龄APP/PS1双转基因小鼠海马区神经元细胞已出现REST核内表达减少。结论:随着Aβ浓度的升高,出现小胶质细胞激活、REST核内减少、神经元凋亡自噬等现象,这些可能是引起突触丢失、神经元凋亡,进而导致痴呆症状的产生的潜在原因。同时REST核内减少的原因可能与其泛素化降解有关。这也进一步佐证在认知正常的人群,较高的斑块负荷会增加了其未来发生痴呆的风险。

REST及其剪切变体REST4在肿瘤中的研究进展

抑制元素l-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcription factor,REST)又称为神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF),是神经元特异性表达的负向调控因子,存在广泛的选择性剪切现象。REST及其剪切变体REST4在不同类型肿瘤中发挥重要作用,在胶质瘤、髓母细胞瘤等神经性肿瘤中REST可作为致癌因子,而在结肠癌、肺癌、乳腺癌等上皮性肿瘤中REST作为抑癌因子发挥肿瘤抑制作用。本文就REST及其剪切变体REST4在肿瘤中的研究进行综述。

CoREST基因在骨关节炎软骨组织中的表达、分布和意义

目的:观察RE-1元件辅助沉默因子(CoREST)基因在正常和骨关节炎(OA)膝关节软骨组织中的表达和分布,分析CoREST基因表达下调对OA的病理意义。方法:取材膝关节正常(n=10)和OA(n=12)软骨组织,提取软骨细胞并包埋制备切片,应用real-time PCR技术对比CoREST基因在正常和OA软骨细胞中表达水平的总体差异,应用原位杂交技术观察CoREST基因在正常/OA软骨表、中、深各层组织中的表达和分布的特点。结果:CoREST基因在OA软骨细胞中的表达水平显著降低64.6%(P<0.01)。CoREST基因广泛表达于正常软骨组织的表层、中层和深层,以中层表达最为显著,其次为深层和表层。在OA软骨组织中,CoREST基因在浅层细胞簇部分细胞中表达水平升高,在深层潮线状细胞柱中表达水平普遍降低。结论:CoREST基因在正常和OA软骨组织细胞中的差异表达和分布与文献报道的X型胶原基因的组织学表达一致。结合前期研究成果,我们认为CoR-EST的生物功能可能与OA软骨细胞的终末分化相关。

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.

PPAR-α受体激动剂对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)激动剂非诺贝特(FEN)对肝脏缺血再灌注损伤(HI/R)的保护作用。方法将40只SD大鼠随机分成对照组、模型组、PPAR-α激动剂FEN组(FEN组)和PPAR-α抑制剂GW6471组(GW组),每组10只。全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平;通过苏木精-尹红(HE)染色观察各组大鼠肝脏组织病理形态;TUNEL法检测肝脏细胞凋亡;利用Western blot检测各组肝脏沉默信息调节因子1(SIRT1)、叉头转录因子1(FOXO1)、乙酰化FOXO1(AceFOXOI)、裂解型天冬氨酸蛋白水解酶(C-caspase3)和细胞质中细胞色素C(CytC)表达水平。结果与模型组相比,PPAR-α激动剂FEN预处理可明显减轻肝脏病理损伤,减少肝脏AceFOXO1、C-caspase3、TUNEL和细胞质CytC的表达水平及增加肝脏SIRT1表达水平。而FEN组血清中AST[(90.15±11.21)U/L],ALT[(135.18±20.46)U/L]和ALP[(211.12±22.75)U/L]水平较模型组血清中AST[(189.37±21.55)U/L],ALT[(378.15±36.78)U/L]和ALP[(495.93±31.14)U/L]水平明显降低。而予以PPAR-α抑制剂GW6471预处理可明显增加肝脏病理损伤,上调肝脏AceFOXO1、C-caspase3、TUNEL和细胞质CytC的表达水平及减少肝脏SIRT1表达水平。GW组血清中AST[(177.21±18.54)U/L],ALT[(199.46±28.54)U/L]和ALP[(286.12±24.51)U/L]水平较FEN组血清中AST,ALT和ALP水平明显增高(P<0.05)。结论 PPAR-ɑ受体激动剂FEN对大鼠HI/R具有保护作用,该作用可能与FEN能促进SIRT1去乙酰化修饰FOXO1,减少FOXO1介导线粒体凋亡,改善肝功能有关。

桂枝加葛根汤对神经根型颈椎病大鼠的作用和镇痛机制研究

目的探讨桂枝加葛根汤对神经根型颈椎病(CSR)大鼠的作用和镇痛机制研究。方法按照体重将Wistar大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只。用颈椎插线法构建CSR大鼠模型。阳性对照组给予颈复康颗粒6 g·kg^(-1),低、中、高3个剂量实验组分别给予桂枝加葛根汤1,2,4 g·kg^(-1)灌胃,假手术组和模型组大鼠给予药液相同体积生理盐水灌胃。均连续给药14 d。造模后第3 d后,阳性对照组给予颈复康颗粒6 g·kg^(-1),低、中、高3个剂量实验组给予桂枝加葛根汤1,2,4 g·kg^(-1)灌胃,假手术组和模型组大鼠给予相同体积生理盐水灌胃。观察各组大鼠疼痛行为和步态障碍评分;酶联免疫吸附法检测血清中前列腺素E2(PGE2)和β-内啡肽(β-Ep)含量;以实时定量-PCR法检测脊髓和神经根组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、核转录因子-κB-p65(NF–κB-p65)和脑源性神经营养因子(BDNF)基因表达水平。结果假手术组、模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组的游泳时间分别为(389.33±16.95),(332.75±13.96),(360±19.10),(358.86±17.97),(369.29±14.44)和(377.86±9.56)s;这6组的步态障碍评分分别为(1.11±0.33),(2.50±0.53),(1.89±0.60),(1.86±0.64),(1.57±0.53)和(1.28±0.49)分;这6组的左前肢疼痛阈值分别为(713.33±18.53),(406.5±14.93),(623.22±21.82),(620.88±26.51),(670.14±15.68)和(693.43±12.65)g;这6组的PGE2含量分别为(30.23±6.16),(76.89±8.74),(57.95±10.34),(59.94±10.52),(45.74±8.61)和(37.83±7.64)ng·L^(-1);这6组的β-Ep含量分别为(130.59±18.28),(63.56±9.69),(77.93±7.51),(85.43±6.72),(98.26±11.18)和(108.35±18.21)ng·L^(-1);这6组的SIRT1基因相对表达量分别为1.56±0.12,0.56±0.07,0.68±0.08,0.67±0.04,0.80±0.06和0.99±0.09;这6组的NF-κB-p65基因相对表达量分别为0.56±0.07,1.58±0.13,1.19±0.17,1.14±0.25,0.91±0.11和0.76±0.08;这6组的BDNF基因相对表达量分别为0.52±0.11,1.86±0.12,1.35±0.11,1.35±0.14,1.05±0.18和0.73±0.13;这6组的TrkB基因相对表达量分别为0.62±0.13,1.55±0.14,1.15±0.19,1.12±0.26,0.93±0.13和0.68±0.14。上述指标:模型组与假手术组比较,或4个给药组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论桂枝加葛根汤对CSR大鼠具有良好的镇痛作用,其机制可能与改善SIRT1/NF-κB-p65和BDNF/TrkB信号通路基因表达有关。