基质金属蛋白酶抑制剂RECK基因在前列腺细胞株中的表达及意义

目的:探讨RECK基因及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA在不同前列腺细胞株BPH-1、DU-145、LNCaP及PC-3中的表达差异及其意义。方法:应用RT-PCR检测4种不同前列腺细胞株(BPH-1、DU-145、LNCaP及PC-3)中RECK及MMP-9 mRNA的表达;应用W estern印迹法检测不同前列腺细胞株中RECK蛋白的表达。结果:前列腺癌细胞株DU-145、LNCaP及PC-3中RECKmRNA的表达较良性前列腺增生细胞株BPH-1中明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA表达则明显升高。DU-145、LNCaP及PC-3细胞株中RECK蛋白的表达较BPH-1的表达明显降低。结论:RECK基因在前列腺癌中的表达量明显下降,而MMP-9的表达量明显升高,RECK基因可能是一种抑癌基因,其抑癌作用可能与其抑制MMP-9的表达有关。

非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控

目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:成瘤裸鼠分为实验组和对照组,实验组裸鼠予口咽管下喂服NS398,每天剂量0.1 mg/g体重,分别喂服10 d、20 d、30 d,对照组不予喂药,各组均在30 d后处死裸鼠;抽提各组肿瘤组织总RNA,RT-PCR检测RECK基因与MMP-9的表达;抽提各组肿瘤组织总蛋白,应用W estern印迹法检测RECK蛋白的表达。结果:实验组肿瘤组织中RECK基因的表达量较对照组明显升高,而MMP-9的表达量明显降低,且其变化与用药时间有明显的相关性。结论:NS398对前列腺癌的发生及转移有明显的抑制作用,其具体的作用机制可能与其诱导RECK基因的表达,从而抑制MMP-9的表达有关。

非类固醇类抗炎药NS398对前列腺癌细胞株RECK基因表达的调控

目的:通过检测非类固醇类抗炎药(NSAID)氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS398)对前列腺癌细胞株DU-145中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:应用不同浓度的NS398作用于前列腺癌细胞株DU-145,培养48h后收集细胞,抽取组织总RNA,检测RECK基因与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达;抽取组织总蛋白,应用Western blot方法检测RECK蛋白的表达。结果:各治疗组RECK基因表达均明显升高,其中以100μmol/L的NS398组升高最明显(P<0.05),MMP-2的含量则明显升高。另外,各治疗组RECK蛋白的表达也明显升高。结论:NS-398有明显的诱导RECK基因表达的作用,是其可能的抗肿瘤作用机制。

人乳腺癌细胞RECK基因的表达及检测

目的:研究人乳腺癌细胞株RECK基因的表达,阐明RECK基因表达水平与乳腺癌细胞侵袭力的关系。方法:采用transwell法,测定HBL-100,MCF-7和MDA-MB-435S三株人乳腺(癌)细胞的体外侵袭能力,同时应用免疫细胞化学技术,Westernblotting和RT-PCR技术分别检测三株细胞株MMP-2,MMP-9和RECK基因蛋白表达水平,及RECK基因mRNA转录丰度。结果:三株细胞中,MDA-MB-435S侵袭力最高(425.20±54.09),HBL-100最低(101.00±63.88),MCF-7居中,为(239.00±91.39),三组细胞的侵袭力比较差异均有显著性(P<0.01)。RECK基因在HBL-100细胞株中蛋白表达水平最高(免疫细胞化学值:3188.24±894.86;Westernblotting值:3.32±0.25),在MDA-MB-435S细胞株中不表达,MCF-7为(免疫细胞化学值:1058.92±336.53,P<0.01;Westernblotting值:2.23±0.59,P<0.05)。且在免疫细胞化学中,RECK基因的蛋白表达与MMP-2,MMP-9的表达水平成负相关。RECK基因在HBL-100细胞株中mRNA水平最高(2.32±0.02),在MDA-MB-435S细胞株中不表达(P<0.001)。结论:RECK基因表达水平与乳腺癌细胞体外侵袭力及MMP-2,MMP-9的表达水平成明显负相关。

RECK基因在前列腺癌组织中的表达及其与基质金属蛋白酶的关系

目的:通过检测RECK基因以及基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)在前列腺癌组织及正常前列腺中的表达,探讨RECK基因在前列腺癌发生及转移过程中的作用。方法:抽取组织总RNA,应用RT PCR方法检测RECK及MMP2、MMP9mRNA的表达;抽取组织总蛋白,应用Westernblot方法检测RECK蛋白的表达。结果:前列腺癌组织RECKmRNA的含量较正常组织明显降低(P<0.05),MMP2、MMP9mRNA含量则明显升高,RECK蛋白的表达亦较正常组织明显降低。结论:RECK是一种抑癌基因,可抑制MMP2、MMP9的表达,从而抑制前列腺癌的发生和转移。

非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌细胞株DU145中RECK基因表达的调控

目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌细胞株DU145中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:实验组(3组)分别以不同浓度(10、100、1000μmol/L)NS398作用于前列腺癌细胞株DU145,而对照组则无NS398,各组均培养48h后收集细胞,抽取各组细胞总RNA,检测RECK基因与MMP9的表达;抽取各组细胞总蛋白,应用Western印迹方法检测RECK蛋白的表达。结果:实验组细胞株中RECK基因表达均较对照组明显升高,其中以100μmol/L组升高最明显,而MMP9的含量明显降低;实验组RECK蛋白的表达也较对照组明显升高(P<0.05)。结论:NS398有明显的诱导RECK基因表达的作用,是其可能的抗肿瘤作用机制。

RECK基因的研究进展

RECK基因是近年发现的新型基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂,研究表明,其可在转录后水平抑制多种MMP的表达,抑制肿瘤血管形成,从而抑制肿瘤的侵袭及转移。作者就RECK基因的研究进展作一综述。

转染RECK基因对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨RECK基因对HepG2肝癌细胞生物学活性的影响。方法构建真核表达载体pcDNA3-RECK,采用脂质体介导将重组质粒导入体外培养的HepG2细胞,Western blot法检测转染前、后HepG2细胞中RECK蛋白的表达。明胶酶谱试验检测转染前、后MMP-9的表达。观察稳定转染RECK基因对HepG2细胞生物学行为的影响。结果成功构建了RECK基因真核表达载体并建立了稳定表达的细胞株。转染后RECK基因稳定高表达,具有生物活性的MMP-9的表达显著降低。转染前、后HepG2细胞的增殖能力无明显改变,但其侵袭能力明显下降。结论外源性的RECK基因能通过脂质体有效转染肝癌细胞,抑制MMP-9的活性,降低肝癌细胞HepG2的体外侵袭能力。

RECK基因甲基化与喉鳞状细胞癌预后的关系

目的喉癌发病率具有较大的区域性差异,其病因尚不明确。通过检测原发性喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织RECK基因的甲基化状态,分析RECK基因启动子区的甲基化与患者预后的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测邢台市人民医院2006年7月至2007年12月70例经外科手术切除的喉鳞状细胞癌标本的RECK基因启动子区甲基化状态,比较不同病理参数的甲基化率的差异,对完成5年随访的64例患者分析其RECK基因启动子区甲基化与预后的关系。结果肿瘤组织低分化患者的RECK基因甲基化率(86.67%)远高于中、高等分化程度的患者(43.64%),差异有统计学意义(P<0.05),其他病理参数间RECK基因甲基化率差异无统计学意义(P>0.05);29对喉鳞状细胞癌-癌旁组织匹配的标本中,喉鳞状细胞癌组织RECK基因甲基化率(55.12%)高于正常组织(27.59%),差异有统计学意义(P=0.029);经Log-rank分析,RECK基因甲基化可明显缩短患者的无瘤生存期和总体生存期(P=0.024,P=0.017);有淋巴结转移、Ⅲ-Ⅳ级临床分期可明显缩短患者的无瘤生存期和总体生存期(P=0.029,P=0.024;P=0.033,P=0.032),肿瘤组织中等及高分化可明显缩短患者的无瘤生存期(P=0.049);总体生存期的独立危险因素为有无淋巴结转移、临床分期和RECK基因甲基化。结论 RECK基因启动子区甲基化是人喉鳞状细胞癌的早期事件,在癌旁正常组织中也可发生,并且与患者较差的预后关联。

转染RECK基因对人骨肉瘤MG-63细胞MMP-2活化及侵袭能力的影响

目的观察转染RECK基因对人骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及细胞侵袭力的影响。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入MG-63细胞,RT-PCR、流式细胞术检测目的基因的表达,明胶酶谱法、Matrigel侵袭实验分别检测MG-63细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和细胞生长曲线法观察转染质粒DNA对细胞的毒性作用。结果转染后RECK基因在MG-63细胞mRNA和蛋白水平分别有稳定高表达;明胶酶谱显示重组质粒转染组MMP-2的活化比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.01),Matrigel侵袭实验显示重组质粒转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组(均P<0.05);而MTT法测重组质粒转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异(均P>0.05)。结论RECK基因过表达可显著减少骨肉瘤细胞MG-63的MMP-2活化及其侵袭能力,RECK基因可能成为肿瘤治疗的新靶点。

基质金属蛋白酶-9基因及RECK基因在肝癌组织中的表达

目的探讨肝癌患者基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因及RECK基因表达的情况。方法33例原发性肝细胞癌患者术中取癌组织及癌旁组织;提取组织总RNA;用逆转录共扩增定量PCR方法测定MMP-9基因及RECK基因表达水平。结果肝癌组织MMP-9基因表达水平明显高于癌旁的肝硬化组织及正常肝组织,肝癌组织RECK基因表达水平明显低于癌旁的肝硬化组织及正常肝组织。肝癌患者MMP-9基因表达水平与血清AFP浓度、肿瘤大小无关。RECK基因及MMP-9基因在肝癌组织中的表达呈负相关(P=0.019)。结论RECK与MMP-9在肝癌组织中的表达呈负相关;MMP-9及RECK基因在肝癌的进展中可能起重要作用。

RECK基因在前列腺细胞株中的表达及其与MMP-2的关系

目的检测RECK基因在不同前列腺细胞株BPH-1、DU-145、LNCap以及PC-3中的表达,探讨其表达差异及其与基质金属蛋白酶2(MMP-2)的关系。方法应用RT-PCR技术及Real-time PCR技术检测4种不同前列腺细胞株中RECK基因及MMP-2 mRNA的表达;应用Westernblot检测不同前列腺细胞株中RECK基因的表达。结果前列腺癌细胞株DU-145、LNCap以及PC-3中RECKmRNA的表达较良性前列腺增生细胞株BPH-1中明显降低(P<0.01),MMP-2mRNA表达则明显升高。DU-145、LNCap以及PC-3细胞株中RECK基因的表达较正常组织明显降低。结论RECK基因在前列腺癌中的表达量明显下降,而MMP-2的表达量明显升高,RECK基因可能通过抑制MMP-2的表达起到抑癌基因的作用。

RECK基因与基质金属蛋白酶-2相关性在早孕滋养细胞侵袭调控中的作用

目的:探讨RECK基因与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)相关性在早孕滋养细胞浸润调控中的作用。方法:分别采用免疫组化、Westernblot法、明胶酶谱法检测52例正常妊娠(早孕组27例、足月妊娠组25例)胎盘组织中RECK表达定位、蛋白含量及MMP-2的活化比例。结果:免疫组化提示早孕、足月妊娠均有RECK蛋白表达,其主要表达在细胞滋养细胞、合体滋养细胞的胞膜和胞质。RECK表达随孕周增加而增强,早孕组RECK表达明显低于足月妊娠组(P<0.05),且在具有侵袭力的早孕锚定绒毛的细胞柱上RECK表达呈弱阳性;Westernblot检测亦显示早期妊娠RECK蛋白质含量显著低于足月妊娠(P<0.05));明胶酶谱示MMP-2的活化比例则相反,早孕组MMP-2活化比例明显高于足月妊娠组(P<0.05)。结论:MMP-2活性的表达变化与滋养细胞浸润活性呈正相关,而肿瘤抑制基因RECK的表达变化与之呈负相关,MMP-2与RECK基因相互作用在滋养细胞浸润活性调控中可能起重要作用。

前列腺癌组织中RECK基因的表达及其与基质金属蛋白酶-2的关系

目的 通过检测RECK基因及基质金属蛋白酶 (MMP 2 )在前列腺癌组织及正常前列腺中的表达 ,探讨RECK基因在前列腺癌发生及转移过程中的作用。方法 抽取组织总RNA ,采用RT PCR法检测RECK及MMP 2mRNA的表达 ;抽取组织总蛋白 ,采用Westernblot法检测RECK蛋白的表达。结果 前列腺癌组织RECKmRNA的含量明显低于正常组织 (P <0 .0 1) ,MMP 2mRNA含量则明显升高 (P <0 .0 1)。前列腺癌组织中RECK蛋白的表达明显低于正常组织 (P <0 .0 5 )。结论 RECK基因可抑制MMP 2的表达 ,从而抑制前列腺癌的发生及转移 ,是一种抑癌基因。

RECK基因在消化系统肿瘤中作用的研究进展

RECK（reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs）基因是1998年日本学者Takahashi等[1]发现的一种新的肿瘤抑制基因,其具有独特的抑制基质金属蛋白酶表达与活性的功能。近年来,研究显示RECK基因参与了许多肿瘤的发生和发展,如在口腔肿瘤、肾肿瘤、子宫肿瘤、

RECK基因在恶性肿瘤浸润和转移中作用的研究进展

由于恶性肿瘤对周围组织的浸润和其它器官的转移,现有的治疗手段（手术、化疗、放疗）难以奏效,治疗困难,病死率高。Ahmedin等[1]在2010年一项基于国立癌症研究所、疾病预防控制中心、北美癌症登记协会和国家卫生统计中心数据的一篇报道中指出,

重组腺病毒介导RECK基因在大肠癌细胞中的表达及抑制癌细胞浸润能力的实验研究

目的 研究重组腺病毒介导RECK基因转染大肠癌细胞后基因的表达情况,并观察转染细胞浸润能力变化。方法 构建了RECK基因的复制缺陷型重组腺病毒载体adRECK ,以adRECK转染大肠癌癌细胞株后,用RT PCR法检测RECK基因在大肠癌中的表达。并用Boyden小室测试转染细胞的侵袭性。结果 RECK基因在转染细胞中有效的表达。被转染细胞浸润能力明显下降。结论 重组腺病毒介导RECK基因能够在大肠癌细胞中有效的表达,转染病毒的大肠癌浸润能力明显下降。

幽门螺旋杆菌感染对胃上皮细胞RECK基因的影响

目的研究幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染对胃上皮细胞(GES-1)RECK基因启动子区域的甲基化以及mRNA表达水平的影响,并探讨其可能的致癌机制。方法用培养的Hp感染GES-1细胞0～144h。采用甲基化特异性聚合酶链式反应法检测RECK基因启动子区域的甲基化情况;逆转录PCR检测RECK基因mRNA水平;Westernblot检测核转录因子(NF-κB)的激活情况,并观察用NF-κB特异性抑制剂PDTC处理后的RECK的mRNA水平。结果 Hp感染GES-1细胞0～72h不能诱导RECK基因甲基化,感染96h后GES-1细胞内出现了明显的RECK基因甲基化,同时能降低RECK基因mRNA水平。Hp感染24h后能激活其NF-κB,24～72hNF-κB活性水平无明显改变。感染96h后NF-κB的活性有所增强,NF-κB特异性抑制剂PDTC能上调RECK基因的表达。结论 Hp感染通过诱导RECK基因启动子区域的甲基化,促进NF-κB激活,降低RECK基因的表达,这可能是Hp致胃癌的可能机制之一。

RECK基因与基质金属蛋白酶-2、9在腮腺多形性腺瘤中的表达及意义

目的通过免疫组化方法研究RECK基因及基质金属蛋白酶-2、(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9、(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)在腮腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)初发、复发及恶变中的表达及其意义。方法收集2004年至今,新疆医科大学第一附属医院颌面外科收治并经手术治疗的腮腺PA标本50例,其中初发36例,恶变7例,复发7例和10例正常腮腺组织(初发组中远离腮腺肿物的正常腮腺组织)。通过免疫组织化学方法检测RECK、MMP-2和MMP-9在各组标本中的表达,并采用半定量方法进行计量。对RECK与MMP-2及MMP-9在各组中的表达采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 MMP-2及MMP-9在正常组与复发组差异有统计学意义(P<0.05),正常组与恶变组差异有统计学意义(P<0.05),初发组与复发组差异有统计学意义(P<0.05),初发组与恶变组差异有统计学意义(P<0.05)。RECK与MMP-2、MMP-9在各个组的表达都呈负相关(r=-0.887,P<0.05;r=-0.844,P<0.05)。结论 RECK基因与MMP-2及MMP-9在腮腺PA复发、恶变中的表达呈均呈负相关,RECK基因可能通过调控MMP-2及MMP-9参与PA的浸润、复发和恶变的过程,这对于判别肿瘤侵蚀性和预后指标是极有可能。

亚砷酸诱导人鼻咽癌细胞RECK基因表达及其去甲基化作用观察

目的探讨亚砷酸诱导鼻咽癌细胞株CNE-2Z中RECK基因的表达情况。方法体外培养CNE-2Z细胞,加入0.50、1.00、2.00、4.00μmol/L亚砷酸处理后,利用台盼蓝染色检测其对CNE-2Z细胞生长抑制情况,流式细胞术检测内侧细胞周期的改变;并用甲基特异性PCR检测亚砷酸处理前后RECK基因的甲基化情况,RT-PCR和W esternblot分别检测RECK基因的mRNA和蛋白水平。结果 0.50~4.00μmol/L亚砷酸能抑制CNE-2Z细胞的增殖,不同浓度亚砷酸处理24~72 h后,IC50值分别为（1.47±0.04）、（1.04±0.05）、（0.47±0.06）μmo/L。亚砷酸能使CNE-2Z细胞阻滞于S期和G2/M期;另外,随着亚砷酸浓度的增高,RECK基因甲基化水平逐渐减弱,且非甲基化RECK逐渐增强,并能促进RECK基因mRNA和蛋白的表达（P均〈0.05）。结论亚砷酸能促进CNE-2Z细胞RECK基因去甲基化,并提高其表达水平,从而发挥抑制细胞增长的效应。