精神分裂症患者外周血液中Reelin蛋白的表达

目的探讨Reelin蛋白与精神分裂症的关系。方法将89例精神分裂症患者作为精神分裂症组,89例健康者作为对照组,采用Western blot检测其外周血Reelin蛋白的表达。结果精神分裂症组患者外周血Reelin蛋白表达水平(0.66±0.27)显著低于对照组(1.01±0.23)(P<0.05)。精神分裂症组男、女性患者Reelin蛋白表达水平分别为0.66±0.22、0.66±0.26,二者差异无统计学意义(t=0.181,P>0.05),对照组男、女性受检者Reelin蛋白表达水平分别为1.01±0.25、1.02±0.26,二者差异无统计学意义(t=0.201,P>0.05)。结论 Reelin蛋白表达的降低与精神分裂症有关。

小鼠小脑片层化过程中神经元迁移及reelin的可能调节作用

目的：观察小鼠小脑皮质片层化过程细胞迁移,探讨片层化、细胞迁移和reelin蛋白之间的关系。方法：不同年龄的小鼠172只,应用免疫荧光、Nissl和HE染色法对小脑形态结构及片层化、细胞迁移情况进行观察。结果：（1）小脑片层化：E15-E16的后脑主要由神经上皮构成,P0时小脑皮质基本形成了外颗粒层、分子层、浦肯野细胞层和颗粒层,P5时浦肯野细胞层形成2~3层细胞,分子层仍有大量细胞。P20时基本形成了小脑的典型三层结构。（2）细胞迁移过程：浦肯野细胞大约在E18时开始迁移,至P7时基本完成迁移,胞体形成均一的1~2层细胞结构。同时,小年龄时NeuN阳性细胞主要见于内颗粒层和外颗粒层,P7后阳性细胞只定位在内颗粒层,迁移基本停止。（3）野生鼠（WT）和reeler小鼠比较：约P14时,WT小鼠小脑形成分子层、浦肯野细胞层及颗粒层。但是在reeler小鼠,小脑分叶不良,浦肯野细胞未迁移至目的地,排列紊乱;内颗粒层（GL）细胞分布松散、不均一。结论：在小鼠小脑的片层化形成过程中,Reelin蛋白可能参与神经细胞增殖和迁移的调控过程。

Reelin信号通路在大脑新皮质形成中的作用

人类大脑皮层发育过程中,大量神经细胞从靠近脑室的增殖区产生并向软脑膜方向迁移,最终形成与人类许多高级功能相关的6层大脑新皮质结构,Reelin-Dab1信号通路在神经细胞迁移中起到了关键的作用。Reelin结合于迁移细胞膜上的极低密度脂蛋白受体(very lowlipoprotein recep-tor,VLDLR)和载脂蛋白E受体2(apolipoprotein E receptor2,ApoER2),磷酸化胞浆内的衔接蛋白disabled1(Dab1),继而与下游信号分子如细胞骨架蛋白等相互作用,指导皮层神经元的正确迁移和定位。本篇综述讨论了Reelin-Dab1信号通路在人类新皮质形成过程中的作用及近几年的研究新进展。

不同Reelin基因型小鼠海马结构组织学差异

目的通过对不同Reelin基因型小鼠海马区组织学结构的比较分析,为Reelin在海马结构形成中的作用提供依据。方法选择杂合子Reelin小鼠繁殖后代,在出生后10d进行基因型鉴定,设Reelin+/+、Reelin+/-和Reelin^-/-3组,每组3只小鼠。鉴定后的小鼠通过4%多聚甲醛心脏灌注后剥离全脑,通过多聚甲醛固定、蔗糖脱水后冷冻切片,采用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)为细胞核染色,用免疫荧光标记T-box brain gene 1(Tbr-1)、神经元核抗原(Neu N)和GFAP特异性表达的细胞,光学显微镜下观察、摄片后对结果进行分析。结果从DAPI染色的细胞核及Tbr-1、Neu N和GFAP标记的细胞结构可以看出,Reelin+/+型小鼠和Reelin+/-型小鼠海马区都具有相似的结构,但将Reelin+/+和Reelin^-/-型小鼠相比较,Reelin^-/-型小鼠海马结构模糊,齿状回细胞向门区扩散,海马本部的细胞层结构紊乱,出现密集双细胞带,GFAP标记细胞减少。结论 Reelin缺失表达对小鼠大脑正常结构的形成具有明显的影响。在Reelin表达缺失后海马区齿状回细胞分布弥散,海马本部细胞层的分布紊乱,胶质细胞及纤维分布减少。

Reelin基因单核苷酸多态性与汉族儿童孤独症的关联分析

目的探讨Reelin基因单核苷酸多态性与汉族儿童孤独症的关系。方法收集232例汉族孤独症患者和283名汉族正常对照,其中有165个孤独症核心家系(患者及其父母),采用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测Reelin基因上4个单核苷酸多态位点(rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559),进行病例-对照关联分析及以核心家系为基础的传递不平衡检验(TDT)。结果患者组和对照组之间Reelin基因的4个多态位点的等位基因及基因型频率的差异均无统计学意义(P>0.05),rs736707-rs2229864位点的TC单体型频率在两组间的差异有统计学意义(2=4.31,P=0.04),但经置换检验校正后差异无统计学意义(P=0.19);TDT分析未发现在亲代和子代间4个多态位点的等位基因及单体型的显著不平衡传递(P>0.05)。结论本研究未发现Reelin基因与汉族儿童孤独症存在关联。

首发精神分裂症患者外周血Reelin基因甲基化检测

目的通过精神分裂症患者外周血中Reelin基因启动子区DNA甲基化状态的研究,探讨DNA甲基化与精神分裂症的关联。方法收集精神分裂症患者76例（患者组）和健康对照者60例（健康对照组）,采用甲基化特异性PCR方法检测Reelin基因启动子区DNA甲基化状态。结果患者组甲基化阳性率为78.95%（60例）,健康对照组甲基化阳性率为35%（21例）,两组差异有统计学意义（χ2=4.971,P=0.026）;Logistic回归分析显示,Reelin基因甲基化与精神分裂症有关（OR=13.084,95%CI：5.079-26.308）。结论 Reelin基因启动子区DNA甲基化与精神分裂症有关,精神分裂症患者外周血中Reelin基因启动子区DNA呈超甲基化状态,Reelin基因DNA甲基化是精神分裂症的危险因素。

结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用

探讨一种由结肠癌细胞表达的细胞外基质Reelin在淋巴结转移中的作用。构建了99例结肠癌及其癌旁组织的组织芯片进行免疫组织化学染色,探测其表达强度并结合临床资料进行分析。结果显示,Duke’s A,B,C,D分期与结肠癌细胞Reelin表达强度无关,结肠癌细胞Reelin表达强度与其淋巴结转移潜能相关,结肠癌细胞Reelin表达强度每增加一个单位,其转移进入淋巴结的能力将增加3.523倍。结肠癌细胞表达Reelin与其淋巴结转移密切相关,Reelin可以作为结肠癌淋巴结转移预测的一个新指标。

reelin相关基因研究进展

在脑发育过程中,新产生的神经元由内向外从脑室附近向脑膜迁移,即新形成的神经元要越过先形成的神经元最后定位于皮层的外表面,由此形成了大脑皮层、小脑皮层和海马等特有的分层结构。当reelin、VLDLR、ApoE R2和Dab1基因突变时,细胞迁移及定位方向发生改变,各皮层的细胞构筑有明显缺陷,动物出现共济运动不良。信号传导研究发现reelin与受体VLDLR、ApoE R2和整合素结合后,促使Dab1磷酸化,启动信号传导系统,调节了细胞与细胞以及细胞与基质之间的黏附分子作用,与神经元的正确迁移以及大脑的正常发育有关。当此信号传导中任何一个元件发生错误便可能导致精神神经系统疾病。

首发精神分裂症与reelin和GluR6基因多态性的关系

目的探讨中国北方汉族人群离子型谷氨酸受体-6(GluR6)和颤蛋白(reelin)基因多态性与首发精神分裂症是否关联。方法随机选取234例首发精神分裂症患者,以237例健康人作对照。用full Cold-PCR联合限制性片段长度多态性(RFLP)技术,检测GluR6基因外显子15rs2227283(G/A碱基改变)和reelin基因外显子6rs84446(A/G碱基改变)的单核苷酸多态性(SNP)。结果 reelin基因rs84446多态性,在女性病例组和对照组间基因型分布频率存在显著性差异(χ2=6.236,υ=2,P=0.044),而等位基因分布频率无显著性差异(χ2=0.054,υ=1,P=0.932);在男性病例组和对照组间基因型和等位基因分布频率均无显著性差异;GluR6基因rs2227283多态性(χ2=6.009,υ=1,P=0.015)与精神分裂症显著相关联。结论在中国北方汉族人群中,reelin基因rs84446多态性可能是女性首发精神分裂症一个危险因素。GluR6基因rs2227283多态性可能与首发精神分裂症有关联。

Reelin与小脑发育——Notch1信号通路的调节作用

目的探讨Reelin在小脑放射状胶质细胞、神经干细胞和普肯耶细胞迁移和分布中的作用,并探讨Notch信号通路在其中的作用。方法取WT小鼠和reeler小鼠胚胎9d至生后60d的脑部共148例,运用免疫荧光技术检测两组小鼠小脑发育中放射状胶质细胞、神经干细胞、普肯耶细胞及激活型Notch1受体的表达。结果Reeler小鼠小脑发育中放射状胶质细胞极性紊乱导致迁移阻滞于内颗粒层,过早分化,分子层中数量减少(P<0.01);Sox2阳性的干细胞启动迁移较慢,随后未得到适当的终止信号越过普肯耶细胞层进入外颗粒层,野生型小鼠该细胞并不迁移进入外颗粒层;普肯耶细胞多数不能迁移至分子层大量阻滞于内颗粒层中形成细胞团;激活型的Notch1受体在reeler小鼠小脑中表达减少。结论 Reelin在小脑神经干细胞、胶质细胞、普肯耶细胞发育和片层化分布中有重要作用,并且Notch1信号通路参与Reelin介导的小脑发育。

Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学观察

目的探讨小鼠室管膜下区(SVZ)的神经干细胞孵育成熟以及沿喙端迁移流(RMS)切线迁移至嗅球(OB)的过程,尤其是Reelin对细胞迁移和细胞分化的影响。方法选用野生型(WT)小鼠50只和纯合reeler小鼠23只胚胎16 d至生后90 d的各年龄点小鼠大脑,应用尼氏染色、免疫荧光染色、墨汁灌注及电子显微镜技术标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系,比较两组小鼠RMS的发育情况。结果胚胎后期至出生早期,在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网,它们相互联系构成SVZ神经干细胞孵育的血管龛(niche);神经干细胞在niche中孵育成熟后可以进入RMS,切线迁移至嗅球,到达嗅球后转变为放射状迁移,分化为各种神经元整合入嗅球;神经干细胞在RMS的迁移过程中,放射状胶质细胞协同血管为其提供支架引导;reeler小鼠也能形成RMS,但形态有所改变,主要在嗅球处,神经干细胞失去规律排列,呈散乱分布。结论室管膜下区的niche是神经干细胞的主要来源;血管协同放射状胶质细胞为RMS中的神经干细胞提供支架引导作用;作为调节细胞迁移的重要信号,Reelin可以通过其交互作用影响血管的发育,Reelin缺失导致嗅球处神经干细胞放射状迁移的转变障碍。

Reelin在中枢神经系统进化过程中的作用

目的探讨Reelin在中枢神经系统进化过程中所起的作用及其调节机制。方法取Reelin基因缺失小鼠(Reeler)和野生小鼠(WT),胚龄16d(E16)至出生30d(P30)各年龄点,共192例。利用免疫荧光技术与5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)法,检测两组小鼠中大脑皮质、海马、脊髓发育过程中放射状胶质细胞、神经干细胞、增殖细胞及星形胶质细胞的表达,并使用Nissl染色技术,分别对脊髓、海马、大脑皮质的组织学特征进行观察。结果脊髓发育过程中,神经细胞仅发生1次迁移,并形成套层,套层进而衍变成呈H型脊髓灰质。与野生型小鼠相比,同年龄Reelin基因缺失小鼠(Reeler小鼠)在形态结构、细胞迁移方面与野生型小鼠基本类似,但增殖的神经细胞数目明显减少。在第1次迁移的基础上,海马的形成还需经历第2次神经细胞迁移,最终形成了双"C"字型结构的锥体细胞层和颗粒细胞层;与野生型小鼠相比,在形态上Reeler小鼠锥体细胞层明显扩散劈裂为两层,齿状回颗粒层细胞明显增殖并向门区迁移以致颗粒层与门区的界限消失,形成鼓槌状结构;同时,增殖的神经细胞数目减少,放射状胶质细胞排列紊乱。新皮质的形成也需经历两次迁移,但第2次神经细胞迁移所形成的皮质板按照由内向外的迁移方式继续发育为界限清晰的6层结构;与野生型小鼠相比,同年龄点Reeler小鼠新皮质片层化结构紊乱,增殖的神经细胞和放射状胶质细胞数目均有所减少,并且放射状胶质细胞排列紊乱。结论脊髓、海马和新皮质分别代表了进化过程中的管状神经、古皮质和新皮质,Reelin可能是皮质进化的关键分子。Reelin参与了第2次迁移以及新皮质皮质板的继续分层,Reelin缺失可以引起上述皮质形态和结构的变化,尤其是古皮质和新皮质。

跑台训练对脑缺血大鼠脑组织Reelin、PI3KCA及突触素表达的影响

目的:观察脑缺血大鼠跑台运动训练后神经功能恢复情况及磷脂酰肌醇-3-激酶α亚单位(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform,PI3KCA)、Reelin及突触素表达的变化。方法:选取健康雄性SD大鼠54只,随机分为假手术组、缺血对照组及运动训练组。采用线栓法大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)方法造成局灶性脑缺血模型。运动训练组于造模后第3天进行16 d的跑台训练(15 m/min,每日30 min)。运用改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS)对3组动物进行神经功能评分。采用HE染色观察各组海马神经细胞形态;运用免疫组化方法检测各组Reelin及PI3KCA阳性细胞数;Western blot检测各组缺血皮质Reelin及突触素蛋白水平。结果:MCAO术后19 d,运动训练组mNSS评分较缺血对照组明显降低(P<0.05)。HE染色显示,假手术组海马神经细胞结构完整;缺血对照组海马神经细胞出现异常变化,细胞体积缩小,核不规则,细胞排列散乱,大量变性;运动训练组海马神经细胞结构基本正常,细胞排列尚整齐。免疫组化显示,运动训练组大鼠缺血侧脑组织Reelin及PI3KCA阳性细胞数均高于缺血对照组,差异有统计学意义(18.27±4.03 vs.7.53±2.03,P<0.01;10.27±1.62 vs.5.40±1.84,P<0.01)。Western blot检测运动训练组Reelin及突触素蛋白表达明显高于缺血组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);而缺血组较假手术组Reelin及突触素蛋白的表达水平虽增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:跑台运动训练可改善局灶性脑缺血大鼠神经功能评分,上调脑组织Reelin、PI3KCA及突触素的表达,促进脑缺血后的神经功能恢复。

细胞外基质糖蛋白Reelin在多发性骨髓瘤病人中的表达及其与预后的关系

目的:探讨细胞外基质糖蛋白Reelin(RELN)在多发性骨髓瘤中的表达及其与预后的相关性。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离多发性骨髓瘤病人骨髓样品中的单个核细胞,利用流式细胞术分选CD138^+细胞并通过实时定量PCR检测细胞中Reelin的表达水平,进一步将骨髓瘤病人按照RELN的表达分为高表达和低表达2组,并用统计学方法分析RELN的表达量与临床检验数据的相关性。结果:RELN的高表达与CD138^+细胞的百分比、骨髓瘤病人的无进展生存期和总生存期显著相关,但与DS分期(P>0.05)和ISS分期(P>0.05)无显著相关。RELN高表达组有更高的血清M蛋白、尿酸和血清钙水平,较低的血红蛋白以及更多的异常基因(包括RB1缺失、1q21扩增、Ig H重组、P53缺失、D13S319缺失)。结论:Reelin可能在多发性骨髓瘤的发生发展中起重要作用。

Reelin在阿尔茨海默病小鼠发病中的作用

目的探讨阿尔茨海默病(AD)小鼠病理改变、Reelin和Notch1的表达变化及DNA甲基化状态的改变,为深入了解阿尔茨海默病的发病机制提供理论依据。方法以淀粉样蛋白前体(APP)/早老素-1(PS1)双转基因小鼠为AD模型、同窝野生型小鼠为对照组,两组小鼠共计184只,利用高尔基染色、透射电子显微镜、免疫荧光染色、免疫印迹等技术检测AD模型鼠病理改变、Reelin和Notch1的表达变化及DNA甲基化状态的改变。结果AD小鼠在约6个月时开始出现淀粉样斑沉积、神经元纤维出现缠结等病理改变;AD小鼠发病后,星形胶质细胞和小胶质细胞在淀粉样斑周围聚集增多,随病情加重逐渐增加;Reelin在淀粉样斑周围聚积形成斑块,随病情加重逐渐增多;全长Notch1受体和其活性Notch细胞内片段(NICD)在AD鼠脑部表达减少;AD小鼠脑部甲基化状态减弱,淀粉样斑中有DNA片段,但甲基化状态消失,DNA甲基转移酶1(Dnmt1)和Dnmt3a在AD小鼠中表达减少。结论 AD小鼠脑内淀粉样斑沉积,促使胶质细胞聚集、Reelin聚积形成斑块、Notch1受体表达下降及甲基化状态减弱,进一步加剧AD神经功能紊乱。

Reelin可增强海马神经元的多巴胺D1受体表达

目的研究Reelin对小鼠海马神经元多巴胺D1受体的调控及其是否依赖Reelin受体(ApoER2/VLDLR)发挥调控作用。方法原代分离培养新生C57BL/6J小鼠海马神经元,将培养5 d后的神经元随机分为6组:空白对照组、CR-50组(CR-50),EDTA组(EDTA),Reelin组(Reelin),Reelin拮抗组(Reelin+CR50)和Reelin受体拮抗组(Reelin+EDTA)。分别加入Reelin、CR-50、EDTA进行共培养,其后利用免疫荧光的方法观察Reelin受体ApoER2、VLDLR和多巴胺D1受体在海马神经元上的定位以及各组多巴胺D1受体的变化。结果 (1)Reelin受体ApoER2、VLDLR均与多巴胺D1受体在海马神经元上共定位;(2)Reelin拮抗组的多巴胺D1受体荧光强度(0.215±0.09)较Reelin组(0.663±0.15)减弱(P<0.01);(3)Reelin受体拮抗组的多巴胺D1受体荧光强度(0.687±0.11)与Reelin组(0.666±0.15)无明显差异(P>0.05)。结论Reelin可增强小鼠海马神经元上的多巴胺D1受体的表达,Reelin上调多巴胺D1受体的作用并不是依赖Reelin的经典受体ApoER2、VLDLR,其调控机制有待进一步研究。

Reelin对突触可塑性的调节作用

Reelin是一种细胞外基质糖蛋白,以往的研究认为其主要参与中枢神经系统的发育过程,在神经元的有序排列中起着重要的作用。近来的研究发现,在发育成熟的神经组织中reelin也有较高的表达,并且对突触的功能产生着重要的调节作用。谷氨酸盐受体表达变化及其亚单位重组是突触可塑性调节的重要形式,在学习记忆和疼痛信号的传递等重要的病理生理过程中起着重要作用。本文就reelin调节突触可塑性变化,尤其是调控谷氨酸盐受体的相关机制做一综述。

Reelin在不同组织和器官中的研究

Reelin是一种分泌型细胞外基质蛋白,在不同的组织和器官中reelin的表达是不同的。Reelin在精神分裂症、双相情感障碍、孤独症和重型抑郁症患者的脑中是降低的,也有报道指出了reelin在某些无脑回的常染色体隐性遗传患者的血清中几乎消失。而最近的一些研究发现r,eelin在成人外周组织中也有表达。由于reelin在控制细胞迁移中有作用,它可能在某些癌症的侵袭和转移中作为一个重要的观察指标。

Reelin在精神疾病中的研究进展

Reelin蛋白在调节哺乳动物大脑神经元发育中起着重要作用,多项研究表明Reelin基因可能参与多种精神疾病的发生和发展,本文就目前Reelin蛋白及其编码基因在精神疾病中的研究进行综述。

Reelin在小鼠穿通纤维及大脑连合纤维寻径中的作用

目的通过对比野生型小鼠和Reeler小鼠穿通通路及连合纤维的发育,探讨Reelin在穿通通路及连合纤维寻径中的作用。方法共取野生型小鼠(WT)和Reelin基因缺失小鼠(Reeler),从胚龄16 d(E16)至出生7d(P7)各年龄点,共123例。采用Di I/Di O离体示踪技术对不同年龄点的WT小鼠及Reeler小鼠的穿通通路及连合纤维进行顺行和逆行示踪。结果 1.穿通通路主要由内嗅皮质第Ⅱ层和第Ⅳ层神经元所发出,在E16时进入海马腔隙分子层,P1时穿通纤维出现在齿状回,P7时穿通纤维形成致密纤维束终止于齿状回外分子层2/3;Reeler小鼠的穿通通路出现明显的发育延迟并且投射纤维分布紊乱;2.穹隆连合纤维主要由海马CA3锥体细胞,门细胞及内嗅皮质Ⅱ~Ⅳ层神经元发出,在E16时形成;Reeler小鼠穹隆纤维与WT小鼠在发育中无明显区别;3.胼胝体连合纤维主要由新皮质Ⅱ~Ⅳ层神经元及纹状体神经元所投射,在E18时形成并向对侧皮质进行纤维投射,并且投射部位出现对称分布,P3时一侧胼胝体纤维到达对侧纹状体。Reeler小鼠胼胝体投射的皮质神经元向对侧新皮质投射出现延迟。结论 Reelin可能是穿通通路及连合纤维发育的导向因子。Reelin的缺失导致穿通通路发育延迟,并且连合纤维在皮质的细胞来源及穿通通路细胞来源紊乱。