REGgamma基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋白酶体激活因子REGgamma(REGγ)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的作用。方法:构建真核表达重组体PcDNA3.1-REGγ,通过脂质体转染将REGγ基因导入MCF-7,以G418(800mg/L)连续筛选获得稳定高表达REGγ基因的细胞株,以转染空载体和未转染细胞作为对照。分别利用MTT法及免疫细胞化学方法检测各组细胞PCNA的表达分析REGγ基因对细胞增殖的影响;以Caspase-3分光光度法及Annexin V-FITC的流式细胞仪(FCM)来检测细胞凋亡的变化;以透射电镜(TEM)观察细胞超微结构的改变。结果:获得稳定转染且高表达REGγ的细胞株。经Western Blot检测转染REGγ基因的细胞(实验组),其REGγ蛋白表达明显高于对照组细胞(P<0.05);未转染组、空载体组和实验组细胞的倍增时间分别为34.6、35.1、26.7h,提示实验组细胞倍增时间缩短;MTT法绘制生长曲线提示实验组细胞生长明显加速;免疫细胞化学检测PCNA结果显示,未转染组、空载体组和实验组细胞的染色灰度值分别为89.61±14.32、87.95±16.38、133.47±8.14,表明实验组细胞PCNA表达明显增强(P<0.01);Caspase-3分光光度法检测显示,实验组细胞的OD值普遍低于对照组(P<0.05);Annexin V-FITC的FCM检测显示,实验组细胞的凋亡率明显低于对照组(P<0.01);TEM观察实验组细胞表现为核仁肥大,线粒体、高尔基体丰富或扩张,未见凋亡小体形成。结论:REGγ基因具有促进乳腺癌MCF-7细胞增殖并抑制其凋亡的作用。

REGgamma在胃癌组织与不同分化胃癌细胞株中的表达及其临床意义

目的:探讨REGgamma(REGγ)在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达水平及其临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测70例胃癌组织和30例正常胃组织中REGγ/蛋白的表达水平,并分析其与胃癌生物学行为的关系:分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测正常胃粘膜细胞株(GES-1)、胃癌高分化(MKN-28)、中分化(SGC-7901)和低分化(BGC823)细胞株中REGγ mRNA转录情况和蛋白表达水平。结果:免疫组化结果表明在胃癌组织中,REGγ蛋白的表达阳性率(74.3%)显著高于正常胃粘膜组织(40.0%,P<0.01),且表达与肿瘤的大小(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、浸润程度(P<0.01)及远处转移(P<0.05)相关;RT-PCR结果表明在正常胃粘膜细胞株及胃癌高、中、低分化细胞株中,REGγ mRNA表达水平逐渐增强,分别为0.459±0.079、0.588±0.118、0.715±0.066、0.873±0.099(P<0.01),Western blot结果表明在正常胃粘膜细胞株及胃癌高、中、低分化细胞株中,REGγ蛋白表达水平逐渐增强,分别为0.712±0.065、1.176±0.185、1.533±0.127、2.061±0.398,结果差别有统计学意义(P<0.05)。结论:REGγ在正常胃粘膜组织和胃癌组织中呈一定比例的阳性表达,其表达水平与胃癌癌肿大小、是否有淋巴结转移、分化程度、浸润程度及是否远处转移等肿瘤的恶性生物学行为有关。REGγ表达与胃癌的分化程度相关,随着细胞分化程度的降低其表达逐渐增强,检测REG7 mRNA及蛋白的表达可望成为胃癌早期诊断和判断预后的分子指标之一。