原发性肝癌REIC/Dkk-3基因mRNA低表达及其意义

原发性肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一，病死率很高。Tsuji等从几种永生细胞系中发现一段新的REIC／Dkk-3基因序列表达明显下调，而在正常细胞系中表达正常，提示REIC／Dkk-3可能是一种新的抑癌基因。为探讨REIC／Dkk-3基因表达与人肝细胞癌的关系，本研究应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）对肝细胞癌癌灶及癌旁组织中REIC／Dkk-3基因mRNA的表达进行了定量检测，以探讨REIC／Dkk-3基因与肝癌发生发展、病理分型及肿瘤生物学行为之间的关系。

急性髓系白血病中医证型与Dkk-3、Wif-1基因甲基化水平相关性研究

目的:研究急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia,AML)患者不同中医证型与焦磷酸测序法检测的Dkk-3和Wif-1基因启动子甲基化水平的关系,比较不同证型Dkk-3和Wif-1基因甲基化水平与AML患者生存时间的差异,为AML中医辨证分型提供参考依据及评估预后。方法:选取45例2020年6月-2021年6月福建中医药大学附属人民医院血液病科门诊或住院初诊AML患者(病例组)和20例缺铁性贫血患者(对照组),比较焦磷酸测序法检测的两组Dkk-3、Wif-1基因甲基化表达水平差异,并比较组内气阴两虚证、瘀血痰结证、毒热炽盛证三种不同证型与Dkk-3和Wif-1基因启动子甲基化水平的关系,并以AML患者死亡或随访终点(1年)为终止时间点,比较各证型患者的生存时间差异。结果:AML患者中气阴两虚证者最多,瘀血痰结证者次之,毒热炽盛证者最少,各中医证型与性别、FAB分型、骨髓原始细胞比例的差异无统计学意义(P>0.05),但不同中医证型患者年龄的差异有统计学意义(P<0.05)。AML患者的Dkk-3、Wif-1基因甲基化表达水平均比对照组高,差异有统计学意义(P<0.01)。各证型AML患者Dkk-3基因甲基化表达水平的差异无统计学意义(P>0.05);各证型AML患者Wif-1基因甲基化表达水平的差异有统计学意义(P<0.05),气阴两虚证患者的表达水平最高,瘀血痰结证次之,毒热炽盛证最小。对AML患者进行随访,中位随访0.3~24个月,中位生存时间为(11.80±6.29)个月,各个证型患者总体生存时间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AML患者的Dkk-3、Wif-1基因甲基化阳性率较无恶性血液病患者高,Dkk-3、Wif-1基因甲基化可能与AML发病有相关性。AML患者中医证型与Wif-1基因甲基化表达有相关性,气阴两虚证、瘀血痰结证患者的Wif-1甲基化表达明显高于毒热炽盛证患者,其可能可以作为AML中医辨证分型的参考指标。各中医证型AML患者生存时间的差异无统计学意义(P>0.05),今后应采用大样本、多中心的临床试验来进一步验证中医证型与生存时间的相关性。

宫颈癌DKK-3基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的检测宫颈癌DKK-3基因启动子甲基化情况并研究其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR检测宫颈癌患者和健康女性宫颈活检组织或术后病理组织DKK-3基因启动子甲基化情况,比较其差异并分析宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化与临床病理因素的关系。结果宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率显著高于健康女性(P<0.05);宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率在年龄、吸烟史、酗酒史和病理类型中差异均无统计学意义(P>0.05),在HPV感染、分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和Figo分期中的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌患者DKK-3基因启动子甲基化率显著高于健康女性,且与病情及预后密切相关。

REIC/Dkk-3蛋白在肿瘤发生发展中的作用

REIC基因在永生化的细胞系和部分肿瘤细胞系中发现并且表达下调,在许多人的肿瘤组织中表达也减少.目前研究认为,REIC/Dkk-3表达下调可能与启动子的甲基化有关.异常REIC/Dkk-3表达所致细胞表型异常在恶性肿瘤发生和演进过程中发挥重要作用.细胞浆型和分泌型REIC与靶蛋白作用后启动细胞信号传导,但是REIC/Dkk-3的生物学功能尚未深入阐述.对REIC/Dkk-3的研究在理论上可以大大推动肿瘤病因学的发展,为肿瘤的诊断和治疗提供一个新的分子靶点,对提高肿瘤患者生存率和生存质量具有很大的促进作用.如果能研发REIC/Dkk-3抗肿瘤重组多肽及增强REIC/Dkk-3作用的化疗药物,也将为肿瘤患者治疗开辟新的途径和思路.本文就REIC/Dkk-3蛋白在肿瘤发生发展中作用进行综述.

Dkk-3在原发性肝细胞癌的表达及其临床意义

目的研究Dkk-3在原发性肝细胞癌的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学(SP)法检测该院普外科手术切除的80例原发性肝细胞癌肿瘤及癌旁正常组织Dkk-3表达,比较原发性肝细胞癌不同临床病理因素中Dkk-3表达的差异,分析Dkk-3表达与临床病理因素的相关性。结果癌旁正常肝组织Dkk-3表达评分[(10.1±2.6)分]显著高于肝癌组织[4.8±1.1)分],差异有统计学意义(P<0.01)。原发性肝细胞癌Dkk-3蛋白质表达在性别和年龄中的差异无统计学意义(P>0.05),肿瘤最大径越大、临床分期越晚及有转移时原发性肝细胞癌Dkk-3蛋白质低表达越低(P<0.05)。原发性肝细胞癌Dkk-3蛋白质表达与肿瘤最大径、临床分期及有转移呈负相关关系(P<0.05)。结论 Dkk-3在原发性肝细胞癌中呈低表达状态,可作为原发性肝细胞癌病情及预后评估的标志物。

口腔鳞状细胞癌中Dickkopf-3基因的表达及甲基化状态

目的:探索Dickkopf-3(DKK-3)基因的表达水平及其启动子区甲基化状态与口腔鳞癌发生的关系。方法:应用PT-PCR及MSP-PCR法检测DKK-3在51例口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织中的表达及其启动子区的甲基化状态,SPSS13.0统计分析DKK-3与临床病理特征间的关系。结果:DKK-3在口腔鳞癌中的表达量低于对照组(t=-12.580,P<0.05)。DKK-3启动子区在口腔鳞癌中的甲基化率高于对照组(χ2=19.273,P<0.05)。发生甲基化的口腔鳞癌DKK-3的表达量低于对照组(t=-2.817,P<0.05)。结论:DKK-3表达下调及其启动子区的高甲基化状态是口腔鳞癌发病的重要机制之一,启动子区的高甲基化可能是导致DKK-3转录沉默的主要原因。

胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3表达水平及其与临床病理特征的相关性研究

目的分析胃癌患者血清DKK-1、人附睾蛋白(HE)4、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)-1和淋巴细胞活化基因(LAG)-3水平及其与临床病理特征的关系。方法选取60例胃癌患者作为研究组,另选60例同期进行健康体检的体检者作为对照组。比较两组研究对象、不同临床病理特征胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1和LAG-3的表达水平,并分析胃癌患者预后的影响因素。结果研究组血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于对照组(均P<0.05)。不同TNM分期、胃癌细胞分化程度、淋巴结转移情况胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平差异均有统计学意义(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1水平均高于Ⅰ~Ⅱ期胃癌患者,血清LAG-3水平低于Ⅰ~Ⅱ期胃癌患者;胃癌细胞分化程度越高,患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1表达水平越高,血清LAG-3表达水平越低;伴有淋巴结转移胃癌患者的血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平均高于无淋巴结转移患者(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,TNM分期和血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3水平是胃癌患者死亡的独立危险因素(均P<0.05)。结论胃癌患者血清DKK-1、HE4、PARP-1、LAG-3呈高表达水平,其与胃癌的临床分期、淋巴结转移、胃癌细胞分化程度密切相关,均为胃癌患者死亡的独立危险因素。

急性髓系白血病中DKK-3和WIF-1甲基化状态和mRNA表达的研究

目的:研究DKK-3和WIF-1在急性髓系白血病(AML)患者中的启动子甲基化状态和mRNA表达情况及其临床意义。方法:用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例AML患者骨髓标本和20例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓标本中DKK-3和WIF-1启动子甲基化状态;用实时定量PCR检测上述标本中β-catenin、DKK-3和WIF-1mRNA表达情况,并分析其与临床资料及生存时间的关系。结果:AML组中DKK-3和WIF-1启动子甲基化率明显高于对照组(χ2=15.330,P<0.001;χ2=17.371,P<0.001),且与性别、年龄、临床分型无相关性。DKK-3和WIF-1 mRNA相对表达量在AML患者中依次为0.840±0.320和0.792±0.313,明显低于对照组的1.134±0.392和1.047±0.334(t=3.415,P=0.000;t=3.070,P=0.003)。AML患者骨髓标本β-catenin的mRNA相对表达量为0.756±0.304,高于对照组骨髓标本表达量0.342±0.105(t=5.943,P=0.001),且AML骨髓标本中DKK-3和WIF-1 mRNA相对表达量和β-catenin相对表达量呈均呈负相关性(r=-0.543;r=-0.562)。KaplanMeier生存曲线分析显示,DKK-3甲基化阳性组AML患者总体生存时间短于阴性组患者(χ2=3.957,P=0.042),而WIF-1甲基化阳性组AML患者总体生存时间亦短于阴性组患者(χ~2=4.520,P=0.029)。结论:AML患者中Wnt/β-catenin信号通路存在有异常激活,DKK-3和WIF-1启动子甲基化可能参与了Wnt通路激活及AML的发病过程并影响其总体预后。

REIC／Dkk-3基因对肾癌细胞786-0的影响及作用机制

目的探讨REIC／Dkk-3基因是否具有杀伤肾癌细胞786—0的作用及其机制。方法采用REIC／Dkk-3基因过表达载体（pEZ-M29-REIC／Dkk-3）转染786—0细胞，分别于转染24、48、72、96h后行细胞计数试剂盒（CCK-8）检测其对786—0细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪膜联蛋白V（AnnexinV）／碘化丙锭（PI）双染法检测其对786-0细胞诱导细胞凋亡的影响，PI单染法检测周期阻滞效应，Westernblot法检测凋亡和周期阻滞相关蛋白的表达。结果Western.blot和实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）结果显示转染REIC／Dkk-3基因后其表达量较对照组升高5倍多。CCK-8结果显示，随着作用时间的增加，786-0细胞的增殖抑制率逐渐增加，处理24、48、72、96h后对照组细胞存活率为92．0％、90．0％、84．0％、80．5％，REIC／Dkk-3过表达组分别为89．50％、73．75％、63．00％、58．50％，与空质粒组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。流式AnnexinV／PI双染法显示REIC／Dkk-3可诱导肾癌细胞凋亡，过表达组、空载体组、空白对照组凋亡率分别为28．5％、7．2％、0．6％，Westernblot结果显示REIC／Dkk-3可上调活化酪半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（cleaved—Caspase-3）和下调B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）的表达。细胞周期结果显示REIC／Dkk-3可诱导肾癌细胞发生G。期阻滞，过表达组、空载体组、空白对照组G，期比例分别为（69．90±3．40）％、（59．57±1．20）％和（52．57±1．20）％；Westernblot结果显示REIC／Dkk-3过表达可上调p21和下调细胞周期素D1（CyelinD1）。结论REIC／Dkk-3可抑制肾癌细胞786-0的增殖，可能是通过诱导发生细胞凋亡和G1期阻滞实现的。

Dickkopf-3在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的研究抑癌基因Dickkopf-3在非小细胞肺癌组织中的表达及其与肺癌临床指标间的关系,以探讨其在肺癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学技术检测Dkk-3蛋白在50例非小细胞肺癌和20例肺良性疾病组织中的表达,染色强度作半定量评分。结果 Dkk-3在非小细胞肺癌组织中阳性表达率为52%(26/50),而在肺良性疾病组织中阳性表达率为85%(17/20),并且Dkk-3在非小细胞肺癌组织中的表达水平显著低于肺良性疾病肺组织(P<0.05)。Dkk-3在Ⅲ、Ⅳ期肺癌组织中的阳性表达率显著低于Ⅰ和Ⅱ期中的表达,并且染色强度也相应低于Ⅰ、Ⅱ期;已有淋巴结转移的肺癌组织中Dkk-3阳性表达率及染色强度均显著低于无淋巴结转移的肺癌组织(P<0.05);Dkk-3在不同性别以及肺鳞癌和腺癌组织中的表达无明显差异(P>0.05)。结论 Dkk-3基因的低表达可能在非小细胞肺癌的发生发展中起一定作用,可能是一种潜在的肺癌抑癌基因。

膀胱癌患者血清DKK-1和DKK-3表达及其临床意义

目的:研究血清Dickko pf(DKK)-1和DKK-3蛋白在膀胱癌患者术前、术后及正常人中的表达情况,并进一步探讨其与膀胱癌临床病理特征之间的关系。方法:应用ELISA法检测40例膀胱癌患者术前及术后外周血清中DKK-1和DKK-3的表达情况,并与20例非肿瘤对照组患者相比较。相关性分析DKK-1和DKK-3水平之间的相关性,以及与患者临床病理特征的关系。结果:膀胱癌患者术前血清中DKK-1浓度明显高于术后及对照组患者;血清DKK-3浓度在膀胱癌患者术前和术后无明显改变,但术前、术后血清DKK-3浓度均明显低于对照组。DKK-1浓度与膀胱癌患者的临床病理特征不相关,DKK-3在高级别尿路上皮癌中的表达明显高于低级别尿路上皮癌。另外,DKK-1和DKK-3表达之间无相关性。结论:血清DKK-1和DKK-3水平与膀胱癌的发生关系密切,其中DKK-1有可能成为一种新的肿瘤标志物,而DKK-3下调可能参与了膀胱癌的浸润及转移。提示测定两蛋白表达可能有助于膀胱癌的诊断和术后预测。