circ-RELL1对脓毒症内皮细胞糖萼影响及其机制的研究

目的探讨circ-RELL1对脓毒症内皮细胞模型糖萼的变化及其机制。方法构建脓毒症细胞模型,分为正常组(C组)、脂多糖(LPS)组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)组;实时荧光定量核酸扩增(real-time quantitative PCR,qPCR)检测系统检测circ-RELL1表达水平,采用Western Blot检测各组细胞自噬标志蛋白(light chain3,LC3)Ⅰ/LC3Ⅱ比例和p62的表达水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测上清中糖萼成分变化,将circ-RELL1表达水平与糖萼成分做Pearson相关分析。结果qPCR结果显示,与正常组比较,LPS组circ-RELL1表达升高(P<0.05);与LPS组比较,3-MA组circ-RELL1表达升高(P<0.05)。Western Blot结果显示,与C组比较,LPS组LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值升高(P<0.05),p62表达降低(P<0.05);3-MA干预可使LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值及p62表达的变化程度降低(与LPS组比较,P<0.05)。ELISA结果显示,与C组比较,LPS组上清中糖萼成分明显增多(P<0.01);3-MA干预可使糖萼破坏减少(与LPS组比较,P<0.05)。相关分析结果显示,circ-RELL1表达水平与糖萼成分释放呈正相关,但相关性较弱。结论circ-RELL1可促进脓毒症内皮细胞糖萼分解,其机制可能与自噬调控有关。

circRNA_0001400/RELL1调控激活丝裂原激活蛋白激酶信号通路在卡波西肉瘤发生发展中的作用研究

目的探讨人环状RNA 0001400(hsa_circ_0001400)及其线性转录物RELL1在卡波西肉瘤(KS)发生发展中的作用机制。方法采用人KS相关疱疹病毒(KSHV)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并鉴定感染是否成功。取对数生长期HUVEC分为3组:HUVEC组(未感染的HUVEC)、KSHV+HUVEC组(0.5感染复数的KSHV感染HUVEC)、MAPK抑制剂组(0.5感染复数的KSHV感染HUVEC6 h后,再用1μmol/L MAPK抑制剂处理),细胞计数试剂盒(CCK8)和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖能力及凋亡情况。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹法检测HUVEC组与KSHV+HUVEC组细胞中hsa_circ_0001400及其线性转录物RELL1、鼠肉瘤病毒癌基因同源物(RAS)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的转录和蛋白表达水平。收集5对KS组织及瘤旁组织,并在KS组织样本中验证上述基因mRNA表达。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及t检验等。结果与未感染的HUVEC相比,感染KSHV 48 h后HUVEC变圆,生长更密集。感染KSHV的HUVEC可检出KSHV裂解激活基因ORF50与潜伏态基因LANA的mRNA表达,其表达水平均高于未感染的HUVEC(均P<0.001),KSHV成功感染HUVEC。在培养24~72 h内随培养时间延长,KSHV+HUVEC组细胞增殖率逐渐升高,而MAPK抑制剂组细胞增殖活力明显受到抑制;3组48 h时总凋亡率差异有统计学意义(F=673.98,P<0.001),且MAPK抑制剂组细胞总凋亡率明显高于KSHV+HUVEC组和HUVEC组(均P<0.001),而KSHV+HUVEC组与HUVEC组差异无统计学意义(P>0.05)。qRT-PCR结果显示,KSHV+HUVEC组hsa_circ_0001400、RELL1、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)、MAPK11、细胞外信号调节激酶(ERK)-2 mRNA表达量均高于HUVEC组(均P<0.05),而两组间ERK1 mRNA表达量差异无统计学意义(t=0.92,P=0.410)。Western印迹法检测显示,KSHV+HUVEC组RELL1、KRAS、MAPK11、ERK1、ERK2蛋白表达量均明显高于HUVEC组(均P<0.01)。KS组织中RELL1、ERK1、ERK2 mRNA表达量显著高于瘤旁组织(均P<0.05)。结论KSHV感染后,可能通过诱导hsa_circ_0001400及其线性转录物RELL1表达上调,激活MAPK信号通路,从而调控KS的发生发展。

RELL1的表达与结肠癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨RELL1的表达与结肠癌患者临床病理特征以及预后的关系。方法选择80例结肠癌组织及80例癌旁组织的组织芯片进行RELL1蛋白的免疫组织化学实验。比较RELL1蛋白不同表达水平与不同临床病理参数之间的关系,单因素和多因素Cox风险比例回归分析结肠癌患者生存的影响因素,Kaplan-Meier生存曲线分析RELL1表达与结肠癌患者生存率的关系,Log rank检验生存率差异。结果结肠癌组织中RELL1表达低于癌旁组织(P<0.05)。癌组织中RELL1的表达与TNM分期、N分期有一定相关性(P<0.05)。RELL1高表达的结肠癌患者3年总生存率(OS)高于RELL1低表达的结肠癌患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,RELL1低表达、高龄及高TNM分期是结肠癌患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论结肠癌组织中RELL1表达下调,RELL1低表达、高龄和高TNM期可导致患者不良结局。