大肠杆菌REPEC O103 ler基因缺失突变株的构建与免疫

目的 研究大肠杆菌致病岛LEE基因群中调节基因ler对细菌致病性和免疫原性的影响 ,评价基因缺失突变疫苗株的免疫效果 ,为人致病性和出血性大肠杆菌基因缺失突变疫苗的研制提供技术路线。方法 利用兔致病性大肠杆菌REPECO1 0 3为始发菌株 ,根据同源重组的原理 ,运用自杀性载体 pCVD442技术 ,敲除位于细菌染色体上的ler基因 ,构建ler基因缺失突变株 ,通过动物实验 ,检测基因缺失突变株的致病性和免疫保护作用。结果 构建了REPECO1 0 3ler基因缺失突变株 ,并证实ler基因细菌致病岛的正调控作用和对细菌生长的负调控作用。家兔实验研究表明 ,ler基因缺失突变株无致病性 ,但保留着良好的免疫原性。结论 首次揭示了ler调节基因与细菌致病性和免疫原性的关系 ,构建的REPECO1 0 3ler基因缺失突变株安全性好 ,具有良好的免疫保护作用 ,是理想的家兔的致弱疫苗候选株。

志愿者参与下国际预印本平台学术质量控制方法调研与启示——以arXiv与RePEc平台为例

【目的】探究志愿者在预印本平台学术质量控制中的角色与作用,为我国预印本平台建设提供参考。【方法】采用网络调查与案例研究法,调研并总结10余个国际知名预印本平台志愿者机制的发展现状。依据调研结果选取最具代表性的arXiv与RePEc作为研究对象,深度剖析志愿者机制的基础架构与组织功能对预印本平台学术质量控制的影响。【结果】国际预印本平台志愿者机制成熟度差异较大。arXiv与RePEc拥有权责清晰的志愿者工作机制架构、志愿者深度参与的多样化学术质量控制功能,但2个平台的志愿者所发挥作用的类型不同。【结论】志愿者是预印本平台质量控制体系的重要组成部分。我国预印本平台应广泛招募志愿者,逐步建立和完善志愿者机制;优化志愿者机制架构,明晰志愿者工作职能;借鉴国际经验,丰富志愿者参与下的学术质量控制功能。

压力容器外部冷却系统冷却水池温度场的实验研究及分析

压力容器外部非能动冷却系统采用换料水池作为冷却水源。在浮升力驱动的自然循环流动作用下,冷却水池内会逐渐出现热分层现象。本实验基于先进压水堆压力容器外部冷却系统模拟装置REPEC实验回路,通过测量实验系统内冷却水箱的温度场空间分布,对冷却水池的热分层与混合现象、发展规律和主要影响因素进行了实验分析。结果表明:实验水箱内温度场分布差异主要表现在高度方向;循环流量是影响热分层的重要参数,而水箱工质初始温度的影响非常微弱;针对本实验的无量纲一维瞬态温度场方程分析表明,水箱内温度场的发展规律主要受对流传热控制。

利用多重PCR检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌的毒力基因

我们建立了一种同时检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌毒力基因的二重PCR方法,在一次PCR反应中同时扩增兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因,扩增产物经电泳,出现与阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性,本试验还对79份腹泻兔粪便或肠内容物样品进行了检测,结果35.4%(28/79)检出eae+的REPEC,而魏氏梭菌的检出率为6.3%。敏感性试验结果表明,该二重PCR能检出10CFU的REPEC,10CFU的魏氏梭菌,具有简便、快速、特异、经济等特点,宜于临床应用。

肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌PCR诊断方法的建立

本研究建立了一种同时检测大肠杆菌和魏氏梭菌的二重PCR方法,根据兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因的基因文库,设计了两对分别与eae基因和α-toxin基因互补的引物,用这两对引物对同一样品中的REPEC和魏氏梭菌模板进行二重PCR扩增。结果均得到了两条特异性大小与试验设计相符的833bp(REPEC)和324bp(魏氏梭菌)的扩增条带,而对其它3种病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该二重PCR技术能检出10cfu的REPEC,10cfu的魏氏梭菌。

兔肠致病性大肠杆菌lifA基因的免疫调节和黏附特性(英文)

兔肠致病性大肠杆菌(rEPEC)菌株RDEC-1的基因组中lifA基因与LEE (Locus for enterocyte effacement)致病岛相毗邻。本试验通过DNA序列分析、基因打靶技术、细胞因子检测以及动物试验,分析lifA基因完整核苷酸序列及其生物学功能。结果表明,RDEC-1的lifA基因的核苷酸序列与人肠致病性大肠杆菌的完全相同;lifA基因具有降低家兔外周血单核细胞IL-2表达的作用。与野生型菌株RDEC-1相比,被定点敲除lifA基因的RDEC-1突变株(RDEC-1ΔlifA)口服接种家兔后,排菌量明显降低。利用野生型RDEC-1和RDEC-1ΔlifA基因缺失菌株同时口服接种家兔,从粪便中分离细菌,结果显示野生型RDEC-1是优势菌,而RDEC-1ΔlifA基因缺失菌数量极少。RDEC-1ΔlifA基因缺失菌株和野生型RDEC-1都能引起特征性家兔肠道上皮的黏附与细胞脱落病变(A/Elesion)。表明rEPEC的lifA基因在免疫调节和细菌的肠道定居中起重要作用,这为研究lifA基因的生物学功能提供了直接证据。