体外培养恶性疟原虫培基中RESA的初步研究

培养恶性疟原虫培基的上清与不同稀释度的环状体感染红细胞表面抗原(RESA)抗体阳性的10份云南恶性疟患者血样共育,取上清进行RESA-IFA。结果显示,所有血样的RESA抗体滴度均有不同程度的下降.培基经加热处理后,并不影响其抑制活性。表明体外培养恶性疟原虫培基中存在可溶性RESA,且对热稳定。用不同程度的裂殖子可溶性抗原和O型红细胞影抗原与RESA抗体阳性的血样共育,再进行RESA-IFA。裂殖子抗原在浓度为3.1μg/ml时产生完全抑制。相反,O型红细胞影抗原在浓度比裂殖子抗原高约30倍时,才产生抑制。表明RESA源于裂殖子。

西双版纳疟疾患者RESA抗体的初步调查

用RESA—IFA试验对云南省西双版纳州恶性疟患者血样41份,恶性和间日疟原虫混合感染患者血样12份及间日疟患者血样38份进行RESA抗体检测。恶性疟患者阳性者9例,阳性率为22.0％(9/41);混合感染者阳性1例,阳性率为8.3％(1/12);间日疟患者全部阴性。RESA抗体阳性的患者IFA试验的GMRT为1552.1,阴性患者为741.8,差异非常显著。RESA抗体阳性患者平均原虫密度为5042个原虫/μl血,阴性患者为25398个原虫/μl血。表明恶性疟患者血清中的RESA抗体与临床免疫有一定关系。

恶性疟原虫FCC1/HN株RESA基因克隆及序列分析

[目的 ]测定恶性疟原虫海南株 (FCC1/HN)环状体感染红细胞表面抗原 (RESA)基因 3′端部分基因序列 ,比较FCC1/HN与国外分离株RESA序列的差异。 [方法 ]应用PCR技术扩增RESA基因 3′端部分序列 ,将其克隆入pMD18 T载体。阳性重组克隆经酶切及PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定 ,并用分子生物学软件进行基因结构和同源性分析。 [结果 ]用PCR成功扩增出约 846bp的RESA基因特定片段 ,阳性克隆经酶切及PCR扩增确定。基因序列分析表明 ,我国恶性疟原虫FCC1/HN株与国外FC2 7,PaloAlto ,NF7株RESA基因序列有不同程度的差异。 [结论 ]确定了恶性疟原虫FCC1/HN株RESA基因 3′端序列。同源性分析表明 。

疟疾流行区人群RESA抗体的检测

以RESA—IFA试验检测海南疟疾流行区恶性疟病人及非疟疾病人血清的抗RESA抗体,结果表明非疟疾病人中的抗RESA抗体阳性率明显高于恶性疟病人,差别具有显著性(P<0.05)。说明人群中的抗RESA抗体水平与抗疟免疫作用有关。

RESA-间接荧光抗体试验检测恶性疟RESA抗体的研究

由体外培养的恶性疟原虫获得的含环状体为主的感染红细胞制成单层感染红细胞,经戊二醛固定后空气干燥,作为RESA,抗原片,以RESA-IFA检测恶性疟患老血样中的RESA抗体。受检的58份恶性疟血样中,12份呈RESA抗体阳性反应,阳性率为20.7％,其中8份用IFA检测时抗体滴度均>1∶4096。对20份间日疟血样进行了同样试验,结果均为阴性。对RESA及其抗体在疟疾保护性免疫中的作用进行了简要讨论。

RESA在恶性疟保护性免疫中的作用

由于恶性疟的发病率和死亡率几乎均与恶性疟原虫红内期有关,因而研制红内期疫苗尤为重要。近年来的研究发现,存在于感染环状体或早期滋养体的红细胞表面的抗原RESA,其相应的抗RESA抗体在体外可阻抑裂殖子再侵入红细胞。现场观察亦表明,人群中抗RESA抗体的高滴度与临床免疫具有相应关系。RESA可望成为疟疾的重要候选疫苗。

双重荧光抗体RESA-IFA试验检测恶性疟患者RESA抗体

检测恶性疟患者RESA抗体常用常规RESA-IFA试验。在208例恶性疟患者中,RESA抗体的阳性率为15.4％(32/208)。在常规RESA-IFA试验的基础上,加用FITC标记的第三抗体,再进行试验,即双重荧光抗体RESA-IFA试验,同批血样RESA抗体的阳性率为24.0％(50/208),提高阳性检出率达55.8％。