多发性内分泌腺瘤病2A家系的RET原癌基因突变研究

目的 检测一个多发性内分泌腺瘤病2A(MEN 2A)型家系的RET原癌基因突变情况。方法 提取16名家系成员外周血基因组DNA,对RET原癌基因第11外显子进行聚合酶链反应(PCR),PCR产物进行直接基因测序。结果 家系中1例病理确诊嗜铬细胞瘤的患者存在RET原癌基因第11外显子634密码子错义突变;另外筛查出2名家系成员为该突变基因携带者,其中1例经B超发现甲状腺结节性病灶伴血清降钙素升高。结论 MEN 2A的诊断达到了基因水平,对家系基因筛查可以早期诊断该疾病。

一个RET原癌基因Met918Thr突变的多发性内分泌腺瘤病Ⅱb家系报道

目的 检测一个多发性内分泌腺瘤病 (MEN)Ⅱb家系的RET原癌基因突变。方法 提取患者及其父母的外周血基因组DNA ,对RET原癌基因第 16外显子进行聚合酶链反应 (PCR) ,将PCR扩增产物进行直接基因测序和限制性内切酶分析。结果 检测到患者RET原癌基因第 16外显子 918密码子存在ATG(Met) /ACG(Thr)点突变 ,而在患者父母中未检测到该突变。结论 通过对MENⅡb患者及其父母的基因筛查发现 ,该患者点突变是杂合子错义突变。

MEN Ⅱ A综合征家系的RET原癌基因突变及其临床意义

目的筛查1个MEN-ⅡA综合征家系的RET原癌基因突变位点,用于指导临床。方法对1个MEN-ⅡA综合征家系的5个成员外周血提取DNA,采用聚合酶链反应和DNA直接测序方法进行RET基因热点突变的第10、11外显子检测,并讨论MEN-ⅡA家系基因突变早期检测对预防性选择外科治疗的指导意义。结果第11外显子634密码子存在TGC→CGC突变,编码的氨基酸由Cys(半胱氨酸)变为Arg(精氨酸)。结论MEN-ⅡA综合征的早期基因诊断意义较大。

RET原癌基因与分化性甲状腺癌关系的研究进展

目的 探讨RET原癌基因与分化性甲状腺癌关系的研究进展。方法 采用文献回顾的方法 ,对RET基因及编码产物的结构 ,参与的细胞内信号转导 ,以及RET基因与分化性甲状腺癌的关系的研究进展加以综述。结果 RET基因编码酪氨酸激酶受体 ,参与细胞内信号转导 ,RET原癌基因重排是乳头状甲状腺癌中常见的遗传学事件。结论 RET基因与分化性甲状腺癌的发生、发展密切相关 ,是该类肿瘤治疗的一个新靶点。

靶向RET原癌基因的广谱抗癌新药--赛哌替尼(selpercatinib)

RET基因是一种在转染过程中发生重排或融合的原癌基因。RET原癌基因的异常突变涉及多种类型肿瘤的驱动因子:激活下游信号通道STAT/PLCγ,促进细胞的存活、迁移和生长。RET基因是钙黏蛋白超家族成员之一,编码一种受体酪氨酸激酶,作为细胞表面分子能够转换用于细胞生长和分化的信号,此基因在神经嵴发育起重要作用,并且因细胞遗传学的重排,在体内外均产生致癌性的激活。RET基因突变与肿瘤的关系密切,可导致产生多种实体瘤,此前并没有专门针对RET基因异常的靶向药物。首个靶向RET原癌基因的广谱抗癌新药selpercatinib(赛哌替尼),代号LOXO-292由美国礼来(Eli Lilly and Company)制药集团公司的全资子公司Loxo肿瘤学生物制药公司研发,是高选择性受体酪氨酸激酶RET基因在转染过程中发生重排或融合的抑制药,用于治疗多种实体瘤,包括非小细胞肺癌(NSCLC)和甲状腺癌。异常激活的RET可在多种癌症中充当致癌基因。保留激酶结构域的RET融合蛋白是NSCLC和甲状腺乳头状癌的驱动因子,激活的RET突变与多发性内分泌肿瘤2型和散发性甲状腺髓样癌(MTC)的不同表型相关。2013年7月,Loxo制药公司与被美国辉瑞制药公司收购的美国Array生物制药公司签订多项许可和合作协议。该协议涉及赛哌替尼有关的知识产权,开发用于共同商定的肿瘤学目标的小分子药物。Loxo公司将资助Array公司进行临床前研究,负责靶标的选择和临床试验。Array将获得里程碑付款、特许权使用费和Loxo公司的股份,并将赛哌替尼开发为被批准用于治疗具有RET基因突变或融合的NSCLC、甲状腺癌和中枢神经系统(CNS)RET甲状腺髓样癌。礼来公司分别于2019年9月10日和2019年10月2日在国际肺癌研究协会(IASLC)主办的第20届世界肺癌大会(WCLC)和2019年欧洲肿瘤内科学会(ESMO)年会上,公布赛哌替尼胶囊I/II期临床研究结果,治疗RET融合阳性NSCLC。未经化疗及未经治疗的RET融合阳性NSCLC患者客观缓解率(ORR)分别为68%和85%。CNS的ORR达91%。缓解率具有持久性,安全性良好,治疗相关不良事件的停药率为1.7%。对首批55例入组RET突变MTC和RET融合阳性甲状腺癌患者,曾接受过卡博替尼(cabozantinib)和(或)凡德他尼(vandetanib)治疗后复发的患者,再接受赛哌替尼胶囊治疗,ORR为56%。无论患者先前是否接受多激酶抑制药,ORR都有相似性。赛哌替尼胶囊治疗的血清肿瘤学标志物降钙素生化应答率(BRR)为91%,癌胚抗原的BRR为64%。2020年1月29日,美国Loxo生物制药公司根据代号为LIBRETTO-001的Ⅰ/Ⅱ期试验数据,对RET基因变异的NSCLC和甲状腺癌所产生的有效性和安全性,向美国食品药品管理局(FDA)提出新药上市(NDA)申请,FDA已接受赛哌替尼胶囊用于治疗晚期RET融合阳性NSCLC、RET突变型甲状腺髓样癌(MTC)和RET融合阳性甲状腺癌的NDA,并授予突破性治疗药物的称号及罕用药地位,给予优先审评的待遇,FDA还计划在2020年第三季度确定《处方药使用者费用法案》(PDUFA)实施的日期。2020年5月8日FDA正式批准赛哌替尼胶囊上市,商品名为Retevmo,用于治疗3种肿瘤:NSCLC、甲状腺髓样癌和其他类型的甲状腺癌患者,这些患者肿瘤受体酪氨酸激酶的RET基因在转染过程中发生重排或融合所激发的驱动致癌因子引起恶性肿瘤。赛哌替尼是FDA第一次批准全球首个靶向RET原癌基因的广谱抗癌新药。该文对赛哌替尼胶囊的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。

RET原癌基因在甲状腺结节细针穿刺标本中的表达

目的探讨RET原癌基因在甲状腺结节细针穿刺标本中的表达及其对良恶性诊断的意义。方法选择我院普外科拟行手术切除甲状腺结节的住院患者65例,术前行甲状腺结节细针穿刺(FNA),细针穿刺涂片做RET免疫组化染色。以手术切除的甲状腺结节组织标本的病理诊断做为黄金标准,评价RET原癌基因在甲状腺结节良恶性诊断中的意义。结果依据术后病理诊断,良性甲状腺结节30例,恶性甲状腺结节35例(甲状腺乳头状癌28例,甲状腺滤泡状腺癌7例)。RET在甲状腺恶性结节FNA样本中的阳性率高于甲状腺良性结节中的阳性率(82.35%VS 10%,χ2=34.31,P<0.05),与普通甲状腺FNA相比,结合RET特殊染色可提高结节良恶性诊断的敏感度和特异度(82.86%VS 65.71%;90%VS 86.67%)。结论 RET在甲状腺恶性结节的阳性率高于甲状腺良性结节,FNA结合RET特殊染色可提高术前甲状腺结节良恶性诊断的敏感度和特异度。

RET原癌基因与甲状腺乳头状癌的研究进展

RET(rearranged during transfection)原癌基因重排及突变与甲状腺乳头状癌(PTC)密切相关,它在调节细胞增殖、迁移、分化过程中具有重要意义。RET原癌基因及其编码蛋白的结构已经明确,此基因可介导多条信号转导通路。研究发现,RET/PTC重排与甲状腺的放射暴露、促炎性反应以及肿瘤的预后有关。针对此靶基因,目前有多种基因治疗方法正在研究过程中,并有望成为肿瘤治疗的新的突破口。

RET原癌基因突变致甲状腺髓样癌一个家系的研究

目的:研究1个家系中甲状腺髓样癌(medullarythyroidcarcinoma,MTC)的发病与RET原癌基因突变的关系。方法:提取6名家系成员外周血DNA,采用聚合酶链反应(PCR)及直接DNA测序技术对先证者标本PCR产物中的RET原癌基因第10号和11号外显子,以及另5名家系成员标本的RET原癌基因11号外显子进行分子检测。结果:在2例MTC患者的外周血DNA中检测到RET原癌基因11号外显子634位密码子的点突变,即634TGC(Cys)→CGC(Arg),且该突变为杂合子突变。另4名表型正常的家系成员外周血DNA标本未发现上述突变。结论:RET原癌基因11号外显子634密码子点突变是该家系遗传性MTC发病的分子基础。基因检测不仅为Ⅱ型多发性内分泌腺瘤(MENⅡ)各亚型的早期诊断提供了遗传学依据,并且有助于预测家系成员患病的危险性。

罕见RET原癌基因Y606C突变所致家族性甲状腺髓样癌家系临床特点分析

目的：分析讨论RET原癌基因Y606C这一罕见突变所致家族性甲状腺髓样癌（familial medullary thyroid carcinoma, FMTC）的临床生物学特点。方法：对先期确诊的1个携带RET原癌基因Y606C种系突变的FMTC家系成员进行RET基因种系突变筛查，同时行血清降钙素、甲状旁腺素、颈腹部超声等相关，临床检查，对患病成员和携带者给予临床干预，并总结分析上述病例临床生物学特点。结果：包括先证者在内，该家系中10例参与基因筛查，发现6例携带RET基因第10外显子Y606C突变。其中3例确诊为FMTC患者（含先证者），均为女性，平均发病年龄50．0（47～53）岁。发病成员临床均表现为甲状腺肿物伴降钙素升高，未发现甲状旁腺和肾上腺病变。2例行全甲状腺切除术，1例行患侧腺叶切除术。术后病理均确诊为甲状腺髓样癌，其中2例病理分期均属早期，术后随访期间均达生化治愈。家系中另有3例为突变携带者，平均年龄33．0（15～55）岁。其中2例颈部超声均提示甲状腺肿物（考虑良性），另1例颈部超声未见异常。除1例拒绝降钙素检测外，其余2例血清降钙素均正常范围，建议定期复查。结论：RET原癌基因Y606C突变可以导致FMTC发病，家系成员发病平均年龄较大，肿瘤分期较早，生化治愈率高，预后较好；家系成员基因检测结合颈部超声和降钙素检查有利于甲状腺髓样癌的早期诊断；对于无症状Y606C突变携带者，应根据其降钙素水平及颈部超声检查情况实施个体化临床处置。

RET原癌基因c.1901G>A突变遗传性甲状腺髓样癌1例报道

甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma,MTC）发病率低,占甲状腺恶性肿瘤1%~2%^（[1]）。MTC分为散发型和遗传型,遗传型为常染色体显性遗传,发病与RET原癌基因突变密切相关^（[2]）。现报道1例家族性髓样癌,分析其临床病理特征、诊断与鉴别诊断、RET基因检测结果及治疗与预后并复习相关文献。

RET原癌基因p．C618Y突变的家族性甲状腺髓样癌一家系的临床诊治分析

目的探讨家族性甲状腺髓样癌（FMTC）的临床诊治特点及RET原癌基因检测的意义。方法对1个FMTC家系进行系统的家系调查，提取外周血进行RET原癌基因和降钙素检测，并绘制家系图。结果基因检测该家系为RET原癌基因第10外显子第618位点TGC→4TAC杂合错义突变，即P．C618Y突变，与临床完全符合。7例MTC中，男1例，女6例；首次诊断平均年龄49．6（24-78）岁；临床均表现为颈部肿块；肿瘤最大直径1．4-4．4cm，平均2．6cm；7例均伴颈部淋巴结转移。除1例（78岁）拒绝手术外，1例行右侧甲状腺全切除术＋左侧甲状腺次全切除术，1例行右侧甲状腺全切除术（既往左侧甲状腺因“良性肿瘤”已全切除），其余4例行双侧甲状腺全切除术；6例均＋至少双侧颈部Ⅵ区淋巴结清扫或＋单／双侧颈部改良淋巴结清扫术。接受手术的6例患者首次术后降钙素仍升高：其中1例首次术后64个月因MTC转移死亡；3例在首次术后6个月行再次手术，2例降钙素降至正常，1例降钙素仍升高；另外2例分别在首次术后214、60个月，影像学检查示双侧甲状腺叶残留、局部淋巴结肿大并降钙素升高。2例无症状中的1例因术前血清降钙素高，行双侧甲状腺全切除术，术后病理诊断为双侧甲状腺C细胞增生；另1例已随访10个月，未发现影像学和降钙素异常。结论基于家系调查并整合RET基因和降钙素检测，有利于早期诊断以改善预后；对无症状的RET基因突变携带者，应根据其降钙素水平，实施个体化的预防性甲状腺全切除或严密随访观察。

五个多发性内分泌肿瘤2B家系的临床分析和RET原癌基因突变研究

目的研究5例多发性内分泌肿瘤(MEN)2B患者及其家族成员的临床表型和PET原癌基因突变。方法提取5例有典型临床表型的MEN2B患者及其23名家族成员外周血基因组DNA,对RET原癌基因第8、10、11、13、14、15、16外显子进行PCR产物直接测序。结果MEN2B临床表型和基因突变仅存在于5例先证者中,其家族成员均未发现；5例患者确诊MEN2B时的甲状腺髓样癌(MTC),类马凡体型,唇舌的黏膜神经瘤,眼部异常,肠道异常和嗜铬细胞瘤(PCC)的发生数分别为5、5、5、4、3和3；其MTC和PCC的发病年龄分别为(20．0±8．1)岁和(28．3±2．5)岁；RET基因突变均为第16外显子的M918T。结论本组MTC和PCC的平均发病年龄均晚于国外相关报道,且PCC发病晚于MTC；MEN2B其他相关临床症状的发生率大于国外报道,考虑与MEN2B确诊较晚有关。本组MEN2B先证者发生RET突变的家系比例(100%)要明显高于国外的相关报道(50%),且均为RET原癌基因的M918T单一突变。

一个Ⅱa型多内分泌腺瘤病家系的RET原癌基因突变研究

目的 检测一个Ⅱa型多内分泌腺瘤 (MEN Ⅱa)病家系中RET原癌基因的突变情况。方法 提取 9名家系成员外周血基因组DNA ,对RET原癌基因第 10和第 11外显子进行聚合酶链反应 (PCR) ,PCR产物进行直接DNA测序。结果 家系中 2例经病理确诊的患者存在RET原癌基因第 11外显子Cys(TGC) 63 4Gly(GGC)错义突变 ,另筛查出 4名成员为该突变基因携带者 ,其中 2例经B超检查发现甲状腺有新生物 ,1例双侧甲状腺及双侧肾上腺有新生物 ,1例 15岁的突变基因携带者无临床表现。结论 对MEN Ⅱa家系的基因分析证实RET原癌基因第 11外显子在密码子 63 4存在TGC→GGC突变 ,对MEN Ⅱa能在基因水平作出诊断。对MEN Ⅱa家系成员作分子遗传学分析有助于判断患MEN

甲状腺髓样癌患者RET原癌基因突变的研究

目的研究甲状腺髓样癌(MTC)的RET原癌基因突变情况。方法从12例病理诊断的MTC患者和2例临床上怀疑MTC患者提取外周血基因组DNA,对RET原癌基因第10、11、16外显子进行PCR产物直接测序。结果发现8例患者存在基因突变。1例是第10外显子618密码子TGC/CGC突变;2例是第11外显子634密码子TGC/TAC突变;3例是634密码子TGC/CGC突变;2例是第16外显子918密码子ATG/ACG突变。结论直接基因测序分析能在基因水平诊断MTC,分子遗传学分析使术前诊断该疾病成为可能。

RET原癌基因点突变所致多发性内分泌腺瘤病2B型一例家系研究

目的 研究 1例中国家系中RET原癌基因点突变与多发性内分泌腺瘤病 2B型 (MEN 2B)发病的相互关系及其遗传特征。方法 收集 1例MEN 2B患者术后甲状腺髓样癌肿瘤组织和外周血DNA标本及其父母外周血DNA标本运用PCR和逆转录PCR技术以及直接基因测序技术对上述标本中RET原癌基因 16号外显子区域进行分子检测。结果 在患者肿瘤组织 (c)DNA及其外周血DNA中均检测到RET原癌基因 16号外显子 918密码子处基因点突变 ,即 :918Met(ATG)→Thr(ACG)。且由基因测序图示 ,该突变为杂合子错义突变。而患者父母外周血DNA样本中均未发现上述RET原癌基因点突变。结论 与国外报道相似 ,在中国MEN 2B患者中 ,也找到了RET原癌基因 16号外显子基因点突变 918Met(ATG)→Thr(ACG)。虽然其发病具有遗传倾向 ,但同样存在散发病例。MEN

多发性内分泌腺瘤2A型家系中嗜铬细胞瘤的临床及RET原癌基因突变特点

目的探讨多发性内分泌腺瘤2A型（MEN2A）中肾上腺嗜铬细胞瘤（PHEO）的临床特征及RET原癌基因突变检测的意义。方法收集分析1989年8月至2013年1月诊治的13个MEN2A家系32例PHEO患者的临床资料、家系谱，并进行RET基因检测分析。结果13个MEN2A家系68例MEN2A患者中32例（47．1％）伴有PHEO，其中男19例，女13例；首次诊断年龄18—78岁，平均（41±12）岁；PHEO肿瘤最大直径2．5～11．0cm，平均（4．6±2．2）cm；先诊断甲状腺髓样癌、后诊断PHEO的12例（37．5％），同时诊断的12例（37．5％），初始诊断为PHEO的7例（21．9％），阑尾切除术中PHEO诱发高血压危象死亡的1例（3．1％）。临床筛查前确诊的22例PHEO中有PHEO症状者12例，筛查后发现的10例PHEO中仅1例有PHEO症状（12／22比1／10，P=0．024）。除外死于非PHEO术中的5例无症状者，17例伴双侧PHEO（3例为异时双侧PHEO）患者中有症状者7例，10例伴单侧PHEO患者中有症状者6例（7／17比6／10，P=0．440）。25例接受了PHEO手术：开放切除11例（双侧一期切除2例），腹腔镜下切除14例（双侧一期切除8例）。术后10例需激素替代治疗。平均随访72（1～282）个月，2例出现肾上腺皮质功能低下表现，未见PHEO局部复发和远处转移。RET基因突变分属4种基因型，32例MEN2A—PHEO患者中31例（96．9％）为P．C634Y／R／F突变（来自12个家系）；1例（3．1％）为P．C618R突变（来自1个家系）。结论MEN2A—PHEO的RET基因突变大多位于第634位点。通过家系调查和RET基因检测，尤其有利于无症状PHEO的及早发现和治疗，可优先选择腹腔镜下行保留肾上腺皮质功能的肾上腺切除术。

DelD631:多发性内分泌腺瘤病2A型RET原癌基因的一个新突变

目的检测一个多发性内分泌腺瘤病2A 型(MEN2A)家系中 RET 原癌基因突变情况,以探寻该家系发病的分子机制。方法一个 MEN2A 家系,包括先证者两代人共22位成员的大家系。提取该家系22位成员外周血基因组 DNA,扩增先证者 RET 原癌基因的外显子10、11,进而对纯化后的 PCR 产物直接测序,并进一步进行克隆测序,判定变异的位点及编码氨基酸序列的变化,测得突变所在的外显子后,将其余几例患者及其亲属相应外显子的扩增产物进行测序。结果 4例MEN2A 患者均存在 D631密码子(GAC)的杂合缺失,碱基序列由 TGC^GACGAGCTG 变为TGCGAGCTG,导致代表天冬氨酸的 D631的缺失,即 delD631;4例患者中Ⅱ6的一级亲属(Ⅲ10)为该基因突变携带者。克隆测序发现的突变点与 Cariff 医学遗传学院人类基因突变数据库收录的 MEN2A相关的 RET 原癌基因突变比较,确定为新突变点。结论本研究 MEN2A 家系存在外显子11的D631杂合缺失突变,是国内外报道的首个 RET 原癌基因 D631缺失突变。临床表现特点:相对于半胱氨酸位点突变,其发病年龄迟,肾上腺嗜铬细胞瘤可早于甲状腺髓样癌发生。

一个多发性内分泌腺瘤病2A型家系新的RET原癌基因突变方式

目的探讨一个多发性内分泌腺瘤病2A型（MEN2A）家系的临床表现和RET原癌基因突变方式。方法对一个MEN2A家系成员进行临床调查，提取其中3例具有典型临床表现的患者及15个家庭成员的外周血淋巴细胞DNA，对RET原癌基因的第8、10、11、13～16外显子进行DNA测序分析，并对发现突变的PCR产物进行亚克隆测序。结果该家系先证者系30岁起先后确诊为嗜铬细胞瘤和甲状腺髓样癌的男性，其一姐患有嗜铬细胞瘤、一弟患有甲状腺髓样癌。在这3例患者及另外2例未发病的家庭成员中，发现了RET原癌基因第11号外显子存在相同的杂合突变，即1893-1895delCGA，系一种新的突变类型。结论RET原癌基因第11号外显子1893—1895delCGA杂合突变，是一种新突变，可能为该MEN2A家系的致病基因。