TaqMan-MGB探针检测人REV3L基因的毒物兴奋效应

研究低剂量紫外线照射诱导人胚肺成纤维细胞(MRC5)REV3L基因表达量变化的毒物兴奋效应,用四氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增值抑制率,得到紫外线对MRC5毒性的剂量反应关系,并对低剂量处理组(10s和20s)和高剂量处理组(30s、60s和300s)染毒细胞,采用TaqManMGB探针,进行荧光实时定量PCR,检测REV3L基因表达量的变化.发现低剂量处理组(20s)使REV3L基因的表达量明显增高.表明低剂量紫外线照射可以引起MRC5细胞REV3L基因产生毒物兴奋效应.

干扰REV3L基因表达逆转结肠癌的耐药性

目的探讨跨损伤DNA合成途径(TLS)关键基因REV3L的靶向下调对人耐药结肠癌细胞系耐药性的逆转作用。方法用RNA干扰技术(RNAi)沉默REV3L基因在人耐奥沙利铂结肠癌细胞系(THC8307/L-OHP)中的表达,以实时荧光定量PCR和免疫细胞化学检测REV3L基因mRNA及蛋白均低表达的细胞作为实验组。运用四甲基噻唑蓝(MTT)、流式细胞术和细胞形态学的方法检测肿瘤细胞耐药系数变化、耐药性相对逆转率及细胞凋亡的情况。结果转染mU6pro-siREV3质粒的实验组细胞REV3L基因的表达被成功抑制。基因低表达的细胞耐药系数明显低于空白对照组和阴性对照组,相对耐药逆转率显著高于阴性对照组(P<0.05)。细胞凋亡指标显示实验组细胞凋亡率显著高于两对照组(P<0.05)。结论下调REV3L基因的表达,可逆转人结肠癌细胞的耐药性并促进细胞凋亡,REV3L可以作为肿瘤基因治疗的潜在靶点。

FoxO3在复发胶质母细胞瘤中的表达及其对替莫唑胺耐药性的影响

目的:研究抑癌基因FoxO3在复发胶质母细胞瘤中的表达及其在胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药中的潜在作用机制。方法:通过基因芯片分析、q PCR和Western blot检测FoxO3在原发和复发胶质母细胞瘤中的表达,并检测其在替莫唑胺耐药细胞株中的表达。通过FoxO3过表达芯片筛选其下游靶基因,并进一步探讨FoxO3在胶质母细胞瘤替莫唑胺耐药中的作用机制。结果:FoxO3 mRNA及蛋白的表达在复发胶质母细胞瘤组织及耐替莫唑胺细胞系中明显减低。过表达FoxO3可通过抑制跨损伤修复蛋白REV3L的表达来增加胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的敏感性。结论:FoxO3在复发胶质母细胞瘤组织中表达减低。FoxO3表达减低与胶质母细胞瘤化疗耐药密切相关。FoxO3可能通过抑制REV3L基因表达增加胶质母细胞瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性。