绵羊肺炎支原体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)的检测方法,本研究根据GenBank登录的Mo Y-98株(KR021380.1)黏附素基因p113基因序列设计1对特异性引物和探针,建立了针对Mo的TaqMan荧光定量检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测Mo,对丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、莱氏无胆甾原体及羊传染性脓疱病毒(ORFV)等羊常见病原扩增结果均为阴性;该方法最低检测限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%;采用该方法对96份临床样品进行检测,结果 Mo的阳性率为67.7%(65/96),比常规PCR法及支原体分离鉴定法更加敏感。以上结果表明本研究建立的Mo TaqMan荧光定量PCR方法可以用于Mo的准确快速检测及羊支原体性肺炎的诊断和流行病学调查。

北京油鸡AMPD1基因多态性及其与肌苷酸含量关系的研究

根据人和大鼠的腺苷一磷酸脱氨酶1(AMPD1)基因序列设计引物,采用PCR-RF-SSCP技术检测了130只北京油鸡AMPD1基因多态性,并分析了AMPD1的不同基因型与北京油鸡肌苷酸含量的关系。结果表明:在北京油鸡中检测到AMPD1基因的A、B、C3个等位基因,基因频率分别为0.180 8、0.661 5、0.157 7;产生AA、AB、AC、BB、BC、CC6种基因型,基因型频率分别为0.076 9、0.176 90、.030 80、.461 5、0.223 1、0.030 8。最小二乘分析表明基因型AC、BB所对应的肌苷酸含量最小二乘均值显著高于基因型AA所对应的最小二乘均值(P<0.05),肌苷酸含量在AMPD1其余基因型之间没有显著差异(P>0.05)。

6个鸡种AMPD1基因PCR-RF-SSCP分析

腺苷一磷酸脱氨酶(adenosine monophosphate deam inase,AMPD)是嘌呤代谢过程中的一种重要的酶,它对肉质性状和风味起到重要作用。根据人和大鼠的AMPD1基因序列设计引物对鸡的AMPD1基因进行扩增,在克隆测序的基础上,采用PCR-RF-SSCP技术分析了AMPD1基因在北京油鸡(119只)、泰和乌骨鸡(40只)、崇仁麻鸡(39只)、鹿苑鸡(39只)、霞烟鸡(40只)和AA鸡(40只)6个鸡种中的多态性。结果表明,在供试的6个鸡种中共检测到AMPD1基因的A、B、C 3个等位基因,产生AA、AB、AC、BB、BC、CC 6种基因型。测序结果发现等位基因B和等位基因A相比存在一个单碱基突变,即C→T(402),而等位基因C与等位基因A相比存在G→T(361)、A缺失(373)、T缺失(404)、G→T(420)、C→T(434)、G→A(456)、A→G(469)、G→A(473)、G→A(486)、G→A(491)、G→A(493)等11处碱基突变。

甲硫腺苷磷酸化酶在非小细胞肺癌中转录表达

目的 探讨甲硫腺苷磷酸化酶 (MTAP)及其连锁基因 p14 ,p15和p16在非小细胞肺癌中的转录表达变化情况。方法 采用RT PCR方法检测 15例新鲜肺癌标本及相应癌旁组织中MTAP及其边锁基因 p14、p15和p16mRNA的表达情况。结果 MTAP在 73 3%的肿瘤标本中不表达或转录水平降低 5倍以上 ,而MTAP在癌旁对照组织中的表达率却高达 93 3% ;此外 ,MTAP在肺腺癌和鳞癌中的低表达现象无显著性差异 ,但在中 /低分化肺癌中低表在显著高于高于分化癌。对 7例标本分析表明 ,1例P15基因在正常组织及癌瘤中都高水平表达 ,1例均不表达 ,5例在癌标本中基本不表达 ,而在正常组织中表达 ;而 p14和p16正常组织中转录表达水平很低 ,而在配对的 7例肺癌组织中却分别有 3项高表达。结论 MTPA基因低表达或丢失可能与肺癌的恶性程度密切相关 ,MTAP的缺失可能独立于 p16之外 ,提示MTAP的低表达或缺失在肿瘤生物学中有其功基础的基础。

斯卑尔脱小麦1B染色体的显微分离及其DNA的PCR扩增

以斯卑尔脱小麦的一个变种及其近等基因系为材料 ,玻璃针法进行显微操作在减数分裂中期I分裂相中获得G型细胞质雄性不育的育性恢复基因Rf3所在的 1B染色体DNA。LA -PCR方法扩增DNA ,斑点杂交的方法检测证明扩增产物来源于斯卑尔脱小麦基因组的

中国人群KEL等位基因2例新突变的检出

目的研究中国人群中KEL基因多态性。方法用聚合酶链反应-限制性酶切片段-单链构象多态性分析(PCR-RF-SSCP)合并异源二聚体分析,筛选找出具有不同格局的样本并对其测序,找出突变位点。结果在500份随机的中国人群样本中,发现2份样本格局与正常格局不同,测序显示其核苷酸发生了突变,分别是KEL基因外显子9上1086G>A和内含子7的第67位C>A点突变,外显子9上碱基突变是同义突变。结论在中国人群中检出2例新突变的KEL基因。

籼粳稻及恢复系Rf-1位点PCR片段的序列分析

水稻育性恢复基因是鉴别籼粳亚种的关键基因。本研究利用育性恢复基因Rf-1位点上的特异性引物68923-8对来源不同的籼、粳稻恢复系及非恢复系进行PCR片段的序列比对及遗传距离分析。结果如下:在籼稻中,非恢复系间的一致性为94.97%,恢复系间的一致性为88.03%,恢复系与非恢复系之间的一致性达到91.56%;粳稻中,非恢复系间的一致性为91.56%,恢复系间一致性为57.48%,但恢复系与非恢复系间的一致性却较低,为36.53%;比较籼粳稻之间发现,二者非恢复系间的一致性为57.66%,恢复系间的一致性为54.71%。遗传距离的分析也揭示与此相似的结果。聚类将供试材料分成三大枝:第一大枝包含籼稻恢复系、籼稻非恢复系及1个粳稻恢复系Ansanbyeo;第二大枝包含6个粳稻非恢复系;而滇Ⅰ型恢复系南34与BT型恢复系C418则单独成第三大枝,而且与其它两枝的同源性较低。结果表明:水稻籼-粳亚种的遗传变异反映在育性恢复基因Rf-1位点的DNA序列变异上。

PBDE-47和PCB153染毒致大鼠神经毒性作用

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)和2,2’,4,4’,5,5’-六氯联苯(PCB153)单独或联合染毒对SD大鼠的神经毒性作用及其机制。方法出生第10 d的SD大鼠经一次性PBDE-47[1,5,10 mg/(kg.bw)]和/或PCB153[5 mg/(kg.bw)]染毒,用Morris水迷宫试验观察2月龄大鼠空间学习、记忆能力;用实时荧光定量RT-PCR检测海马组织死亡相关蛋白激酶(DAPK)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)、含半胱氨酸的天冬氨酸酶-12(Caspase-12)、含半胱氨酸的天冬氨酸酶-3(Caspase-3)以及细胞色素(cytochrome C)等钙信号通路相关基因mRNA的表达水平。结果随PBDE-47染毒剂量的增加,大鼠学习、记忆能力呈现减退的趋势,且所有染毒剂量组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),PCB153可增加PBDE-47的神经毒性作用。与对照组比较,10 mg/(kg.bw)染毒组PBDE-47可导致雌雄大鼠XIAP基因mRNA表达水平显著下调(P<0.05),同时使雌雄大鼠Caspase-12、Caspase-13、Cytochrome C以及雄性大鼠DAPK基因mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。除雌雄大鼠DAPK以及雌性大鼠Cyto-chrome基因外,PBDE-47和PCB153对雌雄大鼠其他各基因mRNA表达水平的影响具有交互作用(P<0.05)。结论PBDE-47可引起大鼠神经系统损伤,同时影响大鼠海马区钙信号诱导的凋亡相关基因mRNA表达水平,PCB153可增强PBDE-47的上述神经毒性作用。

山茱萸萜类甲羟戊酸合成途径关键酶CoHMGS基因的克隆与分析

目的克隆得到山茱萸Cornus officinalis萜类合成途径的关键酶CoHMGS基因的cDNA序列,并进行相应的生物信息学分析,为深入研究CoHMGS基因的功能奠定基础。方法以山茱萸转录组筛选出的c102453_g2序列为参考序列设计特异引物,以山茱萸叶片总RNA,通过RT-PCR扩增获得CoHMGS基因序列,序列纯化回收后连接到pTOPO-T载体上,转化至大肠杆菌DH10B,选取阳性克隆测序。利用生物信息学软件预测CoHMGS基因及其编码蛋白质的功能。结果克隆得到长度为1645 bp的CoHMGS序列,包含1413 bp的完整开放阅读框,编码470个氨基酸。蛋白整体带负电荷,为不稳定亲水性蛋白,定位于细胞质内,不含跨膜结构。结论首次克隆得到山茱萸CoHMGS基因,对其编码蛋白质进行了初步的分析和预测,为深入揭示CoHMGS基因在山茱萸萜类物质合成途径中的功能奠定了基础。