太湖地区典型菜地土壤微生物16S rDNA的PCR-RFLP分析

土壤微生物多样性是土壤生态功能的基础,但长期以来缺乏对高强度土地利用条件下的土壤微生物多样性的认识。作者采用间接法提取了江苏省太湖地区典型菜地土壤微生物的总DNA,以细菌的通用引物27F和1492R扩增16SrDNA片段,将扩增产物与T-载体酶连,转化大肠杆菌,建立土壤微生物16SrDNA克隆文库。PCR扩增基因文库中插入的16SrDNA外源片段,用两种限制性内切酶HhaI和RsaI分别酶切,获得该土壤173个克隆的酶切指纹图谱。结果表明,HhaI和RsaI联合酶切产生了63个基因分型,文库的覆盖度达76.30%,单一酶切产生的基因分型少,但文库的覆盖度高;克隆文库中存在两种优势类群,分别占总克隆的16%和12%。16SrDNA测序结果表明,太湖地区菜地土壤细菌在分类方面主要属于-和-变形杆菌亚门。以上结果为进一步研究太湖地区菜地土壤微生物生态功能提供了基础资料。

小麦-大赖草易位系的RFLP分析

利用辐射、花药培养及杀配子基因效应已创制出一系列小麦 -大赖草易位系。为在其中找出可能的纯合易位系、明确易位所涉及的相关染色体以及易位断裂点的确切位置 ,利用了已被定位于小麦 7个部分同源群染色体长、短两臂上的 67个探针进行了RFLP分析 ,结果鉴定出 3个纯合的易位系 :T1BL·7Lr#1S、T4BS·4BL - 7Lr#1S和T6AL·7Lr#1S。其中 ,易位系T1BL·7Lr #1S和T6AL·7Lr #1S中染色体 7Lr #1的断裂点位于标记MWG80 8和标记ABG476.1之间 ,而 1B和 6A染色体上的断裂点都在着丝粒附近。易位系T4BS·4BL - 7Lr#1S中染色体 7L #1的断裂点位于标记BCD349和标记CDO5 95之间 ,4B染色体断裂点则位于标记CDO5 4 1和标记PSR1 64之间的长臂上。

北戴河近岸沉积物中微生物16SrDNA的PCR-RFLP分析

采用间接法提取了北戴河地区近岸沉积物中微生物的总DNA,以细菌的通用引物27F和1492R扩增16S rDNA片段,将扩增产物克隆到T-载体上,并转化大肠杆菌感受态细胞,构建沉积物中细菌16S rDNA克隆文库。PCR扩增基因文库中插入的16S rDNA外源片段,用两种限制性内切酶HhaI和RsaI分别酶切,获得该海洋沉积物131个克隆的酶切指纹图谱。结果表明:HhaI和RsaI联合酶切产生了41个基因分型,文库的覆盖度达74.81%,HhaI和RsaI单酶切产生的基因分型分别为30和22,但文库的覆盖度高;克隆文库中存在一种优势类群,占总克隆的23%。16S rDNA测序结果表明:北戴河近岸沉积物中的细菌在分类方面主要属于α-和γ-变形杆菌亚门。

猕猴桃属植物叶绿体基因PCR-RFLP分析

分别用 2个不同限制性内切酶对猕猴桃属 2 7个种和 1 5个栽培品种的叶绿体基因 (rbcL基因和 psbA基因 )的PCR扩增产物进行酶切分析 ,共得到 2 5个限制性位点 ,其中 2 4个具有多态性。确立了该属植物的单元型分布 ,对该属植物的系统发育方式和部分重要种类的亲缘关系进行了探讨 ,拓展了可用于该属植物分子系统学研究的遗传信息。

秋稻品种Dular广亲和基因的RFLP分析

利用Ｂａｌｉｌｌａ／Ｄｕｌａｒ／ＩＲ３６和南京１１／／Ｄｕｌｕｒ／２５３３两个三交Ｆ１ 本对秋稻品种Ｄｕｌａｒ的广亲和性进行了遗传分析。为使杂种群体在相对一致的条伯下抽穗，所有三交Ｆ１植株于分化前集中进行了为期１周的短日照处理。结果表明，两个群体的小穗育性于多峰连续分布，说明三交群体的育性可能受几个主基因控制并受到微效基因的修饰，进一步采用分群分析法。

西双版纳小耳猪群体遗传结构的RFLP分析

目的 对西双版纳小耳猪的群体遗传结构进行RFLP分析。方法 采用ECL核酸直接标记和检测系统 ,以HRP标记浕 -珠蛋白 - 3’HVR多基因座小卫星探针 ,对西双版纳小耳猪的HinfⅠ或HaeⅢ酶切片段进行Southern杂交 ,以化学发光法进行检测 ,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图谱。结果 2kb以上的谱带数在 6～ 1 5条之间 ,HinfⅠ酶切产生的图带数低于HaeⅢ。JB亚系内 80 5、 80 7家系和JS亚系内 1 1 1、 1 2 1、1 2 1、 1 51家系不同个体间的相似系数分别为 0 94± 0 0 9、 0 85± 0 0 8、 0 84± 1 7、 0 78±1 6、 0 83± 0 42、 0 87± 0 0 7,显著高于各家系间的相似系数 ,JB亚系内的 80 5家系和JS亚系内的 1 51家系不同个体间相似系数较大 ,分别为 0 94和 0 87。结论 西双版纳小耳猪近交程度较高 ,个体间差异较小 。

山东省假性肥大型肌营养不良的RFLP分析 Ⅰ.可疑携带者的基因型确定

本文选用10个DMD基因内部和桥探针,对山东省9个地区的21个DMD/BMD家系的173名成员进行RFLP分析,其中可疑携带者55人。多数家系应用1—3个探针,有基因重组家庭选用4—5个探针,便可完成多态分析。RFLP分析可以确定85.45%的可疑携带者(≥95%可信限),即13人确定为携带者,30人排除携带者,另有4人风险大幅提高。通过这些探针的群体多态检测和不同家庭结构和类型的应用分析,我们提出了在中国人群中DMD/BMD基因诊断的基本程序。

苏云金杆菌新菌株WZ-7的PCR-RFLP分析及生物活性研究

利用PCR -RFLP技术分析了自河北省土壤中分离的苏云金杆菌新菌株WZ - 7,结果表明该菌株含有cry1、cry2Ab、cry1Ia1型基因 ,其中cry1型基因的酶切片段类型不同于已发表的基因类型 ,有可能含有新的基因。SDS -PAGE分析结果出现 1 30、79、73、66、60、58kD左右的 6种晶体蛋白 ,毒素蛋白类型属于II型。室内生测结果显示 ,该菌株对重要的农业害虫棉铃虫、甜菜夜蛾、小菜蛾、菜青虫、玉米螟等均有较高的杀虫毒力。

华北典型旱地小麦土壤amoA基因的PCR-RFLP分析

通过构建氨氧化细菌（AOB）和氨氧化古菌（AOA）的氨氧化酶基因亚基A（amoA）克隆文库，并采用限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）技术分析了华北地区典型早地冬小麦土壤中amoA基因的多样性。采用MspI和AfaI两种限制性内切酶对amoA基因克隆文库中阳性克隆子进行双酶切后，共得到了18个氨氧化细菌的可操作分类单元（Operational Taxa Units，OTUs）和10个氨氧化古菌可操作分类单元（Operational Taxa Units，OTUs），其文库覆盖率分别达到92．9％和88．3％。氨氧化细菌的Shannon-Wiener指数、丰富度指数、均匀度指数均高于氨氧化古菌。通过对文库中amoA细菌测序分析，所有的序列都属于Nitrosospira cluster3。而在氨氧化古菌中存在着一个绝对优势种群，它占到克隆文库的80％，测序分析的结果表明，氨氧化古菌属于不可培养的泉古菌门。

酒酒球菌不同菌株的16S rDNA PCR-RFLP分析

以实验室保存23株酒酒球菌为供试材料,运用基于16S rDNA序列的特异引物,建立了特异引物的扩增体系,从而确立了一种快速准确鉴定酒酒球菌的实验室方法。并对扩增的16S rDNA特异条带进行了酶切分析。结果表明,在确立的PCR体系上,均能扩增出一条长约995 bp的特异条带。酶切结果显示,HindⅢ和MseⅠ酶切图谱未显示出菌株间的差别,表明菌株间紧密的亲缘关系。AluⅠ的酶切图谱通过NT-SYSPC2.1软件生成UPGMA聚类图,在0.63水平上可以把23株菌区分为2个大类。

弓形虫不同分离株α-Tubulin和β-Tubulin基因PCR-RFLP分析及其探针制备

目的不同分离株弓形虫α-Tubulin和β-Tubulin基因的PCR-RFLP分析及其杂交探针制备。方法PCR体外扩增α-Tubulin和β-Tubulin基因片段并进行RFLP分析;采用随机引物法用地高辛(DIG-11-dUTP)标记探针并同基因组DNA进行Southern杂交分析。结果从5株弓形虫分离株的基因组DNA中均扩增出α-Tubulin基因的818bp片段和β-Tubulin基因的959bp片段,RFLP分析弓形虫各分离株间酶切图谱未见差异。探针的特异性和敏感性较好。结论α-Tubulin和β-Tubulin基因在弓形虫中高度保守;α-Tubulin和β-Tubulin基因杂交探针可用于Southern杂交。

不同品种猪抑肌素基因启动区的RFLP分析

瘦肉率是猪育种中重要的目标性状之一 ,其大小与骨骼肌的量密切相关。猪抑肌素基因是与瘦肉率有关的基因之一 ,本研究以大白、长白、杜洛克、民猪、三江白猪和军牧Ⅰ号为研究对象 ,采用限制性酶切片段生长度多态性 (RFLP)分子标记法对抑肌素基因的启动区进行了酶切多态性分析。结果表明 :大白、长白、杜洛克以等位基因T为主 :三江白猪和军牧Ⅰ号全部是TT型 ;民猪

两种大叶钩藤ITS序列的RFLP分析

目的通过对两种不同产地大叶钩藤(Uncaria macrophylla Wall.)的核糖体内转录间隔区(rDNA ITS)序列进行RFLP遗传分析,研究不同地理区域大叶钩藤的rDNA ITS序列是否具有生物地理上的差异。方法通过CTAB法提取样品DNA,利用通用引物对其rDNA ITS进行PCR扩增,从而对连接转化后扩增得到的rDNA ITS序列进行限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析。结果获得采集自广东肇庆鼎湖山和广西植物园的两种大叶钩藤两种限制性内切酶(MspⅠ&HaeⅢ)酶切图谱。结论基于对rDNA ITS序列进行的RFLP分析,表明这两个地区的大叶钩藤rDNA ITS序列并无明显差异,不同地理区域的大叶钩藤其遗传本质不具有地理差异。

对甜菜夜蛾高毒力Bt新菌株的PCR-RFLP分析及生物活性测定

利用PCR-RFLP对Bt.新菌株cyz-13,T4-3的基因型进行分析。结果表明,cyz-13含有cry1Aa,cry1Ac,cry1Bc,cry2Ab4种基因型,其中cyz-13菌株的PCR产物的酶切片断类型不同于已知的基因类型;T4-3菌株含有cry1Aa,cry1Ac,cry1Ag,cry2Ac,cry1Ia5种基因型。室内生测结果显示,两菌株对甜菜夜蛾、粘虫、棉铃虫、玉米螟均具有高毒力,好于H D-1标准菌株。两菌株的发酵液均有杀虫活性,二者上清的杀虫因子不同。

甜菜属近缘野生种与栽培种叶绿体及线粒体基因组的RFLP分析

利用具有叶绿体和线粒体基因配列的３种探针和７种限制性内切酶对甜菜属近缘野生种和栽培种共１２个材料进行了ＲＦＬＰ分析。结果表明，在甜菜属植物中表现了丰富的ＲＦＬＰ多态性。在２１个内切酶与探针组合产生的１００余条ＤＮＡ分子量带型中，只有４条为１２个材料所共有，表明了甜菜属植物种间遗传背景的复杂性和部分相似性。根据ＲＦＬＰ多态片断和分类结果绘制成的亲缘关系树状图看出，维比纳甜菜和大果甜菜与传统的形态分类有所差异，可各自划分为一个独立组，维比纳甜菜与普通甜菜组关系最远。同时表明了利用ＲＦＬＰ分子标记技术可以准确地鉴定和识别品种或品系间的特异性。

广东少数民族Morquio综合征StuI位点的RFLP分析

研究广东少数民族群体GALNS基因StuI位点的遗传多态性以及该位点等位基因片段传递的规律,为今后的连锁分析打下基础。采用PCR-RFLP方法,对72例无血缘关系的健康广东少数民族个体的144条染色体和3个家系9位成员的18条染色体进行检测,然后用X^2检验进行统计学处理。等位基因片段D_1的频率为0.70,D_2为0.30,杂合率为29％,D_1、D_2的传递规律与理论上预计的完全符合。广东少数民族群体中StuI位点具有多态性,其基因频率(D_1和D_2)与国外高加索群体的有显著差别,与日本群体及中国南方汉族群体的则无显著差别;而杂合率与高加索群体及日本群体的均有显著差异,但与中国南方汉族群体的则无显著差异。

铬污染土壤修复过程中土壤细菌群落多样性的RFLP分析

【目的】对污染土壤修复过程中土壤细菌群落多样性的变化进行研究。【方法】以淹水培养后的模拟铬污染土壤为供试材料,通过直接提取土壤中总细菌DNA,利用细菌专一引物克隆细菌16S rDNA片段,分别建立克隆文库。利用PCR-RFLP技术,分析比较了土壤淹水10 d(对照,S1)、添加Cr(Ⅵ)淹水10 d(S2)、添加Cr(Ⅵ)和Fe(OH)3淹水10 d(S3)及20 d(S4)4个处理中土壤细菌群落的变化。【结果】用专一引物克隆细菌16S rDNA片段,分别建立了克隆文库;用限制性内切酶RsaⅠ进行细菌16S rDNA PCR-RFLP分析,分别得到123,120,97和69个酶切类型,库容值分别为54.92%,55.43%,65.33%和76.60%;Shannon-Wiener指数、Gini指数、物种丰富度指数(dMa)和物种均匀度指数(Jgi)均表现为S1>S2>S3>S4,以上4个指数的变异系数分别为11.51%,1.84%,23.64%和1.55%;基于细菌多样性参数的聚类分析结果,将对照S1和添加Cr(Ⅵ)处理的S2归于一类,而2个添加Fe处理的土壤S3和S4聚为一类。【结论】经过10 d淹水处理,土壤中添加的Cr(Ⅵ)有98%以上可发生转化,土壤残留的Cr(Ⅵ)含量基本达到稳定。添加铬矿渣处理(S2)的土壤细菌群落多样性和对照(S1)基本一致,添加氧化铁的2个处理(S3和S4)的细菌群落多样性基本接近,但低于S1和S2;添加氧化铁的处理(S3和S4)中,均出现了明显的优势细菌群落,其分别属于荧光假单胞菌属和不动杆菌属。

三种一般钩藤ITS序列的RFLP分析

目的以核糖体转录间隔区(rDNA ITS)序列为分子标记,对采集自3个不同地区的一般钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jack.进行RFLP遗传分析,研究不同地理区域一般钩藤的rDNA ITS序列是否具有生物地理差异。方法通过改良CTAB法提取一般钩藤总DNA,利用通用引物对其rDNA ITS序列进行PCR扩增,并对连接转化后扩增得到的rDNAITS序列进行限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析。结果获得采集自广东韶关阳山、广东梅州大埔、广西植物园的3种一般钩藤两种限制性内切酶(Msp I&HaeⅢ)酶切图谱。结论通过基于rDNAITS序列进行的RFLP分析,表明这3个地区的一般钩藤rDNA ITS序列无明显差异,不同区域的一般钩藤其遗传本质不具有地理差异。