ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtN236T变异

目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV) 阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法. 方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5’TTTAAA3’),而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点.同时PCR扩增2份已行HBVRT区基因测序证实未出现rtN236T 变异的慢性乙型肝炎患者血清及自行构建的对照质粒,扩增产物经DraI酶切,30 g/L琼脂糖凝胶电泳后,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析. 结果:所建立的ntPCtk-RFLP方法灵敏度高,可以检测到106copies/L的HBV DNA;特异性强,其RFLP分析结果与DNA测序结果一致. 结论:ntPCR-RFLP方法灵敏、特异、简便、实用,适用于ADV耐药变异的临床监测工作.

商品佛手和香椽rDNA ITS-RFLP鉴别研究

目的:利用ITS-RFLP技术对佛手及其近缘种香橼的商品药材进行快速的分子鉴定。方法:限制性内切酶AluI和MspI分别对商品佛手和香橼的ITS1和ITS2目的片断进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果:5个商品佛手样品购自药材市场,ITS-RFLP酶切图谱显示可以对其进行分子鉴定。结论:利用ITS-RFLP方法可很好地快速区分佛手与香橼。

鸡MHC-B-F基因外显子3 PCR-RFLP-TasⅠ的多态分布

研究利用PCR-RFLP方法检测了MHC-B-F基因外显子3TasⅠ位点不同基因型在9个鸡品种计235个个体中的分布情况。结果表明MHC-B-F基因外显子3TasⅠ位点中存在3种基因型,命名为AA、AB、BB。它们在不同品种中的分布各异,AA基因型在杏花鸡、灵山香鸡、丝羽乌骨鸡中的频率显著甚至极显著地高于其它品种(P<0.05orP<0.01),AB基因型在来航鸡与隐性白洛克中的频率相当低(P<0.05orP<0.01),BB基因型在隐性白洛克中的分布频率则极显著地高于其它8个品种(P<0.01)。

慢性胃炎、胃癌组织中幽门螺杆菌基因分型的临床研究

目的 探讨幽门螺杆菌 (HP)基因分型与慢性胃炎、胃癌的关系。方法 应用 PCR- RFL P方法对36例慢性胃炎及 45例胃癌组织中的幽门螺杆菌菌株进行检测 ,并用 Hind 酶切尿毒酶 B(Ure B)扩增基因产物进行多态性分析。结果 36例慢性胃炎 HP阳性 2 4例 (6 6 .7%) ,45例胃癌组织中 HP阳性 2 3例 (5 1.1%) ,二者差异无显著性。 47例 HP阳性标本均显示不同的 RFL P图谱。胃癌组织中未发现特异性条带。结论 慢性胃炎、胃癌与 HP感染密切相关。HP基因具有多态性 ,HP菌株存在基因型差异。PCR- RFL P方法可对 HP菌株进行鉴定并将其分型。

CYP17基因多态性与天津汉族女性散发乳腺癌风险关系的研究

目的:探讨CYP17基因多态性与乳腺癌发生危险性的关系。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法,对299例乳腺癌患者和242例正常人的CYP17基因MspA1I多态位点进行检测,确定出CYP17基因的3种基因型,即野生型A1/A1、杂合型A1/A2、突变型A2/A2。非条件logistic回归分析计算各种基因型的乳腺癌发病风险(OR及调整OR值)及其95%可信区间(95%CI)。结果:CYP17A1A1、A1A2和A2A2三种基因型分布频率,乳腺癌患者组中分别为15.7%、56.3%和28.1%,对照组中分别为18.2%、51.7%和30.2%;乳腺癌患者组A1、A2等位基因频率分别为43.8%,56.2%,对照组为44%,56%。CYP17基因型及等位基因型在两组间分布频率的差别均无统计学意义(P>0.05)。基因型A1/A2与A1/A1比较、A2/A2与A1/A1比较OR值分别为0.80(95%CI0.50-1.27)、0.93(95%CI0.55-1.56)。分层分析显示携带等位基因A2的绝经后妇女如果初孕年龄≥25岁,可增加乳腺癌的发病风险(OR2.41,95%CI1.04-5.62)。多因素分析显示:初潮年龄早(<13岁),初孕年龄晚(≥25岁),末孕年龄晚(≥30岁),良性乳腺疾病史均是乳腺癌的发病危险因素。结论:整体上CYP17MspA1I多态位点3种基因型的分布与乳腺癌发病风险无关,但发现初孕年龄≥25岁的携带CYP17A2等位基因型的绝经后妇女易患乳腺癌。

沙城龙眼葡萄园土壤中酵母菌多样性研究

为分离筛选具有产区特色的菌种,本实验采用梯度稀释和划线分离技术,从沙城地区3个龙眼葡萄园土壤中共分离得到210株酵母菌。按照形态表型分为9类,又利用核糖体5.8S rDNA-ITS区域RFLP方法将这9类酵母在分子水平上进行了区分,其中两类酵母为常见酵母,分别为东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)和热带假丝酵母(Candida tropicalis)。实验证明了该地区土壤中酵母菌的多样性。

金华猪肌细胞生成素基因的初步研究

运用PCR-RFLP方法对金华猪I系(178头)、II系(30头)、III系(41头)的肌细胞生成素(MyoG)基因的第2内含子内(PCR1-MspⅠ-RFLP)和3'端(PCR2-MspⅠ-RFLP)位点进行多态性分析。结果表明,PCR1-MspⅠ-RFLP位点有3种基因型,即AA型、AB型和BB型,其基因型频率分别为0.1544、0.3826、0.4631;PCR2-MspⅠ-RFLP位点只有2种基因型,MM型和MN型,其基因型频率分别为0.9953和0.0047。

基于聚合酶链式反应⁃限制性内切酶长度多态性方法鉴别鹿角(马鹿)药材及其配方颗粒

鹿角为鹿科马鹿Cervus elaphus或梅花鹿C.nippon已骨化的角或锯茸后翌年春季脱落的角基。目前市场上鹿角基原混杂,为快速准确地鉴别鹿角多基原及混伪品,研究通过比较马鹿、梅花鹿及其混伪品线粒体条形码Cytb基因序列差异,筛选获得鹿角的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鹿角特异性鉴别引物dishmy⁃F及dishmy⁃R,分别采集鹿角及其混伪品,建立鹿角配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系,对影响该方法重复性的Taq酶种类、PCR仪型号进行耐受性和适用性考察,再使用限制性内切酶MseⅠ对梅花鹿与马鹿的扩增产物进行酶切。结果显示,当退火温度为56℃,循环次数为35时,鹿角药材、标准汤剂及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后,马鹿可在近100 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,且马鹿的条带较梅花鹿短约60 bp,而其他混伪品如驼鹿、驯鹿、白尾鹿、黑尾鹿、狍子、白唇鹿等及阴性对照均无条带。该研究建立的PCR⁃RFLP方法可快速准确的鉴别出鹿角药材、标准汤剂和配方颗粒中的马鹿成分,并可区分梅花鹿和其他混伪品,同时为其他中药配方颗粒质量标准研究提供了理论依据。

父母亚甲基四氢叶酸脱氢酶基因型对后代发生先天性心脏病的影响

目的 探讨父母亚甲基四氢叶酸 (CMTHFD)基因型对后代发生先天性心脏病 (CHD)的影响。 方法 选择辽宁省 192例CHD患者的父母作为病例组 ,同一地区年龄、性别匹配的 12 4名正常人的父母作为对照组 ,采用PCR RFLP方法检测其MTHFDG195 8A位点基因多态性 ,比较 2组的基因型频率和等位基因频率 ,并计算 2组父母生育纯合突变后代的概率的比值。 结果 CHD父母基因型频率和等位基因频率与对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;房间隔缺损母亲突变等位基因频率为 10 87% ,明显低于对照组 2 8 15 % (P <0 0 5 ) ,OR =0 31(95 %CI:0 0 9～ 0 84 ) ;房间隔缺损患者父母至少携带一个突变等位基因的比例为 4 3 4 8% ,亦明显低于对照组 6 9 6 4 % (P <0 0 5 ) ,OR =0 34(95 %CI:0 12～ 0 92 ) ;病例组和对照组父母可能生育的纯合突变胎儿占总胎儿数的比例分别为 5 17%和 7 0 4 % ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。 结论 亲代 (尤其是母亲 )MTHFDG195 8A位点基因突变可降低后代房间隔缺损的危险性。

K562白血病细胞系HLA-II等位基因型

目的:测定K562白血病细胞系HLA -II等位基因型。方法:采用聚合酶链反应 -限制性片断长度多态性技术对K562白血病细胞系HLA -II类抗原基因进行DNA分型。结果:K562细胞系的HLA -II基因型均为纯合子型 ,等位基因分别是 :DRB1*0301/*0301,DQB1*0201/*0201,DPB1*0402/*0402。结论:提高对K562白血病细胞系HLA -II基因型的认识。