转基因小麦根际土壤中荧光假单胞菌数量的变化

荧光假单胞菌(Psdeuomnoda fluoerncnet)是一种土壤中十分常见的细菌,广泛应用于生物防治,其数量变化能较准确地反映土壤环境的变化,因此在转基因小麦环境安全评价研究中可以将荧光假单胞菌的数量变化作为检测转基因小麦种植对整个根际土壤环境影响的指标之一。本研究选取荧光假单胞菌的蛋白编码基因gyrB作为靶标基因,设计特异性较好的引物,利用该引物建立了基于实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)方法的转基因小麦根际土壤荧光假单胞菌数量的检测技术体系。结果显示,定量标准曲线相关系数达0.99以上,且呈现单一熔解曲线峰值。应用该体系对种植于河南新乡及江苏六合的转TaDREB4基因抗旱小麦(简称TB4)及其受体小麦济麦19根际土壤荧光假单胞菌进行检测,结果表明,各时期转基因小麦和非转基因小麦各生育期根际土壤中荧光假单胞菌的拷贝数无显著差异。说明TB4种植对根际土壤中的荧光假单胞菌数量无显著影响。

乳腺癌组织中BRMS1mRNA表达及意义

[目的]探讨BRMS1mRNA在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床病理特征的关系。[方法]采用Trizol提取组织总RNA,将mRNA转录成cDNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术检测乳腺组织BRMS1mRNA表达,以BRMS1mRNA和GAPDHmRNA含量的比值表示BRMS1表达水平。[结果]乳腺癌组织中BRMS1mRNA的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),也明显低于正常乳腺组织(P<0.01),BRMR1mRNA低表达与临床病理分期和淋巴结转移有关(P<0.05,P<0.01),而与患者年龄、癌肿大小、病理类型无关(P>0.05)。[结论]乳腺癌组织中BRMS1mRNA的低表达与乳腺癌的发展与转移有关,可能成为判断乳腺癌转移的一个标志物。

Siglec-1与原发性胆汁性肝硬化的相关性研究

目的检测Siglee-1（sialic acid—binding immunoglobulin—like lectins，唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素，CD169）在原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis，PBC）患者外周血单核细胞上的蛋白及mRNA表达水平，并探讨其在原发性胆汁性肝硬化发生发展中的作用。方法流式细胞术检测45例PBC患者及36例健康对照者、40例肝炎后肝硬化对照者外周血CD14，CD169双阳性细胞的表达率；实时荧光相对定量RT—PCR方法检测入选对象单核细胞中Siglec—1mRNA的含量；生化常规测定所有入选者血清生化指标水平。结果流式细胞术检测结果显示：PBC组单核细胞cD14，CD169双阳性率为13．0％±2．5％，显著高于健康对照组（1．0％±0．2％，P〈0．01）及肝炎后肝硬化对照组（4．1％±0．5％，P〈0．01）。PBC组Siglec—1mRNA的相对表达量为健康对照组的3．42倍，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论PBC患者单核细胞表面siglec-1蛋白表达显著增高，mRNA含量显著增加，说明PBC患者外周血单核细胞已经发生巨噬细胞化，单核巨噬细胞介导的免疫炎症反应在PBC发生发展过程中起重要作用。

实时荧光RT-PCR定量检测BRMS1基因表达

目的建立一种实时荧光RT-PCR定量检测乳腺组织中BRMS1mRNA表达水平的方法。方法采明逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,计算出待测样本中BRMS1mRNA含量,并以BRMS1mRNA与GAPDHmRNA的比值作为BRMS1mRNA的表达水平。结果实时荧光RT-PCR检测BRMS1及GAPDH的线性范围为4×102-4×108拷贝/μl。批内和批间变异系数分别为3.9%-4.6%和4.8%-5.5%。BRMS1mRNA表达范围为0-1.65.结论实时荧光定量检测BRMS1mRNA含量的方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。

BRMS1mRNA在乳腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨BRMS1mRNA在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法:采用Trizol提取组织总RNA,将mRNA转录成cDNA,然后用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)技术检测乳腺组织BRMS1mR-NA表达,以BRMS1mRNA和GAPDHmRNA含量的比值表示BRMS1表达水平。结果:乳腺癌组织中BRMS1mRNA的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),也明显低于正常乳腺组织(P<0.01),BRMR1mRNA低表达与临床病理分期和淋巴结转移有关(分别为P<0.05,P<0.01),而与患者年龄、癌肿大小、病理类型无关(P>0.05)。结论:乳腺癌组织中BRMS1mRNA的低表达与乳腺癌的发展与转移有关,可能成为判断乳腺癌转移的一个标志物。

增殖诱导配体在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达

目的 定量分析B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）各期患者化疗前或后外周血单个核胞和血浆中增殖诱导配体（APRIL）mRNA及蛋白的表达水平,探讨APRIL在B-NHL中的意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,根据标准曲线计算待测样本中靶mRNA及蛋白的准确含量.结果 RFQ-PCR检测靶基因mRNA含量的线性范围为101～109 pg/ml,批内和批间重复性测定的变异系数（CV）分别为1.69%～5.99%和6.35%～10.12%.采用ELISA方法检测靶蛋白含量,标准曲线r=0.9922.化疗前后B-NHL各期患者APRILmRNA及蛋白表达均显著高于正常对照（P＜0.01）,而不同分期化疗后Ⅲ期及Ⅳ期患者表达低于化疗前（P＜0.05）,但Ⅰ和Ⅱ期化疗前后比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 APRILmRNA与蛋白表达水平相一致,其参与B-NHL的发生与发展.APRIL可能与肿瘤负荷量有关,且可能成为有效治疗B-NHL的新靶点.

东海原甲藻细胞色素b基因实时荧光定量PCR检测体系优化

为定量检测现场样品中东海原甲藻的细胞色素b(cytochromeb,Cytb)基因,本研究设计了该基因的特异性引物,并对现场样品反转录反应体系中加入的模板数量和定量PCR反应条件进行了优化.结果表明:设计的引物具有较好的特异性,可有效区分不同的藻类;针对现场样品,在20μL的反转录体系中,适宜加入的RNA模板的量为50～200ng;PCR模板稀释10倍或向定量PCR反应体系中加入终浓度为0.2μg·μL-1的牛血清蛋白(BSA)均能有效降低现场样品中抑制物的抑制作用,减小干扰.该方法的建立对从分子水平探讨东海原甲藻暴发和消亡的内在机制具有重要意义.