山羊繁殖季节性相关基因KiSS-1与RFRP的表达研究

本研究为初步阐明KiSS-1和RFRP基因对山羊繁殖季节性的作用,选择常年发情济宁青山羊和季节性发情辽宁绒山羊为对比品种,应用RT-PCR和qRT-PCR技术分别研究KiSS-1和RFRP基因组织表达谱以及在下丘脑-垂体-卵巢(子宫)繁殖轴表达差异。结果发现:(1)KiSS-1基因主要表达于山羊下丘脑、垂体、松果体、肾、卵巢、脂肪和甲状腺等组织,RFRP基因主要表达于山羊下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢和垂体等组织,两基因组织表达谱均存在一定的品种特异性;(2)KiSS-1基因在济宁青山羊下丘脑表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),而在垂体和卵巢中的表达量两品种间差异不明显(P>0.05);(3)济宁青山羊下丘脑RFRP基因表达显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),而济宁青山羊卵巢和垂体中RFRP基因表达明显低于辽宁绒山羊(P<0.05)。研究结果提示,KiSS-1基因可能参与调控山羊季节性繁殖,而RFRP基因是否调控季节性繁殖或以何种方式作用还需要进一步研究。本研究可为山羊KiSS-1和RFRP基因功能研究打下基础,并为揭示山羊繁殖季节性的遗传基础提供参考。

RFRP-3对哺乳动物生殖功能和能量平衡的影响

哺乳动物的生殖功能受体内状态和外部环境综合作用的影响,这种综合作用通过作用于HPG轴的刺激因子和抑制因子之间的相对平衡来调控生殖。RFRP-3是目前下丘脑中唯一已知的HPG轴抑制因子。大量研究证实,RFRP-3能够抑制GnRH和LH的分泌,进而影响生殖功能。然而,RFRP-3对LH分泌的抑制作用是发生在垂体水平还是下丘脑水平尚不清楚。此外,RFRP-3还可能参与了MLT对哺乳动物季节性繁殖调控的信号通路,但是MLT对RFRP-3神经元的作用方式仍不清楚。此外,RFRP-3还可能在能量平衡和动物行为的调控中发挥着重要作用。文章就RFRP-3对HPG轴的调节机制以及其在能量平衡调节和行为调控中的作用进行了系统的阐述,并针对目前尚待解决的一些问题进行了探讨。

RFRP基因多态性与中国荷斯坦牛超数排卵性状关系的研究

本试验将RFRP基因作为繁殖性状的候选基因,对其外显子进行扩增、测序、序列比较和PCRSSCP检测,研究该基因在荷斯坦牛不同个体之间的差异以及基因多态性与奶牛超数排卵处理效果的关系。其中,基因型AA、AG和GG的基因型频率分布为0.20、0.54和0.26。等位基因A和G的频率分别为0.47和0.53。GG基因型的卵子数量显著高于AG和AA基因型(P<0.05)。因此认为,RFRP基因多态性很可能与超数排卵的卵子数量有关系,RFRP可作为提高可用胚胎数的一个候选基因。

RFRP-3对雌性仔猪生长性能、血清生化指标及葡萄糖代谢的影响

为了探讨RF-酰胺相关肽-3(RFRP-3)对雌性仔猪生长性能、血清生化指标及葡萄糖代谢的影响,选取6周龄雌性仔猪15头,随机均分为3组,分别为对照组、RFRP-3低剂量组和高剂量组,每天分别腹腔注射0.9%生理盐水、0.1 mg/mL RFRP-3和1 mg/mL RFRP-3两次,每次1 mL,连续14 d。结果:与对照组相比,腹腔注射RFRP-3极显著增加雌性仔猪平均日增重(P<0.01),显著降低料重比(P<0.05);肥胖指标POI指数极显著增加(P<0.01);白色脂肪和胰腺比重显著增加(P<0.05,P<0.01);血清生化指标分析发现,腹腔注射RFRP-3仔猪血清中甘油三酯、葡萄糖含量极显著升高(P<0.01),高剂量组肝脏质量和低密度脂蛋白含量显著升高(P<0.05);空腹血糖试验发现RFRP-3极显著诱导血糖总量升高(P<0.01);肝脏PEPCK mRNA表达水平显著上升(P<0.05),GCK mRNA表达水平极显著下降(P<0.01)。本试验表明,腹腔注射RFRP-3可提高雌性仔猪生长性能并伴随血糖和血脂浓度的升高,且这种生理功能的发挥与肝脏糖代谢相关因子的变化密切相关。

嘉兴黑猪FSHβ和RFRP基因外显子多态性与繁殖性状的相关分析

本研究以128头嘉兴黑猪为实验群体,通过直接测序检测FSHβ和RFRP基因外显子单核苷酸多态性(SNP)位点,并探讨其多态性对母猪繁殖性状的影响。结果表明:在FSHβ和RFRP基因外显子中各检测到1个SNP位点。FSHβ基因在外显子2存在突变位点C1035T;RFRP基因在外显子3存在突变位点T4696C,且2个位点均存在AA、AB、BB 3种基因型;FSHβ-C1035T对嘉兴黑猪的初生窝重有显著影响(P<0.05),RFRP-T4696C对初产母猪的总产仔数、产活仔数和初生窝重均有显著影响(P<0.05)。综上所述,FSHβ、RFRP基因外显子多态性对嘉兴黑猪繁殖性状有一定的遗传效应,可作为潜在的遗传标记。

RFRP-3在湖羊雄性生殖器官发育过程中表达的研究

[目的]本文旨在揭示RFRP-3基因在不同年龄段湖羊雄性生殖器官发育中的表达变化规律及其参与繁殖营养调控的作用。[方法]利用荧光定量PCR法检测RFRP-3在10日龄、4月龄、8月龄等不同阶段雄性湖羊(n=3)的睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾及输精管中的表达情况;利用免疫组化法检测RFRP-3在8月龄雄性湖羊生殖器官的定位表达;利用荧光定量PCR法分析不同营养饲喂水平下RFRP-3基因在湖羊雄性生殖器官中的表达差异。[结果]RFRP-3基因在睾丸和输精管中相对高表达,在附睾头,附睾体,附睾尾中相对低表达;RFRP-3蛋白分布于睾丸的生精小管内部、输精管及附睾,可见免疫阳性反应;在高能高蛋白水平饲喂下,RFRP-3基因在雄性湖羊生殖器官中表达量显著低于正常饲喂水平。[结论]RFRP-3在湖羊雄性生殖器官内表达,且在不同组织和不同营养饲喂水平下表达量差异显著,为研究RFRP-3的生物学功能及其参与动物繁殖营养调控提供了依据。

RFRP-3对大鼠采食行为和生长性能的影响

为了探讨RFRP-3对大鼠采食行为以及生长性能的影响,选取体重相近的清洁级SD大鼠30只,随机分为3组,分别为对照组[腹腔注射生理盐水200μL/(次·只)]、RFRP-3低剂量组[腹腔注射1μg/100μL RFRP-3,200μL/(次·只)]和高剂量组[腹腔注射10μg/100μL RFRP-3,200μL/(次·只)],每组10只,雌、雄各半,每天注射2次,连续腹腔注射14 d。观察和记录大鼠的采食量、采食行为和体重变化,计算料肉比及Lee指数,分离血清并检测血脂相关指标,并对下丘脑食欲相关因子的表达水平进行检测。结果表明,与对照组相比,仅在光照环境中腹腔注射高剂量RFRP-3会导致大鼠采食量极显著(P<0.01)增加;采食行为方面主要表现为采食频率极显著(P<0.01)增高和饱腹率明显下降;生长性能方面主要表现为体重增长极显著(P<0.01)加快以及料肉比显著(P<0.05)降低;在肥胖指标中,Lee指数显著(P<0.05)增加,血清中甘油三酯和总胆固醇的含量极显著(P<0.01)升高;下丘脑NPY mRNA表达水平显著(P<0.05)上升,而POMC mRNA表达水平显著(P<0.05)下降。试验表明,腹腔注射RFRP-3可促进大鼠的采食行为并提高其生长性能,且这种生理功能的发挥可能是通过调节下丘脑食欲相关因子的变化完成的。

RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响。本研究采用从屠宰场收集健康母猪的卵巢中挑取的GV期卵母细胞,随机分为3组,在培养基中分别添加0、10^(-6)和10^(-8)mol·L^(-1) RFRP-3培养猪卵母细胞44 h后统计各组卵母细胞的成熟率;在后续试验中将收集到的卵母细胞随机分为2组,在培养基中分别添加0和10^(-8) mol·L^(-1) RFRP-3培养猪卵母细胞44 h,观察猪卵母细胞的卵丘扩展情况并计算各组的卵丘扩展指数和各组卵母细胞的成熟率;利用qRT-PCR检测卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)、卵母细胞分泌因子(GDF9、BMP15)和周期蛋白相关基因(CCNB1和CDK1)的表达变化;利用ELISA试剂盒检测MPF和cAMP的含量;采用放射免疫法检测孕酮和雌激素的浓度,每组卵母细胞量不少于100枚,每个试验重复3次。结果表明,与对照组相比,添加10^(-8)mol·L^(-1) RFRP-3培养猪卵母细胞可极显著降低卵母细胞的成熟率(P<0.01);通过显微镜观察并计算卵丘扩展指数发现,试验组中卵丘扩展无明显变化(P>0.05),但卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)的表达极显著下降(P<0.01);RFRP-3可以极显著降低猪卵母细胞MPF的含量(P<0.01),对cAMP的含量无显著影响(P>0.05);添加RFRP-3可促进GDF9(P<0.01)和BMP15(P<0.05)的表达,抑制CCNB1(P<0.05)和CDK1(P<0.05)的表达;同时试验组培养基中孕酮、雌激素的浓度也极显著下降(P<0.01)。综上,RFRP-3通过调控猪卵母细胞成熟相关因子和卵丘扩展因子的表达以及类固醇激素的分泌,从而抑制卵母细胞的体外成熟。本研究为阐明RFRP-3对哺乳动物卵母细胞的调控作用奠定理论基础。

RFRP-3对大鼠附睾生殖功能的影响

【目的】探究RFRP-3对大鼠附睾生殖功能的影响,为全面了解RFRP-3调控雄性动物的生殖生理功能提供理论依据。【方法】通过半定量RT-PCR检测不同发育阶段(20、40、60和80日龄)SD大鼠附睾中RFRP-3及其受体GPR147的表达情况;选取60日龄雄性SD大鼠,分别对其睾丸注射0(CK)、0.1、1.0和10.0μg/d的RFRP-3,连续注射7 d,然后通过组织石蜡切片、酶活性测定、Western blotting等分别检测不同剂量RFRP-3对SD大鼠附睾形态学、Caspase-3活性、凋亡相关蛋白(Caspase-3和Bcl-2)和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3和Atg5)表达的影响。【结果】RFRP-3和GPR147在不同发育阶段SD大鼠附睾中的表达水平呈波动性变化,均以60日龄的表达水平最高;不同剂量的RFRP-3均能导致SD大鼠附睾上皮细胞发生异常,使精子数量减少。与CK相比,不同剂量的RFRP-3均能极显著增加SD大鼠附睾Caspase-3活性(P<0.01,下同),还能显著(P<0.05,下同)或极显著提高附睾中活化Caspase-3与完整Caspase-3的比值,有效抑制Bcl-2的表达,且呈明显的剂量依赖关系。RFRP-3对SD大鼠附睾内自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-II/LC3-I和Atg5的表达出现相互矛盾的结果。【结论】RFRP-3在雄性大鼠附睾中有表达,但对附睾活性有直接抑制作用,具体作用原理是RFRP-3能诱导附睾中总Caspase-3裂解为活性Caspase-3并下调Bcl-2表达以触发附睾细胞凋亡,而附睾细胞的凋亡促使附睾退化及精子数量减少。

RFRP-3/GPR147信号通路在哺乳动物生殖系统中作用的研究进展

哺乳动物生殖系统的各项功能依赖于下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的调控,是多种因子参与的复杂的生物学过程。RFRP-3是目前下丘脑中唯一已知的HPG轴抑制因子。近年来大量研究发现,RFRP-3能与其受体GPR147结合,抑制促性腺激素释放激素、促黄体生成素的合成与分泌,进而影响生殖系统的功能。本文总结近十年有关哺乳动物RFRP-3/GPR147信号通路的研究,并系统阐述RFRP-3对HPG轴的可能调控机制以及其在生殖系统中的作用。

外源性RFRP-3和MLT对雄鼠初情期生长及繁殖性能的影响

【目的】探究外源性RF-酰胺相关肽3(RF-amide related peptide 3,RFRP-3)和褪黑素(melatonin,MLT)对雄性昆明小鼠初情期生长、繁殖性能的影响及两者之间的关系。【方法】以初情期雄性昆明小鼠为研究对象,单独给予雄鼠生理盐水、外源性RFRP-3或MLT以及混合给予RFRP-3、MLT,检测其对雄鼠平均增重、平均采食量、料重比、睾丸发育情况,血清生长激素(growth hormone,GH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平,以及生长、生殖相关基因表达的影响。【结果】外源性RFRP-3能抑制雄鼠GH基因表达,并抑制体重增长,提高料重比;而外源性MLT促进雄鼠GH基因表达,使体重增长较快,料重比降低;RFRP-3和MLT共同处理下,GH基因表达增加,体重增长速度与单独给予MLT组接近。RFRP-3可抑制褪黑素受体1A(melatonin receptor 1A,Mtnr1A)、LH基因表达及睾酮分泌,小鼠睾丸各级生精细胞和间质细胞数量减少;MLT可促进Mtnr1A、LH基因表达及睾酮分泌,睾丸间质细胞密度极显著增加(P<0.01);MLT和RFRP-3共同处理下,小鼠睾丸各级生精细胞和间质细胞数量减少,睾酮分泌显著减少(P<0.05)。【结论】外源性RFRP-3能一定程度抑制雄性小鼠初情期的生长及繁殖性能,外源性MLT可促进初情期雄性小鼠的生长及繁殖性能。

黄体期和卵泡期小尾寒羊KiSS-1与RFRP-3组织表达研究

为分析KiSS-1和RFRP-3基因在小尾寒羊不同繁殖时期(黄体期和卵泡期)下丘脑、垂体、性腺轴各组织中的表达差异,阐明这2个基因在绵羊发情转换中的表达模式,以常年发情的小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,对比分析了KiSS-1和RFRP-3基因在黄体期和卵泡期的小尾寒羊下丘脑—垂体—性腺轴各组织中的表达差异。结果表明:1)KiSS-1和RFRP-3基因在下丘脑、垂体、卵巢等10种组织中均有表达;2)黄体期和卵泡期下丘脑中KiSS-1基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),卵泡期下丘脑和松果体中KiSS-1基因表达量均显著高于黄体期(P<0.05);3)黄体期和卵泡期下丘脑和卵巢中RFRP-3基因的表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且卵巢中RFRP-3基因在黄体期的表达量显著高于卵泡期(P<0.05)。综上,研究发现KiSS-1和RFRP-3基因在绵羊发情调控中均发挥重要作用,KiSS-1促进发情而RFRP-3抑制发情。

常年发情山羊RFRP基因克隆与相对表达研究

为了研究山羊RF酰胺相关肽（RFRP）与繁殖性状的相关性,试验采用RT-PCR技术和q PCR技术对山羊RFRP c DNA进行克隆、序列分析和组织表达研究。结果表明：金堂黑山羊RFRP基因编码区全长537 bp,编码179个氨基酸; RFRP基因编码区核苷酸序列与山羊、绵羊、牛、野猪、人、褐家鼠和小鼠的同源性为72. 5%~100%;利用NJ法以序列编码区构建物种间分子系统进化树,聚类结果符合动物学分类结果。常年发情的多羔金堂黑山羊垂体RFRP基因表达量显著低于季节性发情、单胎藏山羊（P〈0. 05）,但其他组织的表达量在品种间无显著差异（P〉0. 05）;垂体和卵巢中RFRP基因表达量显著高于子宫和输卵管（P〈0. 05）。说明RFRP可能是影响山羊季节性发情、排卵活动的重要因素之一。

哺乳动物季节性繁殖的神经内分泌调节机制

动物的季节性繁殖,是指其繁殖活动从静止到复苏的一个年周期性循环。研究显示,kisspeptin和RFRP对繁殖的季节性变化具有重要作用。非繁殖期最显著的特点是雌激素对GnRH分泌的负反馈效应的增加,而雌激素的这种效应是由kisspeptin神经元传导的。因此,kisspeptin是影响繁殖活动的一个重要因子。RFRP的表达依赖于褪黑激素的分泌并呈现出季节性变化,在非繁殖期对繁殖活动的抑制作用非常明显。此外,甲状腺激素在繁殖期的终止上发挥着至关重要的作用,而多巴胺能神经元A14/A15也促进了雌激素负反馈效应的季节性变化。这些神经元系统通过协同作用一起调节了生殖功能随光周期的季节性转变。文章对繁殖的季节性和这4个神经内分泌系统之间的关系进行了系统的阐述。

RF酰胺相关肽3对大鼠脾脏形态结构及免疫功能的影响

试验旨在探究RF酰胺相关肽3(RFamide-relatedpeptide,RFRP-3)对大鼠脾脏形态结构及免疫功能的影响。试验由两部分组成,一部分选取SD大鼠10只,用于RFRP-3及其G-蛋白偶联受体147(G-protein coupled receptor,GPR147)的分布定位研究;另一部分选取SD大鼠30只,随机分为3组,雌雄各半,分别为对照组(0.9%氯化钠)、RFRP-3低剂量组和高剂量组(1和10μg/100μL,共注射200μL),连续腹腔注射14 d。采用半定量RT-PCR、Western blotting方法检测大鼠脾脏中RFRP-3及GPR147的表达;运用免疫组织化学的方法确定其分布与定位;大鼠麻醉后心脏采血并分离血清,用抗体芯片检测相关细胞因子的含量;大鼠解剖后取脾脏,测量脾脏长度并计算脾脏指数;采用HE染色方法检测腹腔注射RFRP-3对脾脏形态学变化的影响;采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-1β和TNF-αmRNA的表达。结果表明,RFRP-3 mRNA在SD大鼠脾脏中无表达,GPR147 mRNA呈中等程度表达。Western blotting结果显示,在SD大鼠脾脏中均有RFRP-3及其受体GPR147的表达;RFRP-3主要分布于脾脏的红髓,GPR147主要分布于白髓;腹腔注射不同浓度的RFRP-3均可使血清IL-1α、IL-1β、TNF-α及MCP-1升高,脾脏长度增加、脾脏指数升高。HE染色结果显示,脾脏白髓面积增大、脾小结增多;红髓内脾索增粗、红细胞明显增多。实时荧光定量PCR结果显示,脾脏中IL-1β和TNF-αmRNA表达量极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05)。上述结果表明,RFRP-3可能通过旁分泌方式到达大鼠脾脏上的GPR147受体进而发挥其增强脾脏免疫功能的作用。

应激导致卵巢功能下降发病机制的研究进展

应激是导致现代女性卵巢功能下降的重要原因之一。应激反应在下丘脑、垂体和卵巢水平均能够对卵巢配子生成和甾体激素合成功能产生损害。本文从下丘脑、垂体和卵巢3个方面对近几年国内外有关应激导致卵巢功能低下的最新机制研究进行综述,着重介绍应激对卵巢局部产生的影响,并展望卵巢微环境内神经来源分子在应激对卵巢功能调控方面的作用。

机器学习解构区域金融风险防控研究进展

区域金融风险防控(RFRP)无论在管理区域传统金融风险(TFR)还是坚守不发生区域金融系统风险(FSR)中都是不可或缺的。随着大数据规模的持续增长,金融风险形态变化的不确定性,传统计量方法模拟金融风险防控的效率、精度、应用等方面都面临着无法克服的困境。当下,越来越多的机器学习(ML)模拟RFRP防控的新方法和新技术受到研究者的重视。首先提出了RFRP防控新的科学分类和ML观念基础;其次总结了区域TFR防控的ML理论方法和应用技术,对各类代表性研究所论述区域TFR防控的关键逻辑、模型算法、学习效果进行了比对解析,对ML不同方法的优点、局限和传统场景进行了归类分析;然后梳理了区域FSR防控的ML理论方法和应用研究,对各类典型文献所解析区域FSR防控的关键脉络、ML算法、学习效果进行了对比研究,对ML不同模型的优势、缺陷和金融风险场景进行了阐述研究;最后提出了六个ML模拟RFRP防控的前景技术和新兴方向。