RGD肽修饰的异长春花碱-粉防己碱脂质体的制备及体外抑瘤作用研究

目的:制备RGD肽修饰的异长春花碱(VRB)-粉防己碱(TET)脂质体,研究其对脑胶质瘤C6细胞的抑制作用。方法:采用薄膜分散法和硫酸铵梯度法制备RGD肽修饰的VRB-TET脂质体,观察其形态和粒径分布,测定其中VRB的含量;以磺酰罗丹明B法分别测定空白靶向脂质体、VRB普通脂质体和RGD肽修饰的VRB-TET脂质体对C6细胞的抑制作用。结果:所制RGD肽修饰的VRB-TET脂质体呈圆球状或类圆球状,表面光滑,粒径为120 nm左右,其中VRB的平均含量为28.27μg/m L(RSD=0.38%,n=3)。空白靶向脂质体对C6细胞生长无显著影响;RGD肽修饰的VRB-TET脂质体能明显抑制C6细胞生长,其作用后细胞存活率明显低于VRB普通脂质体(P<0.05)。结论:成功制得RGD肽修饰的VRB-TET脂质体,其具有明显的抑制C6细胞生长的作用。

天然气井试油完井过程中快速泄压对井下工具密封性的影响

压控式井下工具空气室的密封元件不仅受到天然气、二氧化碳、酸碱井液等介质的侵蚀,还要承受井下温度和压力变化带来的影响。在川渝地区天然气井的试油完井中,压控式井下工具多次出现因“气体快速减压(RGD)”效应影响而造成密封元件的密封性能降低,高压天然气渗入空气室形成了圈闭压力,致使工具不能正常工作的情况。为了降低RGD效应对试油完井井下工具密封性的影响,以可控封堵阀为例,开展了在井下工况条件下空气室渗入高压天然气的模拟实验,验证特定的井况条件下会产生RGD效应,使橡胶密封元件的密封性能降低;同时通过模拟实验对比,优选了能耐RGD效应的“O”型密封圈,该密封圈在现场应用了4口井,均未出现空气室渗入天然气的现象。天然气的快速泄压对井下工具密封性的影响可以通过控制压降速率、减少开井关井次数和使用耐RGD效应的“O”型密封圈进行防治。为了提高井下工具密封的可靠性,提出了优化设计空气室的密封结构、减小空气室“O”型密封圈承受的密封压差的建议。该防治天然气快速泄压影响井下工具密封性的技术,为试油完井井下工具的设计和密封件的选择提供了借鉴。

RGD与R8肽共修饰麦角甾醇联合顺铂脂质体在裸鼠体内的肿瘤靶向性及抑瘤作用研究

目的对于Cyclo[Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(Ac-CH_2-SH)](RGD)与R8肽共修饰麦角甾醇联合顺铂脂质体递药系统进行裸鼠体内靶向性及抗肺癌作用初步评价。方法第一步,对造模成功的A549荷瘤裸鼠尾静脉注射包封有近红外DiR荧光染料的RGD环肽与R8肽修饰、单一RGD环肽修饰、单一R8肽修饰、不修饰麦角甾醇联合顺铂脂质体,在小动物活体成像仪下不同时间点下观察脂质体的体内分布并评价其靶向性。第二步,连续给药14 d,观测小鼠体重、肿瘤生长情况,于第14天处死动物,取血,并摘取各小鼠瘤组织、脾脏、肺组织,以瘤重、抑瘤率、血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、脾脏指数、瘤组织及肺脏的病理组织改变为指标,初步评价各脂质体在小鼠体内的抑瘤作用。结果靶向性结果表明,RGD与R8共修饰脂质体在荷瘤裸鼠肿瘤部位的荧光强度最高,高浓度下靶向性最为明显,其他几组的靶向作用均较弱。初步药效学结果表明,各给药组对于小鼠体重无明显变化,RGD与R8共修饰脂质体高、中剂量组有明显抑瘤作用,其中,高剂量组抑瘤作用最为显著,且血清中高表达TNF-α细胞因子,RGD与R8共修饰脂质体中、低剂量组脾脏指数较阳性药组显著升高。结论 RGD环肽与R8肽共修饰麦角甾醇联合顺铂靶向脂质体递药系统,进一步提高了体内肿瘤靶向性及抗肺癌作用。

新牛蛙抗肿瘤肽RGD-T-La(FS)嵌合体的设计及其抗肿瘤作用

为了研究新牛蛙抗肿瘤肽RGD-嵌合体的抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞的作用机制。本研究以新牛蛙抗菌肽Temporin-La（T-La）为基序，通过生物信息学分析，改变特定氨基酸残基设计合成新的抗肿瘤肽Tempor[n-La（S）（T-La（S））和Temporin-La（FS）（T—La（FS）），氨基端偶联RGD肽成RGDT—La、RG胁T-La（S）和RGD-T—La（FS）抗肿瘤肽，通过圆二色谱检测多肽二级结构，MTT法体外筛选抗肿瘤细胞活性多肽。使用流式细胞仪测定不同肿瘤细胞对不同多肽的吸收量，筛选对抗肿瘤肽敏感的肿瘤细胞。利用激光共聚焦显微镜实时观察抗肿瘤活性强的抗肿瘤肽对敏感肿瘤细胞的杀伤作用，并用扫描电镜观察抗肿瘤肽及其RGD嵌合体肽对肿瘤细胞的作用机制。在新牛蛙抗菌肽Temporin—La基序上设计T—La（S）和T—La（FS）2种抗肿瘤活性肽，圆二色谱仪测定其二级结构均呈a螺旋型，MTT结果显示黑色素瘤细胞（B16）对几种多肽的敏感性最强，10mg／L质量浓度时，RGD-T-La（FS）对B16的毒性作用最强，细胞存活率为24．65％。激光共聚焦显微镜实时观察到，RGD-La（FS）和RGl3-La（S）对肿瘤细胞都有较强的杀伤作用。扫描电镜结果显示，RGD嵌合体多肽对肿瘤细胞的杀伤作用具有位点靶向性。流式细胞仪检测HepG2对FITC-RGD-T—La（FS）的吸收量最大，检测到荧光强度为800950．70。经改造的多肽T—La（FS）可以增加其对肿瘤细胞的杀伤作用，且偶联RGD的嵌舍体RGD-T—La（FS）对肿瘤细胞的杀伤作用更具有靶向专一性，为抗肿瘤肽作为抗肿瘤药物的临床应用提供科学依据。

重组双功能水蛭素抗凝防栓作用的实验研究

目的研究注射用重组双功能水蛭素(RGD-Hirudin)抗凝防栓的作用。方法选用36只SD大鼠制备股动脉切断吻合模型,随机分成6组,每组6只。1．生理盐水(对照)组。2．肝素钠组(150U/ kg^(-1)·d^(-1))。3．野生型水蛭素组(0．5mg/kg^(-1)·d^(-1))。4．重组双功能水蛭素组(0．1mg/kg^(-1)·d^(-1))。5．重组双功能水蛭素组(0．2mg/kg^(-1)·d^(-1))。6．重组双功能水蛭素组(O．5ms/kg^(-1)·d^(-1))。术前30 min、术后60 min和术后72 h心脏取血,测定血小板聚集率、aPTT、PT、TT和血浆纤维蛋白原的含量。术后3 d,切取吻合口远、近端血管5mm,作病理切片分析。结果重组双功能水蛭素组(0．1mg/kg^(-1)·d^(-1))的血管通畅率与野生型水蛭素组的疗效相同,优于肝素钠组,随着剂量的加大,治疗效果越好,并有明显的量效关系。血液学指标证明：重组双功能水蛭素能抑制血小板聚集,显著延长aPTT、PT和TT,对血浆纤维蛋白原几乎没有影响。结论重组双功能水蛭素具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重活性,抗凝、防栓作用强。与野生型水蛭素相比,产生相同治疗效果所需剂量小,疗效优于肝素钠和野生型水蛭素。