外源性RGS16基因稳定转染对胶质瘤C6细胞生长的影响

背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线、平板克隆形成等方法研究RGS16基因对胶质瘤细胞周期、生长及增殖的影响。结果:成功构建了稳定表达RGS16和表达空载体的细胞系C6-RGS16、C6-GFP。C6-RGS16、C6-GFP和C6经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为28.5%、18.9%和14.3%(P<0.05);生长曲线表明C6-RGS16生长的速度明显快于C6-GFP及C6,但其平板克隆形成率分别为12%、25%和25%(P<0.05)。结论:RGS16促进C6细胞周期从G1期向S期过渡,加快细胞生长速度,但是并不促进细胞克隆形成。

RGS16基因抑制肺癌发病进展的功能研究

[目的]研究RGS16基因对人肺癌发病及进展的作用。[方法]构建过表达慢病毒载体Lenti-RGS16,感染A549细胞,以CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕实验、FITC/PI染色法检测A549细胞行为包括增殖、克隆形成、迁移、凋亡率变化,以裸鼠成瘤实验检测A549细胞体内生长。[结果]A549细胞中RGS16基因表达量提高3.6倍,细胞生长、增殖及迁移能力分别降低73%、62.8%、88%,细胞凋亡率增加3倍;在动物成瘤实验终点时,RGS16过表达组的肿瘤体积比对照组显著减少(240 vs 1090 mm3),瘤体重量也显著降低(0.33 vs 0.95 g)。经分析TCGA数据库发现RGS16基因在肺癌组织中表达比正常对照组织中减少52.8%。[结论]RGS16基因抑制肺癌A549细胞生长、增殖及迁移,促进细胞凋亡。

内外源性p53诱导大鼠胶质瘤细胞C6 RGS16蛋白的表达

目的:探讨内外源性野生型p53是否可以诱导大鼠胶质瘤细胞C6RGS16表达。方法:在大鼠胶质瘤细胞C6中,分别转染pEGFP-C3-wtp53或以400ng/ml表阿霉素诱导内源性野生型p53表达,于处理后0h、4h、8h、16h、26h、32h和52h收集细胞爬片、固定后免疫细胞化学检测p53蛋白与RGS16蛋白表达。结果:转染pEGFP-C3-wtp53后4h、8h、16h、26h和32h时均检测到p53蛋白表达,在8h和16h时检测到RGS16蛋白表达;在400ng/ml表阿霉素处理后,仅在26h时检测到p53表达而始终未见到RGS16蛋白表达。结论:内外源性野生型p53可以诱导大鼠胶质瘤细胞C6RGS16蛋白的表达。