miR-216a-3p miR-128-3p通过调控RGS17抑制口腔鳞状细胞癌细胞表型恶化的机制研究

目的:观察miR-216a-3p、miR-128-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞表型表达的影响,并探究其潜在的作用机制。方法:运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测癌组织、癌旁组织、人正常口腔角质形成细胞(hNOK)、OSCC癌细胞(SCC-9、SCC-25、HN4)中miR-216a-3p、miR-128-3p、G蛋白信号调节器17(RGS17)的表达;脂质体法将mimic-NC组(转染mimic)、mimic-miR-216a-3p组(转染miR-216a-3p mimic)、mimic-miR-128-3p组(转染miR-128-3p mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-RGS17组(转染si-RGS17)、mimic-miR-216a-3p+pcDNA组(共转染miR-216a-3p mimic和pcDNA)、mimic-miR-216a-3p+pcDNA-RGS17组(共转染miR-216a-3p mimic和pcDNA-RGS17)、mimic-miR-128-3p+pcDNA组(共转染miR-128-3p mimic和pcDNA)、mimic-miR-128-3p+pcDNA-RGS17组(共转染miR-128-3p mimic和pcDNA-RGS17)转染SCC-9细胞。5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)染色、克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡能力;双荧光素酶报告实验、RNA沉降实验验证靶向关系;蛋白免疫印迹(WB)实验检测RGS17蛋白。结果:与癌旁组织或hNOK细胞相比,OSCC组织(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期)、癌细胞(SCC-9、SCC-25、HN4)中miR-216a-3p、miR-128-3p表达显著降低,RGS17表达显著升高(P<0.05)。与mimic-NC组相比,mimic-miR-216a-3p、mimic-miR-128-3p组细胞EdU阳性率、克隆形成率、迁移侵袭细胞数均显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。si-RGS17组细胞具有与mimic-miR-216a-3p、mimic-miR-128-3p细胞相似的变化。miR-216a-3p、miR-128-3p共同靶向负调控RGS17。过表达RGS17显著减弱miR-216a-3p、miR-128-3p对SCC-9细胞增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论:miR-216a-3p、miR-128-3p抑制OSCC细胞增殖、迁移侵袭,促进凋亡,这与靶向RGS17有关。

RGS17在冠状动脉粥样硬化中的表达

目的通过免疫组织化学染色来验证RGS17在人冠心病猝死者冠状动脉管壁组织中的表达情况。方法收集冠心病猝死案例41例(实验组)及非心源性死亡10例(对照组),根据冠脉狭窄程度分为实验组1 (Ⅰ~Ⅱ级),实验组2 (Ⅲ级),实验组3 (Ⅳ级)。通过免疫组化来检测RGS17在冠心病冠脉组织中的表达情况。每张切片取四个视野,测定平均光密度值后采用SPSS23.0进行单因素方差分析。结果 41例冠心病猝死案例中以男性多见,多位于41~50岁;冠状动脉狭窄以Ⅳ级多见;免疫组化染色显示RGS17在冠心病猝死者冠状动脉管壁中膜表达明显高于对照组(P<0.05),且RGS17在冠状动脉狭窄Ⅲ、Ⅳ级的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ级的管壁组织中的表达。结论 RGS17在冠心病猝死者冠状动脉管壁中呈高表达;RGS17在冠状动脉狭窄Ⅲ、Ⅳ级的表达明显高于狭窄Ⅰ、Ⅱ级的管壁组织。

miR-367-3p靶向RGS17对HL-60细胞增殖和侵袭及凋亡的作用机制

目的探讨微小RNA367-3p(miR-367-3p)对白血病细胞HL-60增殖、侵袭和凋亡的作用及相关机制。方法采用Lipofectamine^(TM)3000将miR-367-3p mimic、mimic NC、miR-367-3p+pcDNA3.1、miR-367-3p+pcDNA3.1-G蛋白信号传导的调节蛋白(RGS)17分别转染HL-60细胞,作为miR-367-3p过表达组、NC组、miR-367-3p+pcDNA3.1组和miR-367-3p+pcDNA3.1-RGS17组,对照组不作任何处理。qRT-PCR实验检测人正常单核细胞SC和HL-60中miR-367-3p的表达水平以及RGS17mRNA的表达水平,MTT实验检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡以及细胞周期,Transwell检测各组细胞侵袭能力,双荧光素酶实验验证miR-367-3p和RGS17靶向关系,蛋白质印迹法检测各组细胞RGS17、Cleaved-Caspase-3、Survivin、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白表达水平。结果人正常单核SC细胞中miR-367-3p表达量为1.01±0.04,RGS17mRNA表达量为0.36±0.02;HL-60细胞中miR-367-3p表达量为0.36±0.06,RGS17mRNA表达量为0.96±0.04;与SC细胞比,HL-60细胞中miR-367-3p表达量下降(t=15.337,P<0.001),RGS17mRNA表达量升高(t=25.456,P<0.001)。与对照组和NC组比较,miR-367-3p过表达组24、48和72h细胞光密度值下降,F值分别为375.874、284.645和77.849,均P<0.001。对照组、NC组、miR-367-3p过表达组细胞凋亡率分别为(4.38±0.56)%、(4.21±0.86)%和(12.57±1.07)%,Cleaved-Caspase-3蛋白表达量分别为0.30±0.03、0.33±0.03和1.61±0.08,Survivin蛋白表达量分别为0.96±0.07、0.94±0.06和0.14±0.02;3组间凋亡率及蛋白表达量差异有统计学意义,F值分别为93.475、671.080和232.506,均P<0.001。上述各组细胞G_(1)期比例分别为(52.56±2.01)%、(50.02±1.45)%和(82.56±1.45)%,G_(2)期比例分别为(17.68±1.64)%、(19.14±2.28)%和(7.46±1.03)%,S期比例分别为(29.76±3.53)%、(30.84±2.55)%和(9.98±2.47)%;组间G_(1)、G_(2)和S期比例差异有统计学意义,F值分别为357.990、40.703和49.578,均P<0.001。各组细胞穿膜数目分别为59.33±7.51、65.33±7.51和25.33±4.04,组间细胞穿膜数目差异有统计学意义,F=32.465,P=0.001。与对照组和NC组比,miR-367-3p过表达组细胞侵袭能力下降,细胞凋亡率升高,细胞在G_(1)期的比例升高,G_(2)和S期的比例下降,Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平升高,Survivin、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平下降,均P<0.05。双荧光素酶实验结果显示,miR-367-3p靶向RGS17。蛋白质印迹结果显示,与对照和NC组比较,miR-367-3p过表达组RGS17蛋白表达水平下降。与miR-367-3p+pcDNA3.1组比较,过表达RGS17可逆转miR-367-3p对HL-60细胞增殖、侵袭的抑制和促进细胞凋亡的作用。结论miR-367-3p靶向RGS17抑制HL-60细胞增殖和侵袭并促凋亡,其可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路实现。

RGS17通过NF-κB信号通路调节口腔鳞癌细胞增殖迁移侵袭的研究

目的:探究G蛋白信号传导17(G protein signal transduction 17,RGS17)在口腔鳞状细胞癌中的表达及其调控癌细胞增殖、迁移侵袭的潜在机制。方法:选取2018年2月~2022年1月本院手术切除的口腔鳞状细胞癌患者75例,设癌旁组织、癌组织;人口腔上皮细胞HOEC、口腔鳞状细胞癌细胞SCC-9、SCC-25和CAL-27,筛选最适细胞SCC-25;构建sh-ctrl、shRGS17-1、shRGS17-2的SCC-25细胞。RT-qPCR、蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞RGS17的mRNA和蛋白表达及磷酸化(p)-核因子κB抑制因子(IκBɑ)、IκBɑ、p-核因子κB P65(NF-κB P65)、NF-κB P65的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK8)、克隆形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力。结果:癌组织、癌细胞中RGS17的mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织、HOEC细胞(P<0.05)。敲减RGS17的SCC-25细胞的细胞活性、克隆形成数、划痕愈合率及迁移侵袭能力均明显低于sh-ctrl细胞,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白降低,Bax、c-caspase-3蛋白表达高于sh-ctrl细胞(P<0.05)。与sh-ctrl细胞相比,敲减RGS17后,细胞p-IκBɑ蛋白、p-IκBɑ/IκBɑ值均显著升高,p-NF-κB P65蛋白、p-NF-κB P65/NF-κB P65值均显著降低(P<0.05)。结论:RGS17在口腔鳞状细胞癌中高表达,敲减RGS17抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭,这与抑制NF-κB信号通路活性有关。

不同基因型烤烟叶片致香物质含量的对比分析

对中国推广种植的5个不同基因型烤烟品种烤后烟叶的致香物质含量进行了比较分析。结果表明,上部叶总的致香物质含量由高到低依次为NC89、K326、RG17、云烟85、中烟98,中部叶依次为云烟85、中烟98、NC89、RG17、K326。不同基因型烤烟叶片间致香物质的含量差异比较大。因此,培育优良的烤烟品种是生产优质烟叶的关键措施之一。

烤烟新品种引种试验初报

对近几年全国品种审认定的几个烤烟新品种的主要性状进行了小区比较试验。试验结果表明,中烟100、新品种RG17与对照品种K326的产量相当,显著高于新品种K346、云烟87、云烟85和龙江911;中烟100的产值最高,与K326、RG17、K346、RG17差异不显著,但显著高于云烟85和龙江911;其它农艺性状基本与对照品种相当。

烤烟新品种RG17引种简报

1997～ 1999年河南省邓州市烤烟良种区域试验和较大面积的生产示范种植表明 ,RG17产、质性状好 ,易烘烤 ,高抗黑胫病、中抗赤星病 ,色泽、油分、含钾量优于对照NC89,各部位叶片比例更加协调 。

烤烟新品种RG17的引种与示范

烤烟品种RG17经区域试验和较大面积的示范种植结果表明，该品种产质性状好、耐熟易烤、高抗黑胫病、中抗赤星病，色泽、油分、叶片含钾量均优于NC89品种，各部位叶片比例更加协调，因此具有推广应用价值。

1999年国家审定通过的烟草新品种介绍

１９９９年１月３０日至２月１日，全国烟草品种审定委员会第三届第三次会议在重庆市召开。会上审定了３个烟草品种，其中两个烤烟品种，一个白肋烟品种，现介绍如下。中烟９８（ＣＦ８０）１．品种来源由中国烟草总公司青州烟草所１９８２年以８２－４０２７（Ｇ２８×单...

烟草新品种介绍

１９９９年１月３０日至２月１日，全国烟草品种审定委员会第三届第三次会议在重庆市召开。会上审定了３个烟草品种，其中两个烤烟品种，一个白肋烟品种，现介绍如下。中烟９８（ＣＦ８０）１品种来源由中国烟草总公司青州烟草所１９８２年以８２－４０２７（Ｇ２８×单...