基于三代测序技术的RHD、RHCE基因mRNA研究

目的建立基于Nanopore的RH基因mRNA三代测序方法,探讨D阳性和D^(el)表型中RHD、RHCE基因mRNA转录本的种类和表达水平差异。方法选取2021年3月~2022年5月成都市各医院送检至本实验室的经RhD血清学初筛及确证试验阴性的RhD阳性标本5例、D^(el)型标本5例。分离有核红细胞和白膜层,提取DNA和RNA,采用PCR-SSP对RhD阳性、D^(el)型基因分型,mRNA逆转录为cDNA后,采用1对引物同时对RHD、RHCE基因的全长mRNA扩增。分别采用Sanger测序和基于纳米孔的三代测序技术对扩增产物进行测序,并对RHD、RHCE基因mRNA转录本的不同剪接体种类和表达量进行分析。结果本研究建立的方法可同时扩增出RHD和RHCE的全长转录本,在10例标本中检测到了10种不同RHD基因mRNA转录本、9种RHCE基因mRNA转录本。D^(el)型中可检测到RHD的全长转录本(RHD-201),但表达量显著低于RhD阳性标本,D^(el)标本中转录本RHD-207(D^(el)789)表达量显著高于RhD阳性标本,转录本RHD-208(D^(el)8910+213)仅在D^(el)型个体中检出,其他RHD转录本以及所有RHCE转录本在2种个体中未发现显著差异。结论本研究成功建立了RHD、RHCE基因mRNA三代测序全长转录本异构体的分析方法,发现RHD、RHCE基因存在复杂的选择性剪接模式,为血型基因变异体mRNA选择性剪接研究提供了新方法。

孕产妇Rh表型分布特征及相容性输血的可行性探讨

目的:分析重庆地区孕产妇Rh表型分布特征,探讨Rh表型在孕产妇中的临床意义及实行Rh表型相容性输血的可行性。方法:采用微柱凝胶法对65161例孕产妇进行ABO血型和Rh表型检测,以同期48122例男性为对照,通过χ^(2)检验对数据进行比较分析。结果:113283例样本中,RhD+112870例(99.64%),以CCDee(48.39%)和Cc DEe(32.88%)为主要表型,并检出重庆地区首例Rh缺失型D--表型;Rh D-413例(0.36%),以ccdee(52.78%)和Ccdee(33.41%)为主要表型;RhD+组与Rh D-组的Rh表型分布差异有统计学意义(P<0.01)。在65161例孕产妇中,Rh5种抗原的阳性率由高到低为D>e>C>c>E,与男性相比差异无统计学意义(P>0.05);孕产妇Rh表型分布与男性相比差异无统计学意义(P>0.05);不同ABO血型的孕产妇间Rh表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。在孕产妇中,正常妊娠人群、有不良流产史人群、采用人类辅助生殖技术人群和不孕症患者人群间Rh表型分布无明显差异(P>0.05),4个孕产妇人群与本地区综合性三甲医院住院患者和献血者相比,Rh表型分布差异无统计学意义(P>0.05)。RhD阳性孕产妇中,CcDEe表型找到相容性血液的概率为100%,CCDee、CcDee和CCDEe表型找到相容血液的概率为45%-60%,ccDEE、ccDEe、CcDEE表型找到相容血液的概率为5%-10%,其余表型的相容概率均低于0.5%;提供CCDee和ccDEE两个表型的血液即可满足99%以上患者7种Rh表型相容性输血需求。结论:应对孕产妇进行Rh表型检测,对需要输血的孕产妇推行Rh表型相同或相容性输血是切实可行的输血举措。

储存式自体输血在Rh(D)阴性血型产妇输血中的应用效果及安全性

目的探讨在Rh(D)阴性血型产妇输血中储存式自体输血应用效果以及安全性。方法选取2019年6月至2021年6月本院收治的90例Rh(D)阴性血型产妇作为研究对象,均采用储存式自体输血方式进行输血治疗干预,比较不同时间段血液学指标[血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、血小板(PLT)及红细胞压积(HCT)]变化。结果采血前、采血后24 h及回输血后,产妇Hb、RBC、PLT、HCT水平比较差异无统计学意义;所有产妇在采血过程中,均未呈现出手脚冰凉、面色苍白以及全身虚汗等表现;胎心监护未发现异常情况;所有新生儿Apgar评分8~10分,均在正常范围。结论合理采用储存式自体输血方式进行干预,可避免针对Rh(D)阴性血型产妇在实施手术过程中,呈现出血源紧张情况,安全性较高,值得临床推广应用。

RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL型红细胞短期内引起高效价抗-D的同种免疫研究

目的通过对1例RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞后诱发同种抗-D免疫的研究分析,探讨RhD阴性患者输注DEL型策略。方法采用血清学方法进行ABO及Rh系统血型抗原检测、不规则抗体筛查及鉴定,高分辨熔解曲线和基因测序分析检测DEL型的RHD基因分型。结果受血者为O型,RhD阴性。供血者为RHD 1227G>A突变的“亚洲型”DEL,Rh表型为Ccee。受血者输血后抗体筛查阳性,并鉴定为抗D和抗C,抗D效价512,抗C效价128。结论RhD阴性患者输注“亚洲型”DEL红细胞会引起抗-D同种免疫。因此对于RhD阴性献血者应加强DEL型的筛查,必要时可以增加RHD基因检测以保障输血安全。

Rh(D)初筛阴性孕妇妊娠史与抗D同种免疫的相关性分析

目的:探讨初筛Rh(D)阴性孕妇妊娠史与抗D同种免疫的相关性,更好地为Rh(D)阴性孕妇实施妊娠指导。方法:对2010年5月—2021年10月初筛为Rh(D)阴性的孕妇,采用试管法在盐水和抗人球介质下筛查血清中的意外抗体,分析抗体特异性并检测效价。通过询问孕产史,排除有输血史、注射免疫球蛋白及无免疫史个体,对妊娠史进行分类,探讨妊娠史对抗D同种免疫的影响。结果:对Rh(D)初筛阴性孕妇的1 355次意外抗体筛查中,去除重复检测、无孕产史、注射免疫球蛋白及有输血史孕妇,共计719例。抗体筛查检出意外抗体共33例,其中抗D 28例,合并抗C 2例,抗E 1例,抗M 3例,未鉴定出特异性的低效价冷抗体1例。719例Rh(D)阴性孕妇中孕1次、孕2次、孕3次、孕4次及以上的抗D阳性率分别为0.00%(0/177)、2.82%(8/284)、4.49%(7/156)、12.7%(13/102),差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠次数与抗D效价高低无统计学差异(P>0.05)。结论:Rh(D)阴性孕妇产生抗D的概率与妊娠次数呈正相关,减少妊娠次数可降低抗D抗体的产生。妊娠次数与抗D效价高低无明显关联性。

RhD--表型引起的胎儿新生儿溶血病的免疫学分析--附1例报道

目的分析1例胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)产生的原因,初步探讨产妇Rh缺失型D--形成的遗传背景。方法使用血清学方法对患儿及其母亲进行ABO血型、Rh分型,血液抗体细胞,谱细胞分析,探讨导致胎儿溶血的抗体以及Rh缺失型D--的血型血清学特点,对产妇进行RH基因序列分析。结果患儿母亲血型为O型,血清学试验结果显示Rh缺失型D--,怀疑为多次妊娠产生针对Rh高频抗原的抗-Hr0,抗体通过胎盘屏障,使患儿获得针对Rh高频抗原的抗-Hr0,导致HDFN,基因检测结果为RHCE^(*)Ce/RHCE^(*)Ce。结论对产妇开展Rh缺失型D--的形成机制进行深入研究,为HDFN换血治疗提供临床价值,也为特殊血型人群输血提供临床依据。

孕妇及胎儿Rh(D/E)免疫性溶血病的诊断与血液治疗

目的:探讨孕妇及胎儿Rh(D/E)血型不合的免疫性溶血病的治疗,预防孕妇早孕自然流产或不足月死胎。方法:用大量去除血浆和换血疗法对孕妇及胎儿或新生儿Rh(D/E)血型不合者进行治疗,以降低IgG抗D/E的含量,提高胎儿或新生儿的成活率。结果:2例孕妇及胎儿Rh(D)血型不合者去除血浆前IgG抗-D分别为512和1024,去除血浆3周后,IgG抗-D效价降至16和32,以后间断性的治疗,减少治疗频率,保持IgG抗-D≤64,置足月行剖宫术,产下正常男、女婴儿各1名;1例Rh(E)血型不合者未经治疗而胎死宫内;另1例Rh(D)新生儿溶血病(HDN)经换血治疗而得救。1年后随访,3例婴儿发育均良好,与正常婴儿无差异。结论:大量去除血浆,同时补充高蛋白饮食是治疗孕妇及胎儿RhD/E血型不合的免疫性溶血病的好方法,换血疗法是HDN治疗的最佳选择。

应用微柱凝胶法鉴定ABO及RH(D)血型

目的 应用微柱凝胶法全自动血型鉴定系统（以下简称微柱凝胶法）鉴定ABO及RH（D）血型。方法 选取100份正常献血者标本和100例住院患者标本，采用试管法和微柱凝胶法进行ABO和RH（D）血型鉴定，并选取14份已知ABO血型的亚型标本和10份弱D抗原的标本，采用两种方法进行比较。结果 在正常献血者和患者的ABO及RH（D）定型中，两种方法获得的结果均一致。采用单抗试剂，微柱凝胶法可检出14份亚型标中的9份；试管法可检出14份亚型中的10份。采用人血清抗体，微柱凝胶法可检出14份亚型中的6份；试管法可检出其中的7份。结论 在鉴定正常的ABO及RH（D）血型时，两种方法的结果差异无显著意义，微柱凝胶法可取代传统的试管法用于常规的ABO和RH（D）血型鉴定。

Rh(D)阴性孕产妇IgG抗体检测分析

目的了解Rh(D)阴性血型的孕妇和产妇Rh和ABO血型免疫抗体检出率以及导致新生儿溶血病情况。方法对51名Rh(D)阴性血型的孕妇和产妇进行Rh和ABO血型系统免疫抗体检测。结果总抗体检出率为37.26%,抗体效价为2～1024,发生新生儿溶血病7例。孕妇和产妇血中血型抗体效价和检出率与妊娠胎次、胎龄、输血史具有正相关性。孕妇IgG抗D效价>64时,发生新生儿黄疸及新生儿溶血病的危险增高,孕妇和产妇ABO血型与丈夫相合者Rh系统抗体产生率较不相和者高。结论Rh(D)阴性孕产妇定期进行抗体检测,有助于HDN的预防、诊断和治疗。

Rh(D)阴性手术患者输血方案探讨

目的探讨Rh(D)阴性手术患者的输血方案。方法术前制定不同的输血方案,将Rh(D)阴性手术患者分为4组:第1组为择期手术,术中出血可能性小,放弃常规备血,只备以冷冻红细胞;第2组为择期手术,术中出血可能性大,符合自身输血标准,对患者进行储存式自体输血;第3组为择期手术,但不符合自身输血标准,采集新鲜血液;第4组为急诊手术,采用冷冻红细胞(第1、3组分别备有冷冻红细胞的情况下进行)。结果第1组20例,均未输注红细胞;第2组14例未输异体血,仅有1例输用2U冷冻红细胞;第3组1例输注2U冷冻红细胞,19例输用备用血液后未再输血;第4组3例全部输用冷冻红细胞,所有手术均顺利实施,且没有造成血液浪费及耽误临床用血。结论针对Rh(D)阴性患者不同情况术前制定合理的输血方案可以保证临床用血并可有效节约血源。

Rh(D)血型不合的肝移植临床分析

背景:血型不合器官移植可能发生严重的排斥反应、移植物抗宿主病及溶血反应。目的:回顾分析Rh(D)阴性肝癌患者接受Rh(D)阳性供肝移植的方法及疗效,并结合文献复习探讨该方法的可行性。方法:1例Rh(D)阴性肝癌患者接受Rh(D)阳性供肝移植过程中,应保证供肝的良好灌洗,尽量减少出血,缩短手术时间,移植中移植后输注适量的异型红细胞及血浆。结果与结论:肝移植后,受者肝功能恢复正常,未发生急慢性排斥反应及输血相关并发症。随访1年,受者存活良好。说明在无合适供体的情况下,只要供肝得到充分灌洗、移植中控制出血、移植后采用合理的免疫抑制方案,Rh(D)阴性肝病患者移植Rh(D)阳性供肝可达到良好效果。

不同检测方法用于Rh(D)阴性确认检测比较

目的采用盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法4种检测方法用于Rh(D)阴性确认检测的比较及应用效果分析.方法选取2012年1月至2013年12月期间云南省第一人民医院输血科Rh(D)血型鉴定中初筛结果为阴性的标本96例,同时选用4种方法学进行Rh(D)阴性确认和分型实验.结果盐水法检测发现96例为Rh(D)确认阴性结果;凝聚胺法检测发现84例为Rh(D)确认阴性结果;抗人球蛋白法检测发现82例为Rh(D)确认阴性结果;微柱凝胶法检测发现81例为Rh(D)确认阴性结果.结论盐水法检测操作简单,但特异性差.凝聚胺法快速、简便,但会漏检抗体效价较弱的Ig G抗体;抗人球蛋白法操作复杂,但灵敏度高、特异性好;微柱凝胶法对检测血清中的Ig G抗体具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点,但成本较高.在实际工作中,多种方法的联合应用更能保证结果的准确性.

贮存式自身输血在RH(D)阴性孕妇中的应用与观察

目的观察贮存式自身输血（PAT）在RH（D）阴性孕妇分娩中的应用效果。方法选取该院97例RH（D）阴性孕妇将其分为PAT 56例（PAT组）和未自身输血41例（对照组）,比较PAT组孕妇采血前后3d、回输前后以及两组分娩前后3d血常规主要指标：RBC、Hb、Hct、PLT的数量,并观察妊娠情况及母婴预后。结果 56例RH（D）阴性孕妇采血前后3d、43名RH（D）阴性孕妇回输前后的RBC、Hb、Hct、PLT比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;随访产后母婴情况良好,出生的新生儿Apgar评分在8~10分;自身血液回输时无任何输血不良反应。PAT组与对照组分娩前后3dRBC、Hb、Hct、PLT比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。但对照组平均住院周期延长且输异体血孕妇可能发生非溶血性输血不良反应。结论 PAT在RH（D）阴性孕妇生产中是安全有效的输血方式,减少了异体血的输注且母婴预后良好。

Rh(D)阳性血用于Rh(D)阴性患者术中大出血抢救成功一例

患者，女，56岁，58kg，因“间断性右腰痛1月余”入院，诊断为“右肾上腺占位”。患者一般情况良好，既往无输血史，生育史4-0—0—4。入院检查：BP116／73mmHg，HR72次／分。ECG正常；血型鉴定：O型，Rh（D）阴性；血生化和心肺肝。肾功能检查均在正常范围；

45例有生育史Rh阴性妇女抗-D抗体和RHD基因分析

目的研究45例多次妊娠Rh阴性妇女产后半年免疫状况和RHD基因背景。方法常规血清学方法检测Rh(D)抗原,抗人球蛋白试验(IAT)对Rh(D)抗原确认和IgG抗-D筛查,热吸收放散确认D放散型(DEL);先后采用商品化试剂盒、序列特异性引物PCR(sequence-specific primer-polymerase chain reaction,SSP-PCR)技术以及DNA序列分析技术,分析样本的RHD基因。结果 45例样本抗人球蛋白试验检测出IgG抗-D阳性5例占总数的11.1%,占真实Rh(D)阴性的16.1%。DEL检出14例(31.1%),抗-D抗体全部为阴性。D基因分析结果显示以DEL(1227A)等位基因为主,同时呈现多态性。结论真实Rh(D)阴性妇女多次生育存在较高的同种免疫风险易导致新生儿溶血病,必须做好围生期胎-母免疫预防保护,但DEL型妇女或可免除防护。

妊娠晚期贮存式自体输血在Rh(D)阴性孕妇中的应用

目的:观察妊娠晚期贮存式自体输血在Rh(D)阴性孕妇中的应用情况。方法:对Rh(D)阴性孕妇在预计预产期前1～3周贮存自体血液,待分娩时或分娩后回输。结果:40例妊娠晚期Rh(D)阴性孕妇采血前后3d血常规主要指标红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、细胞压积(Hct)、血小板(Plt)数量差异均无显著性(P>0.05);29例自体血液回输时无任何输血不良反应,也未输异体血,回输后血常规与回输前比较差异不具统计学意义(P>0.05);随访产(术)后母婴情况良好,新生儿结局无不良反应,Apgar评分为9～10分。结论:妊娠晚期贮存式自体输血对Rh(D)阴性孕妇的血液主要指标RBC、Hb、Hct、Plt数量不会产生明显的影响,且对母婴安全不会造成危险,认为贮存式自体输血对妊娠晚期孕妇是安全的、有效的输血方式,有利于将Rh(D)阴性血液科学、安全用于临床,是可行且有效的,值得推广。

RhD阴性献血者资料库的建立及其构成状况调查

目的便于获得丰富的Rh(D)阴性血液,满足临床的需求,以保障输血安全。方法采用Rh(D)初筛试验及Rh(D)确证试验,筛查20 3961例献血者中的Rh(D)阴性献血者;将筛出的Rh(D)阴性献血者分别建立档案,然后汇总所有Rh(D)阴性献血者的档案,以形成Rh(D)阴性献血者资料库;将资料库中的Rh(D)阴性献血者,分别按ABO血型、性别、人口来源、年龄及民族分类,以探讨资料库的构成状况。结果在203 961例献血者中,共筛出303例Rh(D)阴性献血者,筛出率为0.15%;在303例Rh(D)阴性献血者中,按ABO血型分类,A型90例、B型75例、AB型18例、O型120例,按性别分类,男性180例、女性123例,按人口来源分类,常住人口204例、流动人口99例,按年龄分类,18—30岁171例、31—42岁74例、43—55岁51例、55岁以上7例,按民族分类,汉族226例、壮族65例、其他少数民族12例。结论目前,我中心有条件获得丰富的Rh(D)阴性血液,可以满足临床的需求;只有不断地扩大Rh(D)阴性献血者资料库的建设、加强对资料库的Rh(D)阴性献血者的管理、建立冷冻血库及开展自身输血,才能做到长期满足临床对Rh(D)阴性血液的需求。

Rh(D)阴性孕妇妊娠晚期预存自体输血效果观察

目的观察贮存式自体输血在Rh(D)阴性孕妇中的效果。方法选择Rh(D)阴性孕妇42名进行贮存式自体输血,比较贮存式自体输血组孕妇采血前后及分娩前后3 d RBC、Hb、Hct、Plt数量,并观察妊娠结局及母婴预后。结果 42名妊娠晚期Rh(D)阴性孕妇采血前后及分娩前后3 d血常规主要指标RBC、Hb、Hct、Plt比较不具统计学意义(P>0.05);随访产(术)后母婴情况良好,新生儿结局无不良反应,Apgar评分为9～10分;自体血液回输时无任何输血不良反应,也未输异体血。结论妊娠晚期贮存式自体输血对Rh(D)阴性孕妇的血液主要指标RBC、Hb、Hct、Plt数量不会产生明显的影响,且母婴预后良好,认为是可行且有效的。