新疆地区Kell(K)血型及Rh(D)血型抗原及基因频率调查

目的:通过调查新疆地区Kell血型系统K抗原、Rh血型系统D抗原表型及基因频率,了解新疆地区Kell(K)血型及Rh(D)血型分布情况。方法:收集2019年1月1日-2019年12月31日在新疆地区18家医疗机构体检及就诊符合入选标准的样本12 840例,进行Kell血型系统K抗原及Rh血型系统D抗原鉴定,并收集相关资料对不同地区、性别、民族间K及D血型分布进行调查统计分析。结果:样本中K阳性占比1.39%,南疆地区占比最高为1.91%,北疆地区最低为1.03%(P<0.01);Rh(D)-占比2.75%,基因频率为16.64%,其中南疆地区Rh(D)-样本占比相对较高,为4.03%,基因频率为20.10%;东疆地区次之,北疆地区最低(P<0.01)。维吾尔族K抗原频率最高,达到2.16%,柯尔克孜族为1.54%,D/d抗原分布趋势与K抗原相似。女性中哈萨克族K+频率略高于蒙古族;维吾尔族女性K+占比最高为2.38%且高于维吾尔族男性的1.86%,哈萨克族女性d表型频率为3.15%,高于柯尔克孜族的2.89%(P<0.01)。结论:新疆南北疆及东疆地区Kell(K)血型及Rh(D)血型分布有各自的特点且存在差异,不同民族及性别人群间血型分布差异明显,今后可纳入k抗原检测,进一步完善本地区Kell血型系统分布情况调研。

基于三代测序技术的RHD、RHCE基因mRNA研究

目的建立基于Nanopore的RH基因mRNA三代测序方法,探讨D阳性和D^(el)表型中RHD、RHCE基因mRNA转录本的种类和表达水平差异。方法选取2021年3月~2022年5月成都市各医院送检至本实验室的经RhD血清学初筛及确证试验阴性的RhD阳性标本5例、D^(el)型标本5例。分离有核红细胞和白膜层,提取DNA和RNA,采用PCR-SSP对RhD阳性、D^(el)型基因分型,mRNA逆转录为cDNA后,采用1对引物同时对RHD、RHCE基因的全长mRNA扩增。分别采用Sanger测序和基于纳米孔的三代测序技术对扩增产物进行测序,并对RHD、RHCE基因mRNA转录本的不同剪接体种类和表达量进行分析。结果本研究建立的方法可同时扩增出RHD和RHCE的全长转录本,在10例标本中检测到了10种不同RHD基因mRNA转录本、9种RHCE基因mRNA转录本。D^(el)型中可检测到RHD的全长转录本(RHD-201),但表达量显著低于RhD阳性标本,D^(el)标本中转录本RHD-207(D^(el)789)表达量显著高于RhD阳性标本,转录本RHD-208(D^(el)8910+213)仅在D^(el)型个体中检出,其他RHD转录本以及所有RHCE转录本在2种个体中未发现显著差异。结论本研究成功建立了RHD、RHCE基因mRNA三代测序全长转录本异构体的分析方法,发现RHD、RHCE基因存在复杂的选择性剪接模式,为血型基因变异体mRNA选择性剪接研究提供了新方法。

RHD*845A/1227A变异型个体的分子机制

目的:研究1例罕见的RhD变异型个体的基因突变机制。方法:采用常规血清学方法对样本进行Rh分型,间接抗人球蛋白试验确认RhD抗原以及抗体筛查。D-screen试剂分析样本的RhD抗原表位。利用序列特异性引物聚合酶链反应法检测RHD基因以及RhD杂合型分析,Sanger测序方法分析RHD基因编码区序列。应用逆转录聚合酶链反应检测样本RHD mRNA,对RHD cDNA进行TA克隆和序列分析。结果:血清学检测该样本RhD抗原为弱阳性,Rh分型为CcDEe,抗体筛查结果为阴性。经D-screen试剂检测样本表现出部分D的抗原表位分布。经RHD基因编码序列分析发现,RHD基因第6外显子第845位和第9外显子第1227位碱基均显示G/A杂合。TA克隆得到3种剪接异构体。结论:该研究对象为RHD基因845G>A和1227G>A突变个体,该杂合突变导致样本红细胞RhD抗原减弱。

一例RhD--缺失型患者的血清学及分子生物学分析

目的研究RhD--缺失型患者的血型血清学及分子生物学,指导临床用血安全。方法采用患者EDTA-K 2抗凝血,进行Rh血型系统常见抗原的检测及其相关血清学检测,同时提取患者DNA,利用SBT法对其RHCE基因和RHAG基因的外显子1-10进行测序。结果患者血清学检测为O型RhD--,抗体鉴定10谱全阳性,RHCE基因测序表现为RHCE*02/RHCE*02,RHAG基因测序表现为6号外显子的808号位点G>A和861号位点G>A的突变。结论当患者Rh血清学表现型缺失,在妊娠和或输血史等相关免疫情况下,可采取自体输血或血浆置换等方式满足患者的急救用血。

陕西汉族初筛RhD阴性孕妇中D基因多态性研究

【目的】探讨陕西汉族初筛RhD阴性孕妇中D基因多态性。【方法】选择2018年1月至2020年3月在本院定期产检的54例陕西汉族初筛RhD阴性孕妇。采用微柱凝胶卡检测RhD血型,采用抗人球蛋白凝胶卡法进行间接抗球蛋白试验(IAT),采用Rh分型卡鉴定RhCE抗原分型,采用吸收放射试验检测Del血型,采用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)鉴定标本的Del血型基因型,采用D-Screen试剂的反应格局表鉴定部分DⅥ3型,针对10个RHD基因外显子的特异性引物进行PCR扩增并测序。【结果】54例初筛RhD阴性孕妇中,单克隆(IgG+IgM)抗D-抗体IAT试验检出3例阳性,经鉴定为D变异型;酸放散法检出阳性18例,除上述3例D变异型外,其余15例均为Del表型,36例D阴性标本。D变异型与Del表型均未产生抗-D,36例D阴性标本中2例产生抗-JKb合并抗-cE,7例产生抗-D(其中1例产生抗-C合并抗-D)。RhCE分型结果显示:D阴性血型以ccee为主,Del表型以Ccee为主,无ccEe与ccee。3例D变异型中,D-Screen检出2例部分DⅥ3型,剩余1例经RHD基因测序分析,结果显示为弱D15型,RHD基因存在c.845G>(p.Gly282Asp)纯合突变。PCR-SSP检出15例阳性,与酸放散法检出阳性的例数一致,15例Del表型均携带RHD*01EL.01。15例Del表型中,合子型D+/D+1例,且其基因型为RHD*01EL.01/01EL.01;合子型D+/D-14例,且其基因型均为RHD*01EL01/01N.01,占93.33%。【结论】54例陕西汉族初筛RhD阴性孕妇中D基因结构存在复杂的多态性,变异等位基因D阴性血型以ccee为主,Del表型以Ccee为主。

洛阳献血者Rh抗原和基因多态性研究

目的通过观察随机选择的献血者人群Rh表型频率，从表型推测RHCE基因频率，从而估测Rh单倍型频率。分析RH基因的遗传学特征和抗原多态性，为Rh血型在中国临床输血医学和产科学的应用提供理论依据。方法统计2005年1月～2011年12月356071例捐献全血的献血者中的RHD阴性数据，随机选择10373例RHD阳性献血者检测RhCE血清学表型。利用哈德～伯格遗传平衡定律检测吻合度，用方根法计算Rh基因频率和单倍型频率，妒检验分析不同分类的差异。结果Rh血型基因和单倍型频率为D：0．9329、d：0．0671、DCe：0．6153、DeE：0．2704，Dce：0．0341、DCE：0．0132、dCe：0．0123、dCE：0．0006、dcE：0．0024、dee：0．0518，与中国汉族人在基因平衡条件下的差异无统计学意义（x^2=13．16，P〉0．05）。RHCE基因和单倍型频率在不同RhD表达类型中的分布差异有统计学意义（P〈0．05）。结论本研究准确估计了RH等位基因频率，证实了估测的单倍型频率的可靠性，血清学检测中携带RhC和／或RhE抗原的表型与不同表达的RhD类型有关。该结果可以代表中国汉族人的Rh抗原和基因多态性特点。需要制定标准的弱D定型方法和合理的输血策略，以避免抗球蛋白试验对弱D抗原的漏检。

中国汉族Rh血型基因多态性观察

为了观察中国汉族非血缘关系随机个体和家系Rh血型的基因多态性 ,采用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)扩增技术 ,扩增Rh血型C/E基因 ,D基因外显子 ,内含子 2和 10 ,插入片段以及RhBox ,检测 16 0例Rh阳性个体 ,71例Rh阴性个体及 7个先证者为Rh阴性的家系的血样品。研究结果显示 ,带有C抗原的RhD阴性个体D基因结构具有多态性 ,D基因外显子有完整的、部分缺失和完全缺失的 3种形式 ;先证者为RhD阴性的家系中 ,大部分成员均出现插入片段和RhBox ,且在遗传上符合孟德尔遗传定律 ,插入片段或RhBox并未影响D基因的表达 ;全部RhD阴性和阳性个体中没有发现“正常的”RhD外显子 4。结论 :中国人带C抗原的RhD阴性者的基因结构具有多态性 ,具有完全缺失、部分缺失和不缺失 3种情况 ,并可能存在特殊的D(nf)Ce单体型 ;本组样本不能确定插入片段和RhBox与D基因表达有关 ,插入片段和RhBox的生物学功能尚需进一步研究 ;中国汉族的Rh血型基因序列不同于白种人 ,应建立本民族的Rh基因文库。

长期输血的重型β地中海贫血患儿RH因子与临床输血有效性研究

目的:探讨长期输血的重型β地中海贫血(地中海贫血)患儿不规则抗体的产生情况及其与患儿RH因子基因型和地中海贫血基因突变位点之间的关联性,为地中海贫血患儿临床安全有效输血治疗提供新的实验依据。方法:收集246例在本院定期输血的重型β地中海贫血患儿外周血,抽提基因组DNA,运用PCR-SSP法检测患儿Rh因子(C/c、E/e)的基因型,用血型血清学方法筛选不规则抗体并鉴定它们的抗体类型,PCR体外扩增结合DNA芯片反向点杂交技术分析患儿的地中海贫血基因型。结果:246例患儿RH因子基因型主要为Ce/Ce(143/246,58.1%)、CE/ce(59/246,24%)、c E/c E(14/246,5.7%)、Ce/ce(12/246,4.9%);不规则抗体的阳性率为7.7%(19/246),其中抗-E 7例(7/19),抗-c 5例(5/19),抗-C 2例(2/19),抗-E/抗-c 2例(2/19),抗-e 1例(1/19),抗-D抗体2例(2/19);19例不规则抗体阳性患儿中,RH因子的基因分型为:Ce/Ce 11例(11/19),CE/ce 2例(2/19),c E/c E 2例(2/19),Ce/ce 2例(2/19),c E/ce 2例(2/19);19例不规则抗体阳性患儿地中海贫血基因突变位点分别为:CD41-42M 13例(13/19),CD71-72M 2例(2/19),IVS-II654M 3例(3/19),-28M 1例(1/19)。结论:长期输血治疗的地中海贫血患儿不规则抗体的产生与RH因子的基因型、患儿的地中海贫血基因突变位点可能具有关联性,本研究对于有效预防地中海贫血患儿红细胞同种免疫反应,提高其临床输血的有效性与安全性具有一定的意义。

长期输血重型β地中海贫血患儿不规则抗体产生及其与RH因子和贫血基因突变位点的相关性分析

目的:分析重型β地中海贫血患儿长期定期输血治疗后不规则抗体的出现情况及其与RH因子和贫血基因突变位点的相关性。方法:选取在本院长期输血的120例重型β地中海贫血患儿并对其基因组DNA进行抽提,应用PCR-SSP法对其RH因子的基因型进行测定,采取血型血清学法对患儿不规则抗体及其类型进行筛查与鉴定,采用DNA芯片反向点杂交技术与PCR体外扩增的方法对其基因分型进行分析。结果:本组120例患儿的RH因子基因型以Ce/Ce(59.17%)与CE/ce(25.00%)为主;其中产生不规则抗体阳性的患儿10例,其阳性率为8.33%;在10例不规则抗体阳性患儿中,RH因子基因型有Ce/Ce 6例,cE/cE、CE/ce、cE/ce与Ce/ce均各1例;在10例不规则抗体阳性患儿中,贫血基因突变位点有:IVs-11654M 2例,cD4142M 6例,28M 1例,CD71-72M 1例。结论:重型β地中海贫血患儿长期定期输血治疗后出现不规则抗体,这可能与RH因子和贫血基因突变位点存在有一定的相关性。

Rh阴性血型者Del表型和RhD基因的检测

目的 初步探讨中国汉族人群Rh阴性血型者Del表型与RhD基因之间的关系。方法 对 6 7例血清学方法检测为Rh阴性的供血者样本进行吸收放散试验以检测Del型 ,并扩增RhD基因的外显子 3,4 ,5 ,7,10 ,检测RhD基因存在情况。结果 吸收放散试验表明 6 7例样本中Del型 2 2例 ,占 32 .8% ,非Del型 4 5例 ,占6 7.2 %。在所有表型为ccee,ccEe的 38例RhD(- )个体中 ,Del试验均为阴性 ,RhD基因完全缺失 ;而在表型为Ccee或CcEe的 2 9例RhD(- )个体中 ,2 2例Del试验阳性 ,其中 2 0例携带完整的RhD基因 ,2例有部分RhD基因 ;7例Del试验阴性 ,其中 6例携带部分RhD基因 ,1例D基因完全缺失。结论 中国汉族人群中Rh阴性血型者RhD基因的存在及多态性多由Del引起。

Rh阴性个体输入D^(el)红细胞产生抗-D免疫的研究

目的探讨Rh阴性个体输血中Del型红细胞的D抗原免疫原性。方法对临床输血的Rh阴性患者进行回顾性跟踪检测,采用PCR-SSP法检测标本RHD基因,间接抗球蛋白法检测抗-D效价,流式细胞术对比输血前后抗体强度的变化。结果 2名输注Del型血液的Rh阴性患者,抗-D效价升高,流式细胞术检测结果显示抗-D强度明显升高,说明Del表型红细胞具有一定的免疫原性。结论为了保障临床输血安全,常规血清学检测Rh阴性的供血者,应进一步排除弱D及Del型。

Rh血型系统研究进展

Rh血型系统是最具多态性的红细胞血型系统,在临床输血、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血中具有重要意义。本文就RH基因结构、RH等位基因、Rh蛋白功能及Rh血型基因分型等近年来的研究进展简要综述。

宁夏地区回族无偿献血者ABO和Rh血型基因频率分布的研究

目的了解宁夏地区回族无偿献血人群ABO及Rh血型分布规律及基因频率。方法对宁夏地区8 384例回族初次无偿献血人群进行血型鉴定。采用血型群体遗传学研究方法,进行ABO、Rh血型基因频率研究。结果宁夏回族A型、B型、O型及AB型构成比分别为28.32%、28.73%、33.28%及9.67%;期望值构成比为28.81%、29.22%、32.86%及9.10%,基因频率p=0.212 0,q=0.214 7,r=0.573 3,观察值与期望值差异无统计学意义(P>0.05),分布符合Hardy-Weinberg平衡。ABO血型分布频率由高到低分别为O型>B型>A型>AB型。8 384例回族献血者共检出RhD阴性82例(0.98%),其中ccdee为68.29%,Ccdee为21.95%,ccdEe为4.87%,CcdEe为2.44%,CCdee为2.44%,其期望值构成比依次为68.29%、24.58%、3.04%、0.55%及2.21%,基因频率dce为0.826 394,dCe为0.148 750,dcE为0.018 388,dCE为0.0000,观察值与期望值差异无统计学意义(P>0.05),分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论宁夏地区回族无偿献血人群ABO及Rh血型分布规律及基因频率符合Hardy-Weinberg平衡,该研究对该地区采供血计划的制订、临床科学安全用血及新生儿溶血病的防治提供了依据。

血清学Rh(D)阴性个体分子机制的研究

目的探讨江苏地区无偿献血者中血清学Rh(D)阴性表型汉族人群的分子背景。方法 37份常规血清学试验检测出的Rh(D)阴性江苏汉族人,采用PCR-SSP检测RHCE基因和RH(D)基因;并对存在RH(D)基因的个体进行10个外显子及邻近内含子的测序。结果 37例血清学Rh(D)阴性献血者中,分子生物学方法确认26例无RH(D)基因。存在RH(D)基因的11例中,3例为RH(D)和RHCE基因发生互换,6例为RH D(K409k)(第9外显子1 227G>A),1例为弱D15型(第6外显子845G>A),1例为RH(D)*711delC(第5外显子711位碱基缺失)。结论一定比例的血清学阴性Rh(D)人群并非真正的Rh(D)阴性,即表达弱D抗原。提示对血清学Rh(D)阴性个体进行分子生物学分析,有利于安全输血。

Rh(D)变异体的分子生物学研究

目的应用分子生物学方法鉴定3例患者Rh(D)变异体的基因型。方法 Rh血型血清学试验采用标准血清学实验方法;采用PCR-SSP法扩增RHD基因的启动子、外显子、内含子及RHCE基因;采用PCR-RFLP法鉴定RHD基因的杂合性。结果这3例患者血清学检测结果均为Rh(D)变异体。PCR-SSP结果表明3例均具有融合等位基因RHD*D-CE(3-6)-D,为RHD*DVI.3;RHD基因合子型为RHD+/RHD-杂合型;RHCE基因检测结果显示为RHCE*Ccee。3例患者RH基因型为CDVI IIIe/cde。结论基因分型对于Rh(D)变异体的鉴定是一种有效方法。

新疆汉族与维吾尔族Rh阴性D基因多态性的初步研究及比较

目的探讨比较新疆汉族与维吾尔族Rh阴性D基因多态性的特征及分布特点。方法选取2013年10月至2015年10月222例维吾尔族Rh阴性血液供者(来院患者和献血员)和90例汉族Rh阴性血液供者(来院患者和献血员)进行D基因多态性分析,分别作为汉族组和维吾尔族组,Rh血型采用血清学盐水介质法测定,RhD阴性个体检测Rh血型血清学表型,采用PCR-SSP方法分析Rh阴性D基因分型。对两组研究对象的血清学表型、D基因型分布频率。结果两组研究对象的Rh血型血清学表型(CCEE和CCee)的分布频率之间没有显著差异(P>0.05);汉族组的Rh血型血清学表型的CcEe、Ccee、ccEE的分布频率明显高于维吾尔族组(P<0.05);汉族组的Rh血型血清学表型的ccEe、ccee的分布频率明显高于维吾尔族组(P<0.05);汉族组的Rh阴性D基因分型中,DEL、弱D15、RhD-CE(2-9)-D、DVI Ⅲ、DVa(hus)分布频率明显高于维吾尔族组(P<0.05);维吾尔族组的d/d分布频率明显高于汉族组(P<0.05)。结论汉族和维吾尔族Rh血型血清学表型和Rh阴性D基因分型存在一定的差异,可以区分汉族和维吾尔族之间Rh血型分布。

福建省RhD阴性个体RHD基因多态性

为了探讨RhD阴性福建个体的RHD基因结构，设计14对序列特异性引物，应用PCR—SSP技术检测104名福建省RhD阴性献血者的RH基因型，并对部分样本进行吸收放散试验，同时对2例携带RHD基因RhD阴性样本进行DNA序列测定。结果显示，61．54％阴性福建个体完全缺失RHD基因（RHD^-／RHD^-），25．97％RhD携带RHD1227A等位基因（其中62．96％为RHD^＋／RHD^-杂合子，37．04％为RHD^＋／RHD^＋纯合子），8．65％携带RHD-CE（2—9）-D等位基因，1．92％携带RHD710delC等位基因；多数RHD基因缺失存在于dce单倍体中，发现6例RHD基因缺失存在于dCe单倍体（RH基因型为dce／dCe）中，2例存在于dcE单倍体（RH基因型为dce／dcE）中；同时检测8个RHD基因外显予以及RHD1227A等位基因，以预测RhD表型的准确性明显高于单独检测某个RHD基因外显子的准确性（Χ^2=24．43，P〈0.005）。结论：RhD阴性福建个体RHD基因具有多态性；在中国用RHD基因分型完全替代血清学检测RhD表型的条件尚未成熟。

河南省部分RhD(一)献血者RhD基因多态性分析

目的 :探讨RhD(- )本省无关供血者中RhD基因的构成情况。方法 :采用PCR SSP法对 80名常规血清学RhD(- )本省供血者RhD基因外显子 2、3、4、5、6、7、9、10和内含子 4及RhCE基因内含子 4的特异性片段进行扩增。结果 :80名RhD(- )供血者中RhD基因完全缺失 5 3例 ,占 6 6 .2 % ;RhD基因部分缺失 7例 ,占 8.7% ,其中大部分为 3～ 9外显子缺失 ;RhD基因完整存在 2 0例 ,占 2 5 %。结论 :本省常规血清学RhD(- )无关供血者RhD基因存在高度多态性 ,提示本省人群RhD(- )特征有多种遗传机制 ,目前在白种人群中使用的DNA鉴定Rh血型的方法不适合我国人群 。

Rh血型抗原抗体检测对保障输血安全的意义

目的探讨Rh血型系统抗原、抗体检测在安全输血中的意义。方法对2012年8月至2013年5月在该院住院的2 700例输血患者进行Rh系统抗原表型检验和抗体筛查。结果 Rh血型抗原表型所占比例由高到低依次为CCDee、CcDEe、CcDee、ccDEE、CCDEe,5种抗原基因频率由高到低依次为D、e、C、c、E。结论对于接收输血者及供血者,除了要做必需的常规检查外还应进行其他4种Rh血型抗原表型的检查及相应抗体的鉴定,从而避免因输血而产生免疫性抗体,给患者再次输血带来困难。