大鼠心脏细胞条件培养基对小鼠ES细胞特性的维持

以C1 9- 2和MESPU - 1 3为供试细胞 ,用克隆测试、传代培养等方法对 1 7种细胞的条件培养基进行了筛选 ,结果表明 ,大鼠心脏细胞的条件培养基 (RH -CM)具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型、促进ES细胞贴壁生长的作用。经RH -CM培养 1 0代和 2 0代的小鼠ES细胞在体内外分化能力上仍保留了原ES细胞的多方向分化潜能和特征 ;RH -CM也可作为小鼠ES细胞培养基的添加物 ,用含 70 %RH -CM的ES细胞培养基和小鼠胚胎原代成纤维细胞饲养层 (PMEF)培养ES细胞 ,可长期有效地维持其未分化状态和二倍体核型。RT

BALB/c小鼠胚胎干细胞系建立的方法学探讨

以小鼠胚胎成纤维细胞 (ME)为饲养层 ,以大鼠心脏细胞条件培养基 (RH CM)为ES细胞培养基 ,全面、详尽地对BALB c小鼠ES细胞的建系和培养方法进行了探讨 ,成功地建立了一套建立和培养BALB c小鼠ES细胞系的新方法。这一培养条件不但有效地维持了ES细胞的未分化状态和正常二倍体核型 ,而且维持了其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征 ;实验设计了两种离散方法和两种浓度的消化液 ,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落。两种离散方法即“一次离散法” ,和“多次离散法” ,两种浓度的消化液即 0 .2 5 %Trypsin 0 .0 4 %EDTA和0 .0 5 %Trypsin 0 .0 0 8%EDTA ;同时对ICM离散时机、RH CM在BALB c小鼠ES细胞建系和培养中作用进行了探讨。结果表明 :在低浓度消化液作用下 ,采用“多次离散法”离散增殖 4天的ICM和ES集落的方法建立BALB c小鼠的ES细胞系是理想的 ;从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定以及体内外分化能力表明 ,所建立的 9个BALB c小鼠ES细胞系符合小鼠胚胎干细胞的一系列特征。