几丁质/rhBMP2/胶原复合物修复骨缺损的实验研究

目的 :研究几丁质作为骨缺损充填材料和rhBMP2载体的可行性。方法 :制备多孔几丁质及几丁质/rhBMP2 /胶原复合物 ,进行了几丁质、几丁质 /rhBMP2 /胶原复合物修复兔颅骨缺损的实验研究 ,通过X线片、组织学检查评价其骨缺损修复能力。结果 :实验结果表明几丁质具有一定的骨引导活性 ,与rhBMP2复合后 ,成为既具有骨引导活性、又具有骨诱导活性的复合植骨材料 ,具有较强的骨缺损修复能力。结论 :几丁质适于作为骨替代材料及BMP的载体 。

rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨rhBMP2和rhTGF - β1联合应用对人牙髓细胞ALPase活性的影响。 方法 :采用酶动力学的方法 ,比较不同浓度rhBMP2和rhTGF - β1单独或联合应用对人牙髓细胞的ALPase活性的影响。 结果 :rhBMP2对人牙髓细胞的ALPase活性呈浓度依赖性增强 ,rhTGF - β1对人牙髓细胞ALPase活性的影响与其本身浓度有关。当rhTGF - β1浓度为 1μg/L与rhBMP2联合应用时 ,ALPase活性比rhBMP2单独应用明显增高。结论 :rhBMP2、rhTGF - β1单独及联合应用于人牙髓细胞时 ,对人牙髓细胞的ALPase活性作用不同 。

HA-rhBMP2-FS复合人工骨即刻种植临床疗效观察

目的 :探讨HA rhBMP2 FS复合骨在即刻种植技术中的应用及修复后的临床疗效。方法 :48例患者在拔牙的同时植入HBIC二段式柱状螺纹种植体 5 4枚 ,在种植体周围的骨缺损区同期植入HA rhBMP2 FS复合人工骨 ,3～ 6个月后摄X线片 ,根据种植界面的骨结合情况进行二次手术 ,安放基桩 ,1周后进行义齿修复并随访 3～ 5a。结果 :按卫生部口腔种植中心的成功标准 ,5 4枚中 47枚种植体成功 (87 0 4% ) ,失败 7枚 (12 96 % )。结论 :在即刻种植中应用HA rhBMP2 FS复合骨达到了满意的临床效果 。

rhBMP2作用下人牙周膜成纤维细胞中OCIF、ODF的表达研究

目的:本研究通过反转录聚合酶链反应来测定不同浓度的重组人骨形成蛋白2(rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞中OCIF、ODFmRNA在不同作用时间点表达的影响,了解rhBMP2对骨改建相关基因的调控方式。方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,取生长良好的第六代细胞,分别用25ng/ml、50 ng/ml及100 ng/ml的rhBMP2作用于细胞,于作用1、3、5、7天后收集细胞。反转录聚合酶链反应检测各组细胞四个时间作用点OCIF、ODF mRNA含量,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳后,采用Image Pro Plus5.0图像分析软件对电泳胶带亮度进行分析。结果:在rhBMP2作用初期,由于OCIF mRNA的表达快速上升,ODF mRNA的表达缓慢增高,二者的表达差异远大于正常生理水平;随作用时间的延长,由于OCIF mRNA的表达下降,ODF mRNA的表达缓慢增高,二者的表达差异逐渐缩小,在作用末期低于正常生理水平。结论:基于OCIF与ODF二者表达的相对变化,HPDLfs在rhBMP2的作用下可能对破骨细胞的形成在初期表现为较强的抑制,随着作用时间的延长,HPDLfs对破骨细胞的抑制作用逐渐转变成为促进其活化的作用。

rhBMP2作用下人牙周膜成纤维细胞中cbfα1的表达研究

目的:本实验通过反转录聚合酶链反应,测定不同浓度的重组人骨形成蛋白2(rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞中cbfα1mRNA在不同作用时间点表达,了解rhBMP2对骨改建过程的调控。方法:原代培养人牙周膜成纤维细胞,取生长良好的第6代细胞,分别用25ng/ml、50ng/ml及100ng/ml的rhBMP2作用于细胞,于作用1、3、5、7天后收集细胞。反转录聚合酶链反应检测各组细胞4个时间作用点cbfα1 mRNA含量,PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳后,采用Image Pro Plus5.0图像分析软件对电泳胶带亮度进行分析。结果:不同浓度rhBMP2对cbfα1mRNA的表达均表现为初期降低,而后明显增高,至峰值后回落。不同浓度对cbfα1 mRNA表达上调的峰值没有明显差异。100ng/ml和50ng/ml的rhBMP2浓度组能够较快地上调cbfα1mRNA表达至峰值,然后100ng/ml组表现为缓慢下降,50ng/ml组迅速回落;25ng/ml组较慢上调cbfα1mRNA的表达至峰值后,迅速回落。结论:①根据实验各组中cbfα1的表达变化,提示笔者BMP2可以上调HPDLfs中cbfα1的转录水平,并且对cbfα1的表达调控主要为启动作用,cbfα1的表达增高幅度似乎与rhBMP2浓度并不相关。②高浓度组对cbfα1的上调作用迅速而持久,低浓度组的作用则相对迟缓而短暂。提示笔者BMP2可能通过上调cbfα1的表达而促进HPDLfs向成骨细胞转化。

完全脱蛋白骨复合rhBMP2构建人工骨及其体内异位成骨

目的: 探讨异种完全脱蛋白骨复合基因重组骨形态发生蛋白(rhBMP2) 在体外构建人工骨的可行性,并对其体内异位成骨进行评估。方法: 体外将兔骨髓基质细胞进行成骨诱导, 然后接种复合rhBMP2的小牛完全脱蛋白骨, 构建组织工程骨, 植入自体大腿肌袋内, 术后4、8周处死动物分别进行常规组织学检查、碱性磷酸酶活性测定、折弯力学测试, 观测这种组织工程骨在体内的异位成骨作用。结果: 这种方法构建和组织工程骨在体内异位成骨效应显著且抗折能力较强。结论: 异种完全脱蛋白骨复合rhBMP2可作为骨组织工程支架材料, 这种组织工程骨在体内的成骨能力随植入时间的延长而增加。

rhBMP2对牙髓成纤维细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的了解重组人骨形成蛋白(rhBMP2)对牙髓成纤维细胞增殖活性及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用MMT比色法检测不同浓度rhBMP2作用下,牙髓成纤维细胞增殖活性的变化;用酶动力学方法检测不同浓度rhBMP2作用下ALP活性的变化。结果低浓度的rhBMP2可提高体外培养人牙髓细胞的增殖活性,浓度为200ng/mL时,增殖活性达到最大值,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。并可促进人牙髓细胞ALP活性,呈浓度依赖性,与对照组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhBMP2能够促进牙髓细胞增殖和ALP活性,是牙髓细胞增殖和分化的重要因子之一。

游离骨膜与复合rhBMP2的异种骨联合移植修复骨缺损的实验研究

目的 探讨复合基因重组人ＢＭＰ２（ｒｈＢＭＰ２）的异种骨与游离骨膜（ＦＰ） 联合移植修复节段性骨缺损的效果。 方法 将ｒｈＢＭＰ２ 与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合，制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ；选用新西兰大耳白兔２８ 只，制成桡骨干１５ ｍｍ 缺损动物模型，分别行ＦＰ和ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ复合移植（ｎ＝６） 、ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植（ｎ＝６） 和单纯ＢＣＢ移植（ｎ＝２）；术后４、８、１２ 、１６ 周取材，通过Ｘ线、生物力学、骨密度、组织学等手段进行对比研究。 结果 单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植，可在１６ 周使节段性骨缺损基本修复，其机制同过程与重组合异种骨相似；ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与ＦＰ联合移植，在骨缺损修复早期（ ≤１２ 周） ，其成骨速度及成骨质与量均优于单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 移植，约在１２ 周使骨缺损基本修复。 结论 ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植和ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与ＦＰ 联合移植两种方法均可有效地修复节段性骨缺损，但以ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与ＦＰ联合移植较为理想，该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用。

rhBMP2与纤维蛋白粘结剂复合物诱导修复性牙本质形成的动物实验

目的 观察基因重组人骨形成蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphorgeneticprotein 2 ,rhBMP2 )与纤维蛋白粘结剂 (fibrinsealant,FS)复合物对狗修复性牙本质形成的影响。方法 采用直接盖髓术 ,常规制备牙 颌骨联合切片 ,光学显微镜下观察rhBMP2及rhBMP2 /FS复合物诱导修复性牙本质形成的情况。结果 单纯rhBMP2盖髓 ,牙髓出血多 ,炎性反应重 ,牙本质桥形成多但较晚 ;rhBMP2 /FS复合物盖髓 ,牙髓无出血 ,炎性反应轻 ,牙本质桥形成早于rhBMP2组 ,且管样牙本质形成多于rhBMP2组。结论 rhBMP2有较强的牙本质诱导活性 ;FS具有良好的保护牙髓组织创面的能力并对rhBMP2有协同作用 。

基因重组人骨形成蛋白-2对培养骨髓细胞的生物学效应

目的：骨髓是机体重要的造血器官，其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞，骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用．为提高骨形成蛋白（BMP）修复骨缺损的能力，方法：本实验观察了基因重组人骨形成蛋白-2（re－combinanthumanBoneMorphogeneticProtein－2，rhBMP2）对培养骨髓细胞生物学活性的影响．结果：低浓度的rhBMP2（＜0．16mg／L）对培养骨髓细胞的碱性磷酸酶活性、蛋白质含量均有明显的促进作用，且呈剂量依赖性，高浓度的rhBMP2（＞0．16mg／L）对培养骨髓细胞的增殖也有一定促进作用结论：本研究的结果进一步证实，骨髓细胞也是BMP重要的靶细胞，BMP不仅促进骨髓细胞向成骨细胞的表型转化，而且可以促进骨髓细胞的增殖，因此在使用复合BMP的植骨材料进行骨缺损修复时，如能辅以骨髓细胞植入，将会大大提高骨缺损的修复效果．

胰岛素样生长因子-Ⅰ和骨形态发生蛋白-2对人牙周膜细胞增殖的作用

目的：重组人胰岛素样生长因子－Ｉ（ｒｈＩＧＦ－Ｉ）、重组人骨形态发生蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）分别或联合应用对人牙周膜（ＰＤＬ）细胞增殖的影响。方法：采用组织块法体外培养人ＰＤＬ细胞，ＭＴＴ法测定ＰＤＬ细胞在不同生长因子刺激下的增殖情况。结果：ｒｈＩＧＦ－Ｉ、ｒｈＢＭＰ－２都可促进人ＰＤＬ细胞的增殖，这种促增殖作用呈一定的浓度依赖性，ｒｈＩＧＦ－Ｉ与ｒｈＢＭＰ－２联合应用对人ＰＤＬ细胞的增殖有协同作用，且与单独应用相比相差显著。结论：ｒｈＩＧＦ－Ｉ、ｒｈＢＭＰ－２可望作为牙周再生的生物活性介质，ｒｈＩＧＦ－Ｉ与ｒｈＢＭＰ－２联合应用对ＰＤＬ细胞的促增殖作用更强。

异体脱钙骨基质骨粒骨水泥骨形态发生蛋白复合材料的成骨诱导活性

探讨异体脱钙骨基质（DBM）骨粒、骨水泥（BC）及重组人骨形态发生蛋白一2（rhBMP－2）复合骨缺损修复材料成骨诱导活性．方法：小鼠股部肌袋内植入复合材料，不同时间分别取材HE染色观察复合骨缺损修复材料的异位诱导成骨活性；检测不同复合质量比的复合材料的聚合温度．结果：第7日时材料外周即形成间充质组织包膜，并沿材料不规则裂隙向植入材料内部长人间充质组织．第14日间充质组织继续大量长入且逐渐深火材料内部，部分增生的间充质组织细胞向软骨细胞分化．第ZI田间充质组织细胞继续分化，软骨样细胞及软骨样组织生成量增多，并可见DBM骨粒部分被新生软骨样组织包裹、爬行吸收替代现象；软骨样组织逐渐成熟，间有新骨生成．第28日始，较多量的新骨生成，并可见类似哈佛氏系统样组织．复合材料中骨水泥聚合热不影响材料中诱导成骨成分的活性．结论：复合材料具有一定的诱导成骨活性；复合材料中的脱钙骨基质骨粒可降解．即DBM骨粒诱导成骨因子及复合其中的rhBMP－2在诱导新骨不断充填材料内部不规则裂隙后，仍可在DBM骨粒被爬行吸收的空间中继续有新生骨组织生成．

补骨合剂调节大鼠骨髓间充质细胞分化机制的研究

目的:应用体外培养骨髓间充质细胞,在细胞和分子水平观察补骨合剂对细胞分化的影响,探讨补骨合剂治疗骨质疏松症的机制。方法:分离SD大鼠骨髓间充质细胞,通过形态学、碱性磷酸酶、细胞内骨钙素、转化生长因子β1基因表达等指标,对重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP2)诱导下的骨髓间充质细胞向成骨细胞分化的程度进行探讨。结果:一定浓度的补骨合剂可促进分化中的骨髓间充质细胞分泌碱性磷酸酶和骨钙素,增强rhBMP2的活性,促进分化中的骨髓间充质细胞表达转化生长因子β1,补骨合剂的这种促进骨髓间充质细胞分化作用与密钙息基本相同。结论:补骨合剂不仅可以增强rhBMP2的活性,促进分化中的骨髓间充质细胞表达转化生长因子β,大量分泌Ⅰ型胶原,以利于钙盐沉积;还可以促进rhBMP2诱导的骨髓间充质细胞分泌碱性磷酸酶和骨钙素,促进骨髓间充质细胞向成骨细胞表型分化,从而促进钙、磷在骨表面沉积。

重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 :研究重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP2 )对人牙周膜成纤维细胞 (HPDLFs)的生物学作用。方法 :原代培养HPDLFs,并观察rhBMP2对HPDLFs增殖、碱性磷酸酶 (ALP)活性、骨钙素 (OC)合成及矿化结节形成的作用。结果 :0 2 5～ 2mg mlrhBMP2对HPDLFs的增殖无明显作用 ,0 5～ 2mg mlrhBMP2显著提高HPDLFs的ALP活性 ,刺激OC合成和矿化结节形成。结论 :rhBMP2对HPDLFs的作用具有剂量依赖性。

三种刺激因素对髁突软骨细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 、rhBMP2 及IL - 1对髁突软骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。方法 :消化法培养 2周新西兰白兔的髁突软骨细胞 ,用酶动力学方法检测 1,2 5 (OH) 2 D3 、rhBMP2 、IL - 1对该细胞中ALP活性的影响。结果 :对照组正常髁突软骨细胞随体外培养时间的延长 ,ALP活性持续增加。 1,2 5(OH) 2 D3 、rhBMP2 作用组细胞ALP活性持续上升 ;而IL - 1作用下细胞ALP活性在经历作用 2d内显著上升后开始持续下降 ,ALP水平明显低于对照组。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 和rhBMP2 均可刺激髁突软骨细胞中ALP活性上升 ,但二者的变化特征并不完全相同 ;而IL -

基因重组人骨形成蛋白-2与骨髓复合移植成骨的观察

目的:观察基因重组人骨形成蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rh-BMP2)与新鲜骨髓复合移植后的成骨能力。方法:从兔股骨抽取骨髓,实验分为3组,第1组在兔股部肌袋中植入自体新鲜骨髓0.3 mL,第2组植入rhBMP2 1 mg,第3组植入骨髓0.3 mL及rhBMP2 1 mg。术后3周取材,定量观察新骨的形成量,并通过组织学观察新骨的形成情况。同时检测新生骨组织的碱性磷酸酶活性、抗压强度等成骨质量。结果:不同材料植入3周后局部均有新骨形成,而骨髓与rhBMP2复合后植入,新骨形成量明显增加,且两者之间有协同作用。组织学观察结果表明:骨髓复合rhBMP2后植入组,新骨更为成熟,碱性磷酸酶活性更高,新生组织的抗压强度更大。结论:rhBMP2和自体新鲜骨髓复合移植后,二者具有协同的成骨作用。

rhBMP_2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应

目的:通过观察rhBMP2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应,探讨rhBMP2与绝经后骨质疏松的关系。方法:对双侧卵巢切除和单纯行开腹术大鼠双侧股部肌袋植入1.5mg和3mgrhBMP2,于植入后1周、2周和3周取材,行组织学检查,成骨量分析,碱性磷酸酶和钙含量测定。结果:组织学检查发现rhBMP2剂量越大,成骨多,成骨早。实验组较对照组诱导成骨活性增强,表现为成骨量,碱性磷酸酶和钙含量较对照组明显增多(P<0.05)。结论:在卵巢切除大鼠早期rhBMP2表现较高诱导成骨活性,可能与机体代偿有关。

珊瑚转化多孔羟基磷灰石复合rhBMP-2人工骨的动物实验研究

目的：寻找新的骨代用材料。方法：采用珊瑚转化多孔羟基磷石（ＣＨＡ）作为移植物支架，用Ｉ型胶原作为ｒｈＢＭＰ－２的缓释载体及赋形剂，将三者复合制成新型人工骨，进行了大鼠标准颅骨缺损骨移植实验。结果：ＣＨＡ／胶原具有良好的生物相容性和骨引导作用。ｒｈＢＭＰ－２／ＣＨＡ／胶原具有骨引导和骨诱导双重特性，其成骨效应明显优于单纯ＣＨＡ／胶原植入。结论：该复合人工骨有可能成为临床修复骨缺损的有效材料。

新型植骨材料-复合rhBMP_2的异种骨的实验研究

目的探讨复合ｒｈＢＭＰ２的异种骨（ｅｈＢＭＰ２／ＢＣＢ）移植修复节段性骨缺损的效果。方法在重组合异种骨（ＲＢＸ）的基础上，以基因重组人ＢＭＰ２（ｒｈＢＭＰ２）与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合，制成一种新型植骨材料复合ｒｈＢＭＰ２的异种骨（ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ），并采用兔桡骨干１．５ｃｍ缺损动物模型，通过Ｘ线、骨密度、生物力学、组织学等检测手段，对ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植治疗节段性骨缺损效果进行研究。结果单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植可在１６周使骨缺损基本修复，其机制和过程与重组合异种骨相似。结论ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ是一种新型理想的修复节段性骨缺损的移植材料。

重组人骨形态发生蛋白-2抗体的制备及纯化

骨形态发生蛋白-2是骨科研究领域的重要生物蛋白。用重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP2)与BSA连接成复合物作为免疫原,免疫家兔制备出多克隆抗血清。分别用免疫沉淀法和Sepharose4B-BSA反向免疫亲和吸附法去除抗血清中载体BSA抗体。用盐析法和蛋白层析法纯化出抗rhBMP2抗体。研究发现,家兔产生高效价抗体的最佳时间为14-16周,从rhBMP2抗体的特异性、相对纯度及回收率综合分析,免疫沉淀法去除BSA抗体优于反相亲和吸附法。