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GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位
1
作者
李小雷
伍志强
+2 位作者
马晓星
赵亚力
韩为东
《生物技术通讯》
CAS
2011年第5期623-626,共4页
目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/Xh...
目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用。结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用。结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位。
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关键词
NF-κB/p65亚基
LRP16
功能表位
相互作用
GST-pulldown
rhd结构域
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题名
GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位
1
作者
李小雷
伍志强
马晓星
赵亚力
韩为东
机构
解放军总医院基础医学研究所分子生物室
解放军总医院妇产科
出处
《生物技术通讯》
CAS
2011年第5期623-626,共4页
基金
国家自然科学基金(81071617
81001184)
文摘
目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用。结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用。结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位。
关键词
NF-κB/p65亚基
LRP16
功能表位
相互作用
GST-pulldown
rhd结构域
Keywords
p65 subunit of NF-κB
LRP16
function epi-position
interaction
GST-pulldown
rhd
region
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q52 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位
李小雷
伍志强
马晓星
赵亚力
韩为东
《生物技术通讯》
CAS
2011
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