利用动态等位基因特异性杂交技术进行单核苷酸多态高通量分型

动态等位基因特异性杂交 (dynamicallele specifichybridization ,DASH)是新发展起来的一种单核苷酸多态(singlenucleotidepolymorphisms,SNP)等位基因分型技术 ,具有快速、经济、准确、高通量、重复性好等优点 .利用DASH技术 ,对 96份正常人外周血DNA样品成功地进行了两个SNP位点的基因分型 ,并摸索实验条件 。

鲇、大口鲇及其杂交鲇(鲇♀×大口鲇♂)血液生理生化指标比较及转铁蛋白等位基因分析

分别测定了鲇(Silurus asotus Linnaeus)、大口鲇(S.meridionalis Chen)以及杂交鲇(鲇♀×大口鲇♂)的红细胞、白细胞、血小板、红细胞平均血红蛋白浓度、每升红细胞平均血红蛋白浓度以及血红蛋白等6个血细胞指标和血清铁、总铁结合力、未饱和铁结合力以及铁饱和度等4个血清铁指标,结果表明杂交鲇在呼吸功能上具有较强的优势;鲇、大口鲇以及杂交鲇血清转铁蛋白的PAGE分析表明:杂交鲇Tf表现型种类多、遗传均一性较好;杂交鲇血清Tf等位基因a、b和c分别来自大口鲇血清Tf等位基因a、鲇血清Tf等位基因a以及鲇和大口鲇的血清Tf共有的等位基因b。由此推断,杂交鲇比其亲本的耐低氧能力更强。

多等位基因PCR-SSO反相杂交法及其在HLA-DR_4亚型结构分析中的应用

本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用PCR法对该基因位点进行扩增,扩增的同时加入α-^(32)P-dCTP以直接参入放射标记,然后将PCR产物与膜固定探针杂交,以四甲基氯化铵根据探针长度统一洗涤温度。该方法克服了以往对同一份样品进行多个等位基因检测时需要进行多次探针标记和杂交的缺点。我们用该方法对中国人群MHC-Ⅱ类DR4多等位基因进行了研究。

在水稻远缘杂交中控制F_1不育性的复等位基因

过去,我们曾经报道,属于所谓爪哇型的印度尼西亚水稻品种,按其与一组籼型和粳型测验种杂交F1表现的不育关系讲,可以分成若干种不同类型。首先,通过本研究看到这些不同类型间的F1植株除少数不育外,大多数是可育的。其次。为探索penuh BaruⅡ品种和籼型或粳型测验种间F1杂种不育的遗传基础,我们做了涉及penuh BaruⅡ,广亲和品种KetanNangka和IR30或IR50（籼型测验种）的三交试验。三交后代表明,小穗育性与某些遗传标记有联系。小穗育性的分离方式利用一个位点等位基因互作的模式得到了解释。认定粳型测验种和penuh

根据杂交实验结果巧判非等位基因位置的方法

近年来,非等位基因位置的判断类试题颇受高考命题者的青睐.众所周知,非等位基因既可位于非同源染色体上,也可位于同源染色体上,还可位于同一条染色体上.那么,如何根据杂交实验结果来判断非等位基因的位置呢?

自交不亲和性芸苔油菜的培育：Ⅰ．通过种间杂交导入甘蓝的S-等位基因

芸苔油菜(B.napus)是由两个自交不亲和(SI)的祖先物种即B．rapa和B．oleracea L．衍生而来的自交亲和性异源四倍体物种。芸苔属物种表现出配子体自交不亲和性，这已被花粉粒外壁中配子体的S-等位基因表达所证明了。因此，花粉粒的自交不亲和性类型可以由产生花粉的配子体的S-等位基因确定，但不能用花粉细胞核所含有的S-等位基因来确定。

等位基因特异多重PCR快速检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性研究

了解北京地区异烟肼(INH)耐药结核分枝杆菌(MTB)的分子特点,评价等位基因特异多重PCR在INH耐药性快速检测中的应用价值。选取102株北京地区MTB临床分离株,首先分别采用PCR-RFLP和反向线性杂交技术(RLB)检测耐药相关基因katG和inhA突变,然后运用等位基因特异多重PCR方法同时检测katG和inhA基因突变,并与PCR-RFLP和RLB分别检测的结果进行比较。采用等位基因特异多重PCR检测发现,INH耐药株中60.3%(35/58)存在katG315突变,13.8%(8/58)发生了inhA突变,两者同时突变率为6.9%(4/58),INH敏感株中没有发现katG315突变,而inhA突变率为18.2%(8/44)。上述检测结果与PCR-RFLP和RLB分别检测的结果完全一致,且等于两种方法结果之和,提示等位基因特异多重PCR可完全取代PCR-RFLP和RLB。北京地区INH耐药菌株以katG315 AGC→ACC突变为主;联合检测katG315和inhA基因可提高INH耐药株的检出率。等位基因特异多重PCR操作简便,结果易于判断,可作为临床MTB菌株中INH耐药性快速检测的辅助手段。

昆明地区Rh阴性者RhD假基因(RhD ψ)和杂交RhD-CE-D基因的检测和医学应用

目的用PCR基因分型技术分析研究昆明地区常住人口Rh阴性血型的D基因多态性,建立和完善本地区Rh血型的PCRRhD基因检测方法。方法收集46例Rh阴性血型样本,首先采用外显子-SSP进行PCR扩增,筛选出5例D基因部分存在型,再采用内含子-SSP进行PCR扩增,扩增产物用于DNA测序。结果在46例Rh阴性血型样本中,D基因完整缺失者29例(63%);D基因完整存在者12例(26.1%),存在全部外显子;D基因部分存在者5例(10.9%)。DNA测序结果显示,2例仅存在D基因的第10外显子的样本均为RhD-CE(3-9)-D杂合基因,1例存在D基因的第4、6外显子为RhD-CE(2-3,5,7-9)-D杂合基因,是新发现的变异等位基因。结论(1)昆明地区常住人群存在高频率的RhD-CE(3-9)-D杂合基因。(2)在昆明人群发现一种新型D变异等位基因即RhD-CE(2-3,5,7-9)-D杂合基因。

香菇单核体交配型及杂交后代的等位基因特异性PCR鉴定

【背景】食用菌交配型和单单杂交杂合子的鉴定通常采用显微镜检测观察是否具有锁状联合的方式进行,存在耗时长、工作量大且易出现误检等问题。【目的】建立一种鉴定香菇单核体交配型和单单杂交后代的分子辅助育种技术,为提高育种效率提供技术支撑。【方法】利用交配型因子保守序列单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点设计分型引物,建立等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,鉴定香菇L808和YX7的单孢分离株交配型及其杂交后代。【结果】AS-PCR鉴定结果表明,L808的38个单孢分离株中,交配型为A1B1、A2B2、A1B2和A2B1的单核体分别有6、13、8和11个;YX7的45个单孢分离株中,交配型为A3B3、A4B4、A3B4和A4B3的单核体分别有15、8、8和12个,交配型为A3A4B3B4的异核体2个;12个单单杂交菌株中,10个为真正的杂合子,2个为非杂合子。传统方法与AS-PCR分子鉴定结果完全一致,但前者容易将异核体误判为单核体。【结论】基于SNP位点的AS-PCR技术能有效鉴别香菇单核体交配型和单单杂交后代,区分单核体与异核体,具有精准、高效的特点,是一种香菇分子辅助育种的理想工具。

WX-D1位点上的新等位基因可引起面包小麦低直链淀粉突变系K107Afpp4的面粉粘性变异

面包小麦（Triticum aestivum L.）籽粒的主要成分即淀粉特性会影响小麦面粉及小麦面粉制品的品质，并目直链淀粉含量是决定淀粉特性的主要因素。K1-07Afpp4是由关东107号衍生的一个低直链淀粉突变系；我们用粘性快速分析仪测定了该品系的面粉粘度特性，发现与关东107号品种比较，在低温下粘度显著增大，峰值时间减少了。假设粘度特性是按孟德尔模式分离的，用突变品系与具有原品种或关东107号遗传背景的糯性回交品系间杂交，再通过对其杂交后代的遗传分析来研究了该突变品系的粘度特性；结果查明其粘度特性是由单一主效基因支配的，并且其基因对原品种以及糯性回交系的基因表现出部分显性。

四倍体陆地棉中每株铃数的三等位基因分析

三等位基因分析除了可以提供三元杂交组合中有关亲本等级的信息外，还可以提供关于加性、显性和上位性这些基因作用的信息。以(AB)C符号表示的三元杂交被定义为品系C和无亲缘性F1杂种(AB)间的一种杂交；品系A和B叫做主要亲本品系，品系C叫做完全的或直接的亲本品系。

甘蓝型油菜中自交不亲和位点CAPS分子标记的建立和不同S等位基因的鉴定

自交不亲和性是植物的自然机制，它可以防止自交，促进异交。甘蓝（Brassica oleracea）和白菜型油菜（B．campestris）具有这种自我识别的机制，但是它们的双二倍体后代甘蓝型油菜（B．napus）丧失了这种特性而为自交亲和的。自交不亲和性被成功地用作甘蓝杂交育种的授粉控制机制。自交不亲和性可以通过回交引入甘蓝型油菜中，或者通过其祖先——甘蓝和白菜型油菜杂交进行人工合成而引入甘蓝型油菜中。然而，自然条件下，油菜品种也偶尔会发生自交不亲和。Rudloff等从油菜育种材料中筛选到自交不亲和植株。

反向点杂交法检测中国人N-乙酰化酶基因型

目的 建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法 采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要突变位点。用本法对 4 8名肺结核患者NAT2基因型进行了分析。结果 RDB法与等位基因特异扩增法结果完全一致。 4 8名肺结核患者NAT2 5、 6、 73种突变型等位基因的基因频率分别为 1 0 4 %、2 2 9%和 15 6 %。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为 33 3%、5 4 2 %和 12 5 %。结论 RDB法检测NAT2基因型准确、方便 ,适用于指导临床合理用药。

各种天然和诱发的矮生栽培稻(0ryza Sativa L.)间的矮生素质与等位基因关系的遗传方式

用14个矮生材料和普通高秆品种IARI11124杂交的数量遗传分析说明,在这些杂交组合中显性程度是有变化的。除了用IARI6579和IARI10560与高秆品种杂交的组合以外,所有的其余组合表现了不完全显性。在91个杂交组合的F1。

如何“通过一次杂交实验”确定基因的位置

我们经常遇到：“如何通过一次杂交实验确定等位基因是在常染色体上、X染色体的非同源区段还是X和Y染色体同源的区段上”之类的问题，要解决这类问题首先要了解X、Y染色体的不区段上基因的分布。

ABO血型系统B101—002等位基因杂交导致的Bw亚型

目的研究中国汉族个体红细胞ABO血型Bw亚型的分子遗传背景。方法通过标准血型血清学方法鉴定了1个家庭3例ABw亚型，PCR扩增样本基因组DNA的ABO基因增强子、启动子和外显子1～7及侧翼内含子序列，PCR产物经割胶纯化后直接测序，并将含有多态性位点的外显子7克隆到pcDNA3．1（-）质粒，转化DH5a后进行单倍体序列分析。结果3例ABw亚型的直接序列分析发现其ABO基因均有A102、B101和002等3种等位基因部分序列特征，但无法直接确定其基因型。单倍体序列分析表明，其中1个等位基因为A102，另1个为B101—002杂交等位基因，表现为B101等位基因基础上的646T〉A，657T〉C和681G〉A变异。在110份随机样本中未发现该杂交等位基因。结论B101和002等位基因杂交可能是导致该Bw亚型的分子机制。