RHDV CD株VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析

本实验用RHDV CD株人工感染家兔,发病死亡后,取肝脏匀浆,用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物,采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后,进行序列测定。测序结果表明,VP60主要抗原表位基因长525bp。该序列与已发表的其它13株RHDV VP60同一核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性比较。结果显示,CD株核酸序列与WX-84株同源性最高为97.5%,与其它毒株的同源性在92.0%～96.6%之间。氨基酸序列与WX-84株、墨西哥Mexi-co-89株同源性最高为99.4%,与其它毒株的同源性在96.6%～98.3%之间。

金银染色三抗体夹心法检测兔出血症病毒(RHDV)抗原

成功地建立了检测兔出血症病毒 (RHDV)抗原的金银染色 (SECGA)三抗体夹心法 ,并确定了试验流程中鼠抗RHDV -IgG(1∶1 0 )、兔抗RHDV -IgG(1∶1 60 )、金标羊抗兔IgG(1∶50 )等三项的最佳工作浓度及最适显影时间 (2 0min) .实验结果表明 ,本法除了具有Dot-ELISA的高度特异性外 ,还具有抗原量少、敏感性高、不参与 3,3-二氨基联苯胺盐酸盐等有害物质、实验结果更可靠等优点 ,适合于现场推广应用 ,并为兔出血症的诊断提供可靠的实验手段 .

中国株兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性鉴定

应用 RT- PCR技术扩增编码兔出血症病毒 (rabbit hem orrhagic disease virus,RHDV) WX84株衣壳蛋白 VP6 0基因 ,将 PCR产物按相应的阅读框架克隆到表达性载体 p GEX- 6 P- 1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游。将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1株 ,在 1.0 m mol/ L IPTG和 37℃的条件下诱导 ,VP6 0 - GST基因融合蛋白获了高效表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western- blotting试验证实所表达的融合蛋白产物相对分子质量与预期的 870 0 0相符。将表达产物经电泳切胶回收目的条带后免疫小鼠 ,所得抗血清应用间接 EL ISA检测 ,与 RHDV病毒粒子呈阳性反应。试验结果表明 ,大肠杆菌中表达的 RHDV VP6

西藏林芝地区首次发现兔出血症病毒血清亚型

经交互保护试验发现，用西藏兔出血症病毒制备的疫苗免疫家兔后能抵抗同源病毒和江苏兔出血症病毒攻击，保护率均为１００％；而用江苏兔出血症病毒制备的疫苗对西藏兔出血症病毒却不能提供有效的保护，保护率仅为３３．３％。交互血凝抑制和琼脂扩散试验表明，两者在血凝素抗原及琼脂扩散抗原上均存在较大差异。首次发现兔出血症病毒血清亚型。

兔出血症病毒VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析

本实验用RHDV CD株人工感染家兔，发病死亡后，取肝脏匀浆，用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物，采用RT-PCR方法扩增了PHDV表壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后，选行序列测定。测序结果表明，VP60主要抗原表位基因长525bp。该序列与已发表的其它13株RHDV VP60同一核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性比较。结果显示，CD株核酸序列与WX-84株同源性最高为97．5％．与其它毒株的同源性在92．0％-96．6％之间。氨基酸序列与WX-84株、墨西哥Mexico-89株同源性最高为99．4％，与其它毒株的同源性在96．6％～98．3％之间。