兔胴体中兔出血症病毒(RHDV)的检测

用两株抗兔出血症病毒(RHDV)的单克隆抗体(McAb)混合包板,再以其中一株进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测 RHDV 的单抗夹心 ELISA 法。用本法和血凝(HA)试验检测51只实验感染致死兔的背肌、腿肌、淋巴结、脊髓和骨髓等5种组织中的 RHDV。结果以骨髓中 RHDV 含量最高,且较稳定,OD 值集中在1.2～1.6范围内;淋巴结次之,但 OD 值分散;肌肉和脊髓的 OD 值和检出率均较低。ELISA 的检出率显著高于HA,二者符合率很低,尤其是脊髓和淋巴结。有些样品的 OD 值很高,而 HA 却为阴性。骨髓是胴体检测 RHDV的最佳材料。经测定,本法的工作浓度为1∶20,阳性判定界值(OD+3SD)为0.11。本法的样品处理简单,毋须浓缩,从样品处理到得出结果只需4.5h,与 HA 相比,更为灵敏和稳定。

基于重组截短RHDV VP60蛋白的间接ELISA抗体检测方法

为了建立一种快速、特异、敏感的RHDV抗体检测方法,对VP60蛋白基因的抗原表位区域进行分析,截取VP60-1、VP60-2、VP60-3、VP60-semi1和VP60-semi2,大肠杆菌表达后纯化获得重组截短蛋白。经抗原、抗体结合反应比较,以VP60-semi1为包被抗原检测效果最好,并建立了基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法。经优化,该方法的最佳条件:抗原包被质量浓度为0.1μg/孔,4℃包被过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭1 h;血清稀释度为1∶200,37℃孵育1 h;最后37℃作用显色15 min。该方法与血凝抑制(HI)检测相比,敏感性好,阳性血清稀释至1∶6 400仍可检出;批内、批间变异系数分别为0.46%~4.97%和2.68%~8.88%,重复性好;符合率检测显示,与HI法的符合率为89.29%,与免疫保护试验结果符合率为100%。结果表明,建立了一种基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法,可用于监测兔群免疫后抗体水平动态并指导疫苗免疫,以及该病的流行病学调查等。

ELISA检测兔出血症病毒抗体的研究

用人“O”型红细胞吸附解脱法提纯制备的兔出血症病毒抗原,成功地建立了ELISA检测兔出血症病毒抗体的方法。实验证明,该ELISA方法敏感、特异,与HI试验结果有极好地相关性。

快速检测大豆疫霉菌的酶联免疫吸附技术研究

利用已经制备的大豆疫霉菌的抗血清，对大豆疫霉菌的纯培养和大豆病组织进行检测。结果表明：间接法（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）和夹心法（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）都能较好地检测纯培养的大豆疫霉菌，但在检测病组织时，夹心ＥＬＩＳＡ的特异性较强。

间接ELISA检测试剂盒在兔瘟抗体监测中的效果评价

兔瘟是一种急性、热性、败血性和毁灭性的传染病,发病率和死亡率极高,是目前危害我国养兔业最重要的疫病之一。间接ELISA抗体检测方法是兔瘟血清学抗体水平检测的主要方法,在兔瘟的诊断、流行状态的监测和流行病学调查等方面得到了广泛应用。为了评价兔瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒在兔瘟抗体检测中的应用效果,利用兔瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒对2012年采集于河南、河北、山东等地的818份免疫兔血清进行了检测,并进行了间接ELISA抗体检测试剂盒与间接血凝抑制试验(HI)的符合率研究。结果显示两者的符合率达94.0%,说明ELISA试剂盒具有良好的临床适用性和准确性,非常适用于兔场免疫后兔群的抗体水平监测。