环状RNA SAMD8调控miR-223-3p/RHOB表达抑制胰腺导管腺癌进程的分子机制

目的探讨环状RNA SAMD8(circ-SAMD8)在胰腺导管腺癌(PDAC)进展中的潜在机制。方法基于Microarray数据(GSE79634)分析PDAC组织中circRNAs的表达谱。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证circ-SAMD8(hsa_circ_0006148)在PDAC组织和细胞(CFPAC-1和PANC-1)中的表达。采用生物信息学分析预测circ-SAMD8的靶微小RNA(miRNA)及其下游mRNA,并采用双荧光素酶报告基因实验进行鉴定。采用MTT法和集落形成法检测PDAC细胞的增殖能力。采用免疫印迹法(Western blot)检测抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达水平。采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果circ-SAMD8在PDAC组织和细胞中的表达水平低于癌旁组织和正常细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达circ-SAMD8能有效促进PDAC细胞凋亡,抑制PDAC细胞增殖。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p是circ-SAMD8的一个潜在相互作用分子,miR-223-3p的下游mRNA靶点是RHOB。miR-223-3p在PDAC组织和细胞中异常过表达,并伴有RHOB低表达。在转染miR-223-3p模拟物或sh-circ-SAMD8的PDAC细胞中,RHOB表达显著降低,增殖能力增强,凋亡率降低。结论circ-SAMD8通过海绵化miR-223-3p,调控下游RHOB的表达,有效抑制PDAC的发生发展。

RhoB基因联合低剂量顺铂对小鼠A549肺癌的治疗作用

目的构建人pVITRO2-RhoB重组质粒,探讨pVITRO2-RhoB重组质粒在体内外的抗肿瘤效果及其联合低剂量顺铂对小鼠A549肺癌的治疗作用。方法构建pVITRO2-RhoB重组质粒,将其转染A549细胞后,观察它在细胞中的表达情况以及对A549细胞的抑制作用。建立小鼠A549肺癌模型,用1,2-二油酰-3-三甲胺基丙烷(DOTAP)+胆固醇(CHOL)脂质体包裹pVITRO2-RhoB重组质粒制备脂质体质粒DNA复合体即Lip-RhoB。将30只荷瘤鼠分别分为空白组、脂质体-pVITRO2复合物(Lip-null)组、脂质体-RhoB复合物(Lip-RhoB)组、低剂量顺铂(DDP)组和联合治疗(RhoB+DDP)组。RhoB尾静脉给药,低剂量顺铂腹腔给药,观察各组肿瘤体积变化及小鼠的生存期,原位瘤进行TUNEL染色,测定凋亡率。结果成功构建了pVITRO2-RhoB重组质粒,该重组质粒在体外抑制了A549细胞生长并促进了该细胞的凋亡;pVITRO2-RhoB重组质粒治疗裸鼠A549肺癌皮下肿瘤模型后,荷瘤鼠肿瘤体积增长减慢,肿瘤凋亡细胞增加(P<0.05);基因联合低剂量顺铂治疗后,与Lip-RhoB组和DDP组相比能显著抑制荷瘤鼠肿瘤生长(P<0.05),延长荷瘤鼠生存期(P<0.05),提高肿瘤细胞原位凋亡(P<0.05)。结论 RhoB基因具有明显的体内外抗肿瘤效果及协同化疗药物的抗肿瘤作用,因此RhoB基因联合低剂量顺铂可能是一种有效的肺癌治疗新方法。