实时荧光PCR技术用于RHc检测的研究

目的:探讨实时荧光PCR方法用于中国人群RHc基因检测的可行性。方法:收集144例大连地区RhD阳性健康献血者血样,使用血清学分型方法检测样本RhCcEe血型表型。使用检测RHCE基因第2外显子178C>A和307C>T多态性位点的TaqMan探针实时荧光PCR方法对血液标本进行RHc基因分型,并将基因分型结果与血清学分型结果相比较。结果:经血清学检测,144例样本中有60例为CCee、48例为CcEe、17例为ccEE、11例为Ccee、7例为ccEe、1例为ccee;经TaqMan探针实时荧光PCR方法检测,发现RHc基因阳性为84例、阴性为60例,基因分型结果与血清学分型结果一致,该方法的灵敏度、特异度和准确度均为100%。结论:TaqMan探针实时荧光PCR方法适用于检测中国人群RHc基因,可用于临床实验室对Rhc血型进行基因检测。

南京地区RhD阴性个体RHD基因多态性及与RhC抗原表达关系的研究

目的:研究南京地区表型为RhD阴性汉族人群中,RHD基因外显子1～10的多态性以及D基因外显子与C抗原表达之间的关系。方法:随机抽取血清学为RhD阴性的RhCC/Cc标本116例,Rhcc标本117例,PCR-SSP方法检测RHD外显子1、3、4、5、6、7、9、10和RHD内含子2、4v,10以及RHCE内含子2、4。结果:在116例血清学为CC/Cc的RhD阴性标本中,RHD外显子完整者有70例,占60.35%;25例(21.55%)RHD外显子完全缺失;而另有21例(18.10%)RHD外显子部分完整,其中的20例为RHD1-CE(2-9)-D10杂化基因;1例含有D1,Cin2,D9,D10,Din10基因。而在117例血清学为cc的RhD阴性标本中,6例(5.13%)RHD外显子完整;110例(94.02%)RHD外显子完全缺失;1例(0.85%)除D1缺失外,其他RHD2～10外显子均有。结论:南京地区汉族人群RHD基因表现出明显的多态性。cc表型的RHD基因外显子全部缺失的比率(94.02%)为CC/Cc的(21.55%)4倍多,而CC/Cc的RHD外显子完整的比率(60.35%)约为cc的(5.13%)12倍。RHD1-CE(2-9)-D10杂化基因均为CC或Cc表型,在RhD阴性表型中还有少数RHD基因变异型有待研究。