多重实时PCR和测序技术用于RHC基因分型的研究

目的探讨多重实时PCR和测序技术用于RHC基因分型的可行性。方法随机收集2019年11月2日—11月6日期间242名健康献血者血样。使用血清学方法检测标本的Rh CcEe血型表型。使用检测RHCE基因第1外显子48C>G多态性及第2内含子109 bp插入序列的多重实时PCR方法对血液标本进行RHC基因分型。使用基因测序方法对以上2个多态性位点检测结果不一致的标本进行基因分型。结果经多重实时PCR基因分型,2个多态性位点分型结果一致者共235例(97.10%),这些标本的分型结果和血清学方法是完全一致的。2个多态性位点分型结果不一致者共7例(2.90%),其中第1外显子48C>G多态性位点分型结果与血清学方法不符者共4例,假阳性率12.5%(4/32),而第2内含子的109 bp插入序列分型结果与血清学方法不符者共3例,假阴性率1.43%(3/210)。对于多重实时PCR2个多态性位点分型不一致的标本,进行第2外显子测序,测序结果和血清学完全一致。结论使用检测RHCE基因第1外显子48C>G多态性及第2内含子109 bp插入片段的多重实时PCR进行RHC基因分型,若二者结果一致,则基因分型结果可靠,若二者检测结果不一致,则可能存在假阴性或假阳性,需要进一步利用基因测序确定。

RHD等位基因37bp和RHC等位基因109bp插入序列检测

目的研究RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列是否存在多态性。方法应用PCR—SSP技术检测82例汉族RhD阳性样本，206例汉族和70例维族RhD阴性样本RHD等位基因37bp插入序列和RHC等位基因109bp插入序列。结果上述样本均检测不到RHD基因37bp插入序列，即无RHDψ假基因。82例汉族RhD阳性样本中有76例样本有RhC抗原，其中3例（3．95％）检测不到109bp插入片段；206例RhD阴性汉族样本中有75例样本有RhC抗原，其中4例（5-33％）检测不到109bp插入片段；70例RhD阴性维族样本中，无RhCC表型，3例RhCc样本均检测到109bp插入片段；其余204例Rhcc表型样本均未检测到109bp插入序列。结论中国人RHC等位基因109bp插入序列存在多态性，尚不能肯定中国人是否不存存RHDψ假基因。

实时荧光PCR技术用于RHc检测的研究

目的:探讨实时荧光PCR方法用于中国人群RHc基因检测的可行性。方法:收集144例大连地区RhD阳性健康献血者血样,使用血清学分型方法检测样本RhCcEe血型表型。使用检测RHCE基因第2外显子178C>A和307C>T多态性位点的TaqMan探针实时荧光PCR方法对血液标本进行RHc基因分型,并将基因分型结果与血清学分型结果相比较。结果:经血清学检测,144例样本中有60例为CCee、48例为CcEe、17例为ccEE、11例为Ccee、7例为ccEe、1例为ccee;经TaqMan探针实时荧光PCR方法检测,发现RHc基因阳性为84例、阴性为60例,基因分型结果与血清学分型结果一致,该方法的灵敏度、特异度和准确度均为100%。结论:TaqMan探针实时荧光PCR方法适用于检测中国人群RHc基因,可用于临床实验室对Rhc血型进行基因检测。