LRRC23激活RIG-Ⅰ信号通路对流感病毒复制的影响

目的探讨LRRC23(leucine rich repeat containing 23)激活RIG-Ⅰ信号通路对流感病毒复制的影响。方法通过在A549细胞中过表达和敲低LRRC23,探讨其对流感病毒复制的影响。将pcLRRC23质粒和siLRRC23(small interfering LRRC23)分别转染A549细胞,24 h后感染A/京防/1/86(H1N1),空斑试验和ELISA法分别检测细胞上清中流感病毒滴度和HA蛋白表达水平;qRT-PCR和Western blot法分别检测LRRC23、RIG-Ⅰ、MAVS、流感病毒M1基因及HA蛋白的表达水平;免疫荧光和免疫共沉淀试验(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测LRRC23与RIG-Ⅰ的相互作用;双荧光素酶报告基因分析试验检测IFN-β-luc和NF-κB-luc活性。结果过表达LRRC23可显著降低流感病毒A549细胞上清中流感病毒滴度,抑制HA蛋白的表达。过表达LRRC23通过激活RIG-Ⅰ-MAVS信号通路,增强流感病毒刺激的IFN-β和NF-κB激活,抑制流感病毒M1基因和HA蛋白的表达。相反,敲低LRRC23可增加流感病毒感染A549细胞上清中HA蛋白的表达;上调流感病毒M1基因相对表达量,下调RIG-ⅠmRNA和MAVS mRNA相对表达量。结论LRRC23通过激活RIG-Ⅰ信号通路抑制流感病毒复制,在抗病毒天然免疫中发挥重要作用。

金荞麦水提物通过调控RIG-Ⅰ信号通路与细胞自噬抑制甲型流感病毒H1N1的复制

目的:探讨金荞麦水提物体外抗甲型流感病毒H1N1的效果及其作用机制。方法:考察金荞麦水提物抗H1N1感染犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞的活性及作用方式;转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)分析金荞麦水提物处理后感染细胞的基因差异表达,筛选与抗病毒相关的信号通路;蛋白质印迹法(Western blot,WB)检测LC3Ⅱ的表达水平,荧光显微镜观察自噬流,分析金荞麦水提物对感染细胞自噬水平的影响。结果:金荞麦水提物具有良好的抑制细胞内H1N1复制的活性,细胞对MDCK 1.25 mg/mL抑制率为51.02%,5 mg/mL抑制率为98.22%。与模型对照组比较,金荞麦水提物处理感染细胞后,引起2682个基因差异表达。KEGG通路富集分析表明,差异表达基因富集在RIG-Ⅰ和细胞自噬信号通路。金荞麦水提物1.25、2.5、5 mg/mL处理的感染细胞中,LC3Ⅱ蛋白表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于模型对照组(P<0.01),且出现自噬溶酶体。结论:金荞麦水提物具有显著体外抗H1N1的活性,其作用机制与对宿主细胞RIG-Ⅰ信号通路的调控,以及抑制感染诱导的细胞自噬相关。

基于网络药理学和分子对接探讨清热化湿抗毒方治疗COVID-19的物质基础和作用机制

目的:探寻国医大师伍炳彩所拟清热化湿抗毒方治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在效应物质基础及可能的分子机制,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的中医药治疗及科研提供参考。方法:借助TCMSP、Batman等数据库检索清热化湿抗毒方的中药化学成分和作用靶点。通过GeneCards、OMIM和GEO数据库筛选出COVID-19的疾病靶点。使用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络和潜在靶点的相互作用关系,通过Metascape富集分析预测核心模块和作用机制,并用主要成分与ACE2进行分子对接。结果:挖掘出清热化湿抗毒方中202种化学成分、301个药物靶点,COVID-19相关疾病靶点360个,二者交集靶点64个,组方中主要化学成分9个,关键靶点涉及PTGS2、NOS2、PPARG、MAPK14、NOS3、RELA等,预测到3个核心模块,核心术语主要包括感染性疾病、免疫性疾病和通路、免疫和炎症通路。GO富集分析共得到条目196个,主要涉及细胞因子介导的信号通路、对氧化应激的反应、凋亡信号通路、蛋白质定位建立的调控、活性氧代谢过程等。KEGG通路富集筛选出147条信号通路,包括糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、弓形虫病、细胞凋亡、MAPK信号通路、阿米巴病、HIF-1信号通路和RIG-I样信号通路,分子对接发现木犀草素、槲皮素、黄芩素、山柰酚、刺槐素、汉黄芩素、柚皮素7种化学成分与ACE2具有较好的结合性,且槲皮素、黄芩素、山柰酚与ACE2结合得更为稳定。结论:清热化湿抗毒方具有多成分、多靶点、多通路作用COVID-19的作用。

地塞米松对内毒素诱导的小鼠葡萄膜炎的治疗效果及转录组分析（英文）

目的研究地塞米松(DEX)对内毒素诱导性葡萄膜炎(EIU)的治疗效果及转录组测序探讨其潜在的机制。方法将125ng脂多糖(LPS)注射入雌性BALB/c小鼠玻璃体内建立EIU模型,每隔4 h用0.1%DEX滴眼,共6次。注射LPS后24 h用裂隙灯观察小鼠眼前房炎症情况并进行临床评分。苏木精-伊红染色法观察小鼠眼部形态学变化。RNA-seq对EIU模型组和DEX治疗组小鼠的视网膜进行转录组测序并进行GO和KEGG功能分析。Real-time PCR检测小鼠视网膜炎症细胞因子表达及验证选出的差异基因。结果连续滴眼6次后,DEX可减轻EIU前房的炎症,并下调炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达。RNA-seq共检测出52个差异基因,与DEX+LPS组相比,LPS组中上调的基因有37个,下调的基因有15个。差异基因的功能分析未发现显著富集的GO条目。KEGG富集分析显示有6个显著上调的KEGG通路和2个显著下调的KEGG通路。KEGG结果提示DEX治疗后可下调RIG-I类受体信号通路(Ddx58、Ifih1和Isg15)及一些免疫炎症相关基因(Ifit1、H2-T24、Mx2和Eif2ak2)。结论 DEX对LPS引起的小鼠内毒素诱导性小鼠葡萄膜炎有保护作用,此保护作用可能与下调RIG-I类受体信号通路及一些免疫炎症相关基因有关。