抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅴ CD3AK介导的MHC非限制性溶瘤作用的机制分析

MHC(Major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ类抗原缺失是一些肿瘤细胞逃逸抗原特异性CTL攻击的重要机制。CTL能否通过MHC非限制性，MHC Ⅰ类非依赖性机制杀伤肿瘤细胞是值得深入探讨的。我们用抗CD3单抗和rIL-2共刺激法诱导的CD3AK作为效应细胞，研究了CD3AK对两株MHC Ⅰ类阴性肿瘤细胞株K562和Daudi杀伤作用，

rIL-2、TNF-α、IFN-γ与抗CD3-抗胶质瘤双特异性抗体的协同细胞毒作用

目的 :观察细胞因子 r IL-2、TNF-α、IFN-γ对抗 CD3 -抗胶质瘤双特异性抗体 (双抗 )的协同作用 ,进一步提高双抗对人脑胶质瘤的治疗作用。 方法 :以人脑胶质瘤细胞株 SHG-4 4为靶细胞 ,健康人或胶质瘤患者的外周血单个核细胞 ( PBMC)为效应细胞 ,以 1 8h3 H-Td R掺入释放法测定细胞毒活性 ,采用单比实验和联合作用等对比分析方法 ,分析各细胞因子 ( r IL-2、TNF-α、IFN-γ)对双抗诱导的细胞毒性作用的影响。 结果 :r IL-2、TNF-α、IFN-γ均可协同提高双抗对人脑胶质瘤的细胞毒作用 ( P<0 .0 5)。来源于恶性胶质瘤患者的效应细胞活性较正常人低 ,r IL-2与双抗可协同增强其活性。结论 :细胞因子 r IL -2、TNF-α、IFN-γ可协同提高双抗对效应细胞的活化 ,充分激活效应细胞 ,增强抗肿瘤免疫能力。

rIL-2诱导一氧化氮产生对培养心肌细胞线粒体活性的影响

目的研究人类重组白介素2（rIL-2）对培养大鼠心肌细胞产生一氧化氮（NO）及线粒体活性的影响。方法在培养心肌细胞时分别或同时加入rIL-2、单甲基L-精氨酸（L-NMMA）以及L-精氨酸（L-Arg），并测定培养液中NO浓度，心肌细胞内的线粒体活性值。结果心肌细胞加rIL-2培养48h与对照组相比NO产生显著增加[（85±6.1）比（10±2.5）nmol·（106细胞）-1，P＜0.01]。rIL-2刺激NO产生呈时间（6～48h）和剂量（5×104～1×106IU·L-1）相关性。L-NMMA可抑制rIL-2诱导NO的产生而添加L-Arg可逆转这一作用。rIL-2组与对照组相比线粒体活性值明显受抑（0.397±0.03比0.599±0.02，P＜0.01），而添加L-NMMA可逆转（0.536±0.03，P＜0.01）。NO产生量与线粒体活性值呈负相关（P＜0.01）。结论rIL-2刺激培养大鼠心肌细胞产生NO可抑制线粒体活性。

健脾理气方联合rIL-2对荷瘤小鼠化疗免疫抑制的影响

目的研究联合应用中药健脾理气方和重组白细胞介素－２（ｒＩＬ－２）对肿瘤化学治疗免疫抑制的影响。方法用环磷酰胺（ＣＴＸ）给Ｈ２２荷瘤小鼠化疗，造成免疫抑制，应用中药健脾理气方和ＩＬ－２联合治疗后，用３Ｈ－ＴｄＲ释放法检测荷瘤小鼠的ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测脾细胞增殖活性，ＦＡＣＳ法检测ＩＬ－２受体，Ｌ３Ｔ４，ＬＹ２阳性细胞数。结果采用大剂量ＣＴＸ后，荷瘤鼠脾重、脾细胞数、脾细胞增殖及杀伤能力均明显降低。Ｔ细胞亚群中ＴＨ比例下降明显，ＩＬ－２受体表达能力也受损，而加用健脾理气方或ｒＩＬ－２后，上述各项指标均有一定改善，其中中药组ＴＨ比例升高较明显；两者合用，则各项免疫指标的恢复更加显著。结论中药及生物反应调节剂联合应用有可能会更有效地减轻化疗的免疫抑制作用。

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅳ抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的PBL增殖与凋亡共存现象

抗CD3单抗TCR／CD3复合物中的CD3分子相互作用，通过信号传导系统引起T细胞功能的不同变化，如诱导T细胞活化增殖，诱导无反应性(unresponsiveness)和细胞凋亡。但抗CD3单抗这几种性质不同，看似矛盾的作用之间有何内在联系及规律是值得深入探讨的。

LAK细胞及rIL-2腹腔灌注对胃癌术后预防腹膜转移的研究

作者选用3组Ⅲ期胃癌病例，即根治术后用LAK细胞／rIL－2腹腔灌注的LAK组，用5－Fu腹腔灌注的5-Fu组，未用药的对照组。经随访观察发现LAK组出现腹膜种植转移者2年只有7％（2／27），明显少于另外两组。因此文章指出：①LAK细胞／rIL－2腹腔灌注能有效的预防胃癌根治术后的腹腔种植转移，临床推广使用俾有助于生存率的提高；②鉴于LAK细胞的杀伤特性，阐明其真正价值是用于预防癌根治后的转移；③只有LAK细胞数量超过癌细胞数时才能有效的发挥其作用。

pH值对LAK细胞增殖的影响及与rIL-2联合抗恶性肿瘤的研究

目的 :调节细胞培养液 pH值 ,观察不同 pH值对LAK细胞增殖和rIL 2、LAK细胞杀伤恶性肿瘤细胞的影响。方法 :采用淋巴细胞分离液梯度离心法从正常人外周血分离单个核细胞并用rIL 2激活 ,于 96孔细胞培养板或培养管中培养。观察pH值分别为 6.8、7.3、7.6的培养液对rIL 2激活单个核细胞的影响。用 740 4细胞作为靶细胞 ,MTT法测定培养液 pH值为 6.8、7.3、7.6状态下rIL 2的杀伤作用和LAK细胞的细胞毒性。结果 :培养液 pH值为 7.3、7.6,有利于LAK细胞增殖 ,pH值为 7.6时LAK细胞杀伤效果最佳 ,pH值为 6.8时几乎无杀伤作用。培养液 pH值为 6.8、7.6都不利于740 4细胞生长 ,而 pH值为 7.6有利于LAK细胞生长。 结论 :恶性肿瘤组织内 pH值的变化与免疫细胞和肿瘤细胞的接触反应存在联系。

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅰ 抗CD3单抗和rIL-2共刺激对PBMC的激活作用

本实验结果表明采用抗CD3单抗和rIL-2共刺激外周血单个核细胞(Peripheral blood mononueleacells，PBMC)可诱导其增殖、活化、分化为具有杀瘤活性的抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞 (Anti CD3 monoclcnal anybody activated killer cells．CD3AK)。(1)抗CD3单抗和rIL-2共刺激可诱导PBMC增殖，

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅱ CD3AK的免疫生物学特征

本实验采用倒置显微镜、光学显微镜、电子显微镜和荧光激活的细胞分类器(FACS)分析了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征。经抗CD3单抗和rIL-2共刺激后细胞形态学发生明显的变化，细胞异型性明显，有些体积增大，呈圆形或不规则形，往往形成集落：有些细胞体积变小。

rIL-2激活的骨髓细胞抗瘤活性——白血病自体骨髓移植净化

用rIL-2激活未分离的骨髓外胞(bone marrow cell,BMC)观察其抗瘤活性和造血功能。经rIL-2激活24h后的未分离BMC即表现对NK细胞敏感的K562和NK细胞不敏感的Raji细胞均有杀伤活性;在一定时间内,随激活时间延长抗瘤活性增强,在第4天达高峰。rIL-2激活的未分离BMC与分离BMC二者抗瘤活性无差异。5例急性非淋巴细胞白血病病人骨髓经rIL-2激活后,白血病祖细胞CFU-L生成能力下降;经rIL-2激活的骨髓细胞生成CFU-GM能力无下降。根据我们的研究结果提出,rIL-2激活未分离BMC可用于白血病ABMT中残留白血病细胞净化,其方法简便、实用。

国产rIL-2治疗恶性肿瘤的基础与临床应用研究

L-AK细胞联合rIL-2目前被认为是抗肿瘤、抗转移免疫治疗中最为有效的方法之一。其疗效除了与输入的LAK细胞数量有关外，还与IL-2的质和量相关，随着国产rIL-2的面世，此疗法日益广泛。本文较为系统地研究了国产rIL-2在肿瘤过继免疫治疗上的可行性、安全性及有效性，为临床应用提供了依据。在此基础上，

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells．CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody，Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞，具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子，这就提出一个问题。

新型基因重组人白细胞介素-2(125ser-rIL-2)的Ⅱ期临床研究

目的 :新型基因重组人白细胞介素 2 (12 5ser rIL 2 )的临床应用范围 ,确定 12 5ser rIL 2对某些实体瘤 ,恶性胸腹水的疗效及人体的毒副作用 ,研究最适合的给药途径和治疗剂量。方法 :分别应用 12 5ser rIL 2经胸、腹腔注射 ,静脉滴注治疗5 4例中晚期恶性肿瘤患者。结果 :CR 2例 ,PR 12例 ,总缓解率为 2 5 9%。主要有效病种为恶性胸腹水 ,恶性黑色素瘤 ,肠癌和胃癌 ,其中胸腹腔注射的有效率为 4 0 7% ,静脉注射的有效率为 11 1%。免疫指标CD3、CD4治疗后升高 ,CD8治疗后下降 ,但无统计学差异 ,NK细胞治疗后升高 ,由 4 89上升到 6 2 8(P <0 0 5 )。治疗中主要不良反应为寒颤、发热、肌肉酸痛 ,未出现严重不良反应。结论 :12 5ser rIL 2具有一定的抗肿瘤作用 。

rIL-2治疗恶性胸腔积液的疗效观察

目的：观察基因工程人白细胞介素Ⅱ（rIL-2）注射剂治疗恶性胸腔积液的疗效。方法：对29例癌性胸水患者用rIL-2做胸腔内注射给药，每周1～2次，2～4周为一疗程，全组平均注射3次，4次注射无效即停药；对照组23例用DDP做胸腔内注射以做比较。结果：治疗组29例患者总有效率为82．76％（24／29），胸水癌细胞转阴率为79．2％（19／29）；对照组总有效率82．6％（19／23），胸水癌细胞转阴率89．7％（17／23）。结论：rIL-2对癌性胸水患者有治疗效果，具有与化疗药物相近的控制胸水的作用，且毒副反应小，患者易于接受。

海参猴桃液辅以少量rIL-2对免疫杀伤细胞活性的正向调节研究

目的 :探讨用中药海参猴桃液 (SSAP)辅以基因重组人白细胞介素 2 (rIL -2 )体外培养扩增、激活免疫杀伤细胞LAK的机理 ,观察SSAP辅以少量rIL -2能否提高及在多大程度上提高LAK细胞的杀瘤活性。方法 :通过提取健康供血者的外周血单个核细胞作为待培养细胞 ,设空白对照组 (加等量生理盐水 )、阳性对照组 (1 0 0 0U/mlrIL -2 1ml)、实验 1组 (1 0 0 0U/mlrIL -2 0 .5ml +30 0 0 μg/mlSSAP 1ml)、实验 2组 (1 0 0 0U/mlrIL -20 .1ml+30 0 0 μg/mlSSAP 1ml) ,4组在不同条件下培养LAK细胞 ,分别用H -TdR释放法检定其体外对人肝癌BEF -740 4杀伤活性。结果 :30 0 0 μg/ml的SSAP +1 0 0 0U/mlrIL -20 .1ml在培养第 3天便能测出杀伤活性 ,第 9天达峰值 [杀瘤率 (75 .5± 1 3.6 ) % ],杀瘤活性与 1 0倍量rIL -2单独诱导激活的LAK细胞杀瘤活性相近 [杀瘤率 (92 .9± 2 1 .3) % ],两组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而且杀瘤活性持续 1 8天。结论 :SSAP辅以少量的rIL -2能大量扩增激活LAK细胞 ,增强其对肿瘤细胞的杀伤力 ,更重要的意义在于获得的LAK细胞杀伤力强大而持久 ,同时可减少rIL

人rIL-2对鼠脾细胞杀瘤功能的影响

目的探讨ｒＩＬ－２抗肿瘤机制。方法用“ＬＤＨ释放法”检测经不同处理的脾细胞对其敏感的靶细胞ＹＡＣ－１，不敏感的ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）及耐受的ＬＬＣ肺转移细胞（ＬＬＣＦ１）体外杀伤功能。结果正常脾细胞对３种靶细胞的杀伤能力有明显差异（Ｐ＜０．０１）；经人ｒＩＬ－２体外激活后（ＬＡＫ细胞），杀瘤能力明显增强，并对ＬＬＣ、ＬＬＣＦ１细胞的杀伤作用已无明显差异；对ＬＬＣ血道转移也有明显抑制作用；激活时间对脾细胞杀瘤能力也有影响。结论人ｒＩＬ－２能激活小鼠脾细胞，使其杀瘤尤其是对具有抗ＮＫ细胞的肿瘤杀伤能力明显增强，对肿瘤转移也有疗效。

PHA-LAK/rIL-2疗法的应用与评价——60例实体瘤患者临床试验分析

获得较大量高细胞毒活性的LAK细胞，是LAK／IL-2继承性细胞免疫疗法的重要问题之一。为此我们进行了多年的实验研究，采用健康“O”型供血者外周血单个核细胞(PBMC)制备PHA-LAK细胞(即经PHA预刺激48小时然后用rIL-2诱导的LAK细胞)，并与直接用rIL-2诱导的常规LAK细胞(C-LAK)的生物学特性进行了较全面的对比。

骨肉瘤病人外周血淋巴细胞体外相关瘤细胞致敏和rIL-2诱导的杀伤细胞

对骨肉瘤病人外周血淋巴细胞体外相关瘤细胞致敏和ｒＩＬ┐２诱导的杀伤细胞（ｒＩＬ┐２┐ＣＬ）进行探讨。方法采用２种培养方法：１．淋巴细胞／肿瘤细胞混合培养；２．单独ｒＩＬ┐２激活ＬＡＫ细胞，借助５１Ｃｒ释放实验对２种杀伤细胞的抗瘤效力作比较性分析。结果ｒＩＬ┐２活性高峰在ｒＩＬ┐２诱导第１２天，２周后仍可维持相当强杀伤水平，而ＬＡＫ细胞高峰出现于３～５天，１２天后消失。前者比后者对病人肿瘤组织学相关骨肉瘤细胞系具有更强烈特异杀伤效力，且对自体淋巴母细胞无毒副反应。结论ｒＩＬ┐２┐ＣＬ主要是一种特异性较高，杀伤活性强烈ＣＴＬ细胞群。

rIL-2体外对烧伤脓毒症的细胞免疫功能的影响

目的：为探讨烧伤脓毒症的防治措施，采用烫伤后盲肠结扎穿刺术建立烧伤脓毒症小鼠模型。方法：体外观察ｒＩＬ－２（重组白细胞介素２）对鼠模型和临床烧伤患者的细胞免疫功能的作用。结果：①烧伤脓毒症小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ刺激的应答和ＮＫ细胞毒活性均显著降低；②烧伤患者的Ｔ细胞和ＮＫ细胞免疫功能也明显降低，并随烧伤严重程度而加重；③ｒＩＬ－２在体外对烧伤后受损的细胞免疫功能有一定的改善作用，但对脓毒症感染患者无明显作用。结论：ｒＩＬ－２对烧伤后免疫功能的降低有一定的恢复作用。