胰高血糖素样肽-1模拟肽对大鼠胰岛RINm5F细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)模拟肽对大鼠胰岛RINm5F细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌的影响。方法将RINm5F细胞分为GLP-1组(加入30nmol/LGLP-1)、GLP-1模拟肽组(分别加入15、30和50nmol/LGLP-1模拟肽)和空白对照组,MTT法检测各组细胞的增殖情况;在不同浓度葡萄糖(4.5和20mmol/L)培养条件下,采用ELISA Kit检测各组细胞胰岛素的分泌情况;葡萄糖加棕榈酸诱导RINm5F细胞凋亡,检测各组细胞的存活率,并用RT-PCR检测各组细胞凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 GLP-1模拟肽可呈浓度依赖性地刺激RINm5F细胞增殖;可促进RINm5F细胞分泌胰岛素,这种作用随环境中葡萄糖浓度的增加而增强;与凋亡模型组比较,GLP-1模拟肽组细胞存活率增加,bcl-2基因表达增加,bax基因表达量无明显变化。结论 GLP-1模拟肽可以促进RINm5F细胞增殖和分泌胰岛素,并抑制RINm5F细胞凋亡。

ICOS联合IFN-γ单抗对活化T细胞诱导的RINm5F细胞凋亡的保护作用

目的 探讨可诱导性协同刺激分子（ICOS）单抗和γ-干扰素（IFN-γ）单抗联合应用对T细胞活化诱导的胰岛细胞凋亡及其相关凋亡机制。方法植物血凝素（PHA）活化的T细胞与胰岛细胞株RINm5F共同培养，联合应用ICOS单抗和IFN-γ单抗48h后，AnnexinV／PI法观察RINm5F细胞凋亡率，RT—PCR法观察凋亡相关和胰岛功能相关基因表达，放射免疫法检测观察胰岛素分泌水平。结果ICOS单抗与IFN-γ单抗联用，T细胞活化诱导的RINmSF细胞株凋亡率（％）显著下降（IgG对照71．89±3．29，ICOS单抗39．66±2．05，IFN-γ单抗45．65±1．59，ICOS单抗＋IFN-γ单抗20．49±0．95），这可能与死亡受体途径FAS／FAS配体，肿瘤坏死因子及其受体和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体等相关的基因表达下调有关；同时两者联合应用后，RINm5F细胞株INS1、INS2及PDX-1基因表达量显著上调，胰岛素分泌水平也显著升高。结论ICOS单抗和IFN-γ单抗联合应用降低胰岛细胞凋亡的同时，对胰岛细胞的胰岛素分泌功能具有一定的保护作用，是一种有效的诱导T细胞对胰岛细胞无反应性的手段。

T细胞对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:观察T细胞对大鼠胰岛瘤细胞系RINm5f凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法:应用PI法检测T细胞与RINm5f共培养后RINm5f细胞的凋亡率;应用半定量RT-PCR技术检测培养后bcl-2、bax、p53和fasmRNA的表达。结果:PHA与T细胞均可致胰岛细胞的凋亡,且P、T具有协同效应,P或T或两者联合应用均呈时间依赖性地促进RINm5f细胞的凋亡;胰岛细胞凋亡过程中,P、T可协同致诱导凋亡基因bax、fasmRNA表达水平明显升高,而抗凋亡基因bcl-2及p53mRNA表达水平有下降趋势,但统计学无显著性差异。结论:T细胞可通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重胰岛移植排斥反应,其机制可能与凋亡基因与抗凋亡基因的表达比率变化有关,其中fas、bax诱导凋亡基因可能起主要作用。

腺病毒介导的白介素10基因转导对鼠胰岛β细胞的保护作用

目的观察腺病毒介导的白介素10(IL-10)基因转导对体外及体内胰岛β细胞的保护作用。方法用携带有IL-10基因的重组腺病毒载体感染RINm5F细胞、昆明小鼠及链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠,ELISA检测IL-10基因表达、胰岛素水平,病理切片及免疫组化观察胰岛炎积分。结果 RINm5F细胞中检测到IL-10基因及蛋白的有效表达,含IL-10的重组腺病毒(Ad-IL-10)可抑制STZ致细胞凋亡作用。昆明小鼠腹腔注射Ad-IL-10后,再经STZ诱发为1型糖尿病,Ad-IL-10组胰岛炎积分明显降低。经STZ诱导的早期1型糖尿病小鼠,Ad-IL-10组与其他组相比平均血糖水平差别无统计学意义,小鼠胰岛炎症浸润程度与糖尿病对照组差别无统计学意义。结论腺病毒介导的IL-10可在胰岛RINm5F细胞有效表达,并且具有抗凋亡的能力。IL-10基因能够保护胰岛β细胞功能,促进胰岛素分泌,减少小鼠的胰岛炎和糖尿病的发生。IL-10基因对于已发生1型糖尿病早期的昆明小鼠无显著的治疗作用。