特异性小干扰RNA靶向沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌Lovo细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测特异性siRNA对RIP1基因在mRNA水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝(MrI'r)比色法检测siRNA对细胞增殖的影响;流式细胞周期法检测siRNA对细胞周期的影响;Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染RIP1 siRNA的大肠癌Lovo细胞,RT-PCR显示RIP1 mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);G0～G1期细胞[(54.68±1.54)%]明显多于阴性对照组[(48.48±1.96)%]和空白对照组[(43.92±1.68)%];RNA干扰明显抑制Lovo细胞迁移力和侵袭力(21±2.731vs.43±2.064)。结论 RIP1 siRNA可有效抑制大肠癌Lovo细胞RIP1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,RIP1siRNA能有效调控Lovo细胞恶性生物学行为。

Rip1-Tag2转基因小鼠模型的生物学特性

目的研究胰腺癌Rip1-Tag2小鼠饲养管理及生物学特性。方法 Rip1-Tag2转基因小鼠饲养于SPF级环境中,记录小鼠的繁育情况。通过计数血性胰岛及肿瘤的数目,并测量肿瘤的体积,观察Rip1-Tag2小鼠肿瘤发生发展情况。通过组织病理学切片,观察Rip1-Tag2小鼠胰腺癌的病理学变化。结果 Rip1-Tag2小鼠已经成功繁育10代,共产仔620只。Rip1-Tag2小鼠肿瘤发生发展具有明显的阶段性:约6周出现血性胰岛,约8周出现肿瘤,并随着小鼠周龄的增加,肿瘤的数目和体积逐渐增多和增大。结论 Rip1-Tag2小鼠已被成功保种和扩群,具有较强的繁殖和适应能力,可稳定自发胰腺肿瘤,可作为研究肿瘤发生发展的经典动物模型。

Rip1-Tag2;PSGL-1^(-/-)小鼠模型的构建

目的构建Rip1-Tag2;PSGL-1-/-小鼠模型。方法将Rip1-Tag2小鼠与P-选择素糖蛋白配体敲除(PSGL-1 KO)小鼠杂交,剪尾提DNA后用PCR法检测小鼠的基因型。结果 Rip1-Tag2小鼠与PSGL-1KO小鼠杂交3代后,Rip1-Tag2;PSGL-1-/-小鼠模型构建成功。结论将Rip1-Tag2小鼠与PSGL-1 KO小鼠杂交3代后成功建立了Rip1-Tag2;PSGL-1-/-小鼠模型,并进行繁育。