柚皮素下调RIP1-RIP3-MLKL信号通路抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡

目的基于受体相互作用蛋白激酶(receptor interacting protein kinase,RIP)1-RIP3-混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like proteins,MLKL)介导的细胞坏死性凋亡途径,探究柚皮素对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、柚皮素组、RIP1抑制剂(Nec-1)组、RIP1-RIP3-MLKL坏死信号激活剂(Z-VAD-fmk)组、柚皮素+Z-VAD-fmk组,每组15只。ELISA法检测卵巢组织IL-1β、TNF-α水平;HE法观察卵巢形态;分离卵巢组织颗粒细胞,流式细胞术检测凋亡率及坏死率;免疫组化法检测卵巢组织磷酸化RIP1(p-RIP1)阳性表达;Western blot法检测RIP1-RIP3-MLKL途径相关蛋白表达。结果RIP1特异性抑制剂Nec-1和柚皮素可阻断RIP1磷酸化活化,抑制RIP1-RIP3-MLKL信号通路,并降低PCOS大鼠炎症水平,缓解卵巢颗粒细胞坏死及凋亡(P<0.05)。Z-VAD-fmk可促进RIP1-RIP3-MLKL途径活化,加重卵巢颗粒细胞凋亡,并部分减弱柚皮素的抗卵巢颗粒细胞凋亡作用(P<0.05)。结论柚皮素可能通过阻断RIP1-RIP3-MLKL介导的坏死性凋亡途径活化,抵抗PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

RIP1-RIP3-MLKL信号通路在急性冠状动脉综合征病人外周血单核细胞中的表达

目的:研究急性冠状动脉综合征(ACS)病人外周血单核细胞(PBMCs)上刺激受体相互作用蛋白1(RIP1)-RIP3-混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL)信号通路的表达变化,并分析其可能机制。方法:选取初诊为ACS病人60例,其中不稳定型心绞痛(UAP)病人31例,急性心肌梗死(AMI)病人20例,对照组选取同期健康体检者19名。采集所有受试者外周静脉血,分别提取血浆和外周血单核细胞(PBMCs),酶联免疫吸附实验(ELISA)和比浊法分别检测血浆中白细胞介素(IL)-1和IL-18、MLKL的水平,运用Real Time-PCR检测MLKL的mRNA表达,免疫印迹法检测PBMCs中RIP1、RIP3和MLKL的蛋白表达。结果:3组受试者血浆IL-1、IL-18含量和MLKL含量差异均有统计学意义(P<0.01),PBMCs中RIP1和RIP3蛋白表达增加(P<0.05),MLKL的mRNA和蛋白表达亦增加(P<0.05)。与UAP组比较,AMI组病人外周血浆中IL-1、IL-18和MLKL进一步升高,RIP1和RIP3的蛋白表达的进一步增加(P<0.05),MLKL的mRNA和蛋白表达增高。结论:UAP和AMI病人体内存在不同程度的炎症活化,RIP1-RIP3-MLKL信号通路在PBMCs中的表达量随病情的严重程度逐渐增加,提示RIP1-RIP3-MLKL信号通路可能在ACS的不同类型发病中起重要作用。

颅内动脉瘤患者血清hsa-miR-513b-5p水平及作用机制研究

目的探讨血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中的表达水平及其可能的作用机制。方法收集颅内动脉瘤患者(颅内动脉瘤组)和无颅内动脉瘤的志愿者(对照组)各100例,采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术测定血清hsa-miR-513b-5p、肿瘤坏死因子(TNF-α)、MMP2、MMP3、MMP9(基质金属蛋白酶,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂4(TIMP4)水平。采用hsa-miR-513b-5p模拟物和抑制剂转染人血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMC),检测细胞增殖、凋亡和坏死变化。通过双荧光素酶报告基因分析hsa-miR-513b-5p的作用靶点COL1A1,并分析影响颅内动脉瘤形成的信号通路。结果颅内动脉瘤组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、TNF-α、MMP2、MMP3、MMP9水平高于对照组(P<0.05),而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、血浆总同型半胱氨酸(Hcy)和TIMP4水平降低(P<0.05)。与对照组相比,颅内动脉瘤组患者血清hsa-miR-513b-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p模拟物转染的HASMC,与模拟物对照组比较,其细胞增殖能力降低,而凋亡和坏死水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p抑制剂转染的HASMC,与抑制剂对照组比较,其细胞增殖能力增强,而凋亡和坏死水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示has-miR-513b-5p可靶向抑制COL1A1表达,并上调RIP1-RIP3-MLKL和MMPs信号通路,抑制HASMC增殖和细胞外基质合成。结论血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中表达水平下降,并参与调节血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质合成影响动脉瘤形成。