受体相互作用蛋白3——细胞凋亡与坏死的调节阀

综述了受体相互作用蛋白(RIPs)蛋白结构和RIP3调控细胞凋亡与坏死机制的研究进展.受体相互作用蛋白3(receptor-interacting protein3,RIP3)是丝/苏氨酸蛋白激酶家族成员之一,该蛋白质家族包含一类高度保守的丝/苏氨酸激酶结构域.RIP家族激酶作为细胞应激传感分子,在调控细胞凋亡、细胞坏死和存活通路中发挥重要作用.近年发现,RIP3参与肿瘤坏死因子TNFα诱导的细胞程序化坏死的生物学过程.认识RIP3调控TNFα诱导的细胞凋亡与坏死不同死亡途径转换的分子机制,有助于发现肿瘤治疗的新策略.

血浆受体相互作用蛋白激酶-3与短暂性脑缺血发作患者近期预后的相关性

目的探讨血浆受体相互作用蛋白激酶-3(RIP3)与短暂性脑缺血发作(TIA)危险分级评估系统(ABCD2)评分的相关性,以及其对TIA患者近期预后的预测价值。方法选择2018年1月至2019年12月在西安医学院第一附属医院急诊科住院治疗的235例TIA患者(TIA组)纳入研究,另匹配与TIA组患者年龄、性别相当60例健康体检志愿者为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆RIP3水平,采用ABCD2评分对TIA患者进行危险分级评分。TIA患者在出院后至少随访90 d,复合终点事件包括再发TIA、脑梗死及死亡,以此将TIA患者进一步分为事件组和无事件组。结果 TIA组血浆RIP3水平(pg/m L)显著高于对照组[437.61(364.63,483.67) vs. 379.18(330.54,405.41),Z=5.966,P<0.001],事件组血浆RIP3水平显著高于无事件组[500.31(470.53,534.92) vs. 423.20(360.88,481.08),Z=5.419,P<0.001]。Spearman直线相关分析结果示,血浆RIP3与ABCD2评分呈正相关(r=0.501,P<0.001)。多元线性回归分析结果示,血浆RIP3是TIA患者ABCD2评分的独立影响因素(Beta=0.531,P<0.001)。二分类Logistic回归分析结果示,血浆RIP3水平≥500 pg/m L是TIA患者出院90 d发生复合终点事件的独立危险因素(OR=4.171,95%CI 1.327-13.105,P=0.014)。ROC曲线分析结果示,血浆RIP3水平和ABCD2评分预测出院90 d发生终点事件的AUC分别为0.821(0.751,0.891)和0.879(0.816,0.941),差异无统计学意义(Z=1.204,P>0.05)。结论血浆RIP3对TIA患者近期预后具有较高的预测价值。

坏死性凋亡经典通路在心血管疾病中的研究进展

坏死性凋亡作为一种程序性细胞死亡,参与了动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注、心肌梗死、心力衰竭等多种心血管疾病的病理生理过程。综述坏死性凋亡经典通路受体相互作用激酶1(RIP1)-受体相互作用激酶3(RIP3)-底物混合谱系激酶样蛋白(MLKL)的分子机制、抗坏死性凋亡相关治疗药物及这一通路在常见心血管疾病中的研究进展。为探寻新的治疗方式、降低心血管疾病的死亡率、改善心血管病人的预后提供参考。

黄芩苷诱导小鼠结肠癌发生坏死性凋亡作用的体外研究

目的探讨黄芩苷对小鼠结肠癌CT26.WT细胞的作用及细胞死亡形式。方法 CT26.WT细胞分为4组,(1)正常对照组,加入新鲜培养基,常规培养;(2)黄芩苷组,加入终浓度为100μmol·L-1黄芩苷;(3) z-VAD-fmk组,加入终浓度为20μmol·L-1z-VAD-fmk;(4)联合用药组,加入终浓度为20μmol·L-1z-VAD-fmk 1 h后加入100μmol·L-1黄芩苷。采用CCK8法检测黄芩苷对细胞增殖抑制作用和细胞存活率。DAPI染色检测细胞核的变化;透射电镜观察细胞超微结构; QPCR法和Western blotting法检测黄芩苷对细胞内RIP3基因和蛋白表达水平的影响。结果与正常对照组比较,黄芩苷组和联合用药组差异有统计学意义(P<0.05);正常对照组细胞死亡率为(10.54±0.19)%,黄芩苷组为(34.93±0.16)%,z-VAD组为(11.23±0.59)%,联合用药组为(23.27±1.20)%(P<0.01)。与正常对照组比较,黄芩苷组核浓染,出现碎裂现象;与黄芩苷组比较,联合用药组核浓染,有明显核碎裂现象。电镜结果显示黄芩苷组细胞发生坏死性凋亡,细胞肿胀,线粒体肿胀,内容物泄漏。黄芩苷组RIP3 mRNA的表达明显上调(P<0.01),RIP3蛋白的表达明显增强(P<0.05)。结论黄芩苷诱导CT26.WT细胞发生坏死性凋亡,可使RIP3的基因和蛋白表达明显上调。

低氧预处理胎盘间充质干细胞减轻重症急性胰腺炎模型小鼠胰腺组织损伤

目的探讨低氧预处理胎盘间充质干细胞(HP-MSCs)对小鼠重症急性胰腺炎(SAP)组织损伤的保护作用,并探索其可能机制。方法分别于常氧(21%O_(2))和低氧(1%O_(2))培养48 h的胎盘间充质干细胞(P-MSCs),获得常压和低氧预处理胎盘间充质干细胞(N-MSCs和HP-MSCs),CCK-8和MTT法检测P-MSCs活力与迁移能力;C57BL/6雄性小鼠32只,分为假手术组(sham)、SAP组(胰胆管逆行注射4%牛磺胆酸钠0.1 mL/100 g)、常氧组(N-MSCs)和低氧组(HP-MSCs)。造模结束后6 h,经尾静脉注射N-MSCs和HP-MSCs(1×10^(6)个/100 g)干预SAP,每组8只。在造模后12 h收集血清和胰腺组织。HE染色评估胰腺组织损伤程度并进行病理评分;ELISA测定血清淀粉酶、脂肪酶活性及炎性因子水平;Western blot检测受体相互作用蛋白3(RIP3)、MLKL、MLKL的磷酸化含量(p-MLKL)、NLRP3在胰腺组织中的表达。结果HP-MSCs在体外表现出较N-MSCs更好的活力、增殖能力;在小鼠体内,与SAP组相比,N-MSCs组中胰腺病理评分降低(P<0.05),血清中淀粉酶、脂肪酶活性降低,IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);与N-MSCs组相比,HP-MSCs组中胰腺病理评分降低(P<0.05),炎性因子TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05)。在HP-MSCs中,RIP3、p-MLKL、NLRP3在胰腺组织的表达中明显低于SAP组与N-MSCs组(P<0.05)。结论HP-MSCs较N-MSCs更能显著减轻SAP,其机制可能与抑制RIP1/RIP3-MLKL信号通路发挥其作用有关。

Necrostatin-1对大鼠肾缺血一再灌注损伤的保护作用

目的探讨Necrostatin-l（Nec-1）对大鼠。肾缺血一再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为三组：假手术组、DMSO对照组、Nec-1组，每组30只。DMSO对照组和Nec-1组采用夹闭双侧大鼠肾动脉45min再恢复血流的方法制成肾缺血一再灌注模型，于模型完成前15min尾静脉给药。假手术组不夹闭双侧’肾动脉。模型制备成功后于再灌注后2、12、24h收集血清及肾组织；检测血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）；HE染色观察。肾组织病理改变；酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1B（IL-1p）浓度；Western blot方法检测受体相互作用蛋白1和3（RIPl、RIP3）的表达。结果Nec-1组Scr、BUN浓度各时间点均较DMSO对照组明显降低（P〈0．05，P〈0．01）；HE染色可见肾小管上皮细胞脱落坏死、问质水肿、炎细胞浸润明显减少；TNF-α、IL-18浓度亦均降低（P〈0．01，P〈0．05）。DMSO对照组及Nec-1组RIPl蛋白和RIP3蛋白表达均较假手术组明显升高（P〈0．01）。结论Nec-1能明显减轻大鼠肾缺血一再灌注损伤，其机制可能与抑制细胞程序性坏死有关。