预按压和缺血后按压心俞穴对MIRI模型兔心肌RISK通路的影响

目的探讨预按压和缺血后按压心俞穴对心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia-reperfusion injury, MIRI)模型家兔心肌损伤的RISK通路相关激酶的影响。方法将60只新西兰大白兔随机分为正常组、模型组、假手术组、按压心俞组、预按压心俞组,每组12只。结扎冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注损伤模型;以中医按法刺激器按压心俞穴为干预手段。空白组不予任何干预;模型组、预按压心俞组、按压心俞组给予造模处理;假手术组只做开胸与穿线,不结扎冠脉;按压心俞组在造模成功后给予按压心俞穴操作;预按压心俞组在造模前给予按压心俞穴操作。以高效液相色谱法检测腺苷含量,以Western Blot法和免疫组化检测p-Akt/Akt、p-ERK/ERK、p-PI3K/PI3K。结果预按压心俞组、按压心俞组缺血心肌组织腺苷含量均增高(P<0.05);缺血后按压心俞、预按压心俞均能提高p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt;预按心俞组、按压心俞组有提高p-ERK/ERK比值的趋势。结论预按压心俞和缺血后按压心俞均能减少缺血再灌注损伤,其通过诱发内源性触发物质腺苷来激发RISK通路从而发挥心肌保护效应。

RISK信号转导通路与肾缺血后处理的心肌保护作用

目的通过在体兔心肌缺血再灌注模型,研究再灌注损伤补救酶(RISK)信号转导通路是否参与肾缺血后处理对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法32只兔随机分为4组,每组8只。对照组:结扎冠状动脉前降支1h,再灌注5h。实验A组于再灌注同时对左侧肾动脉行结扎30s、开通30s的3次反复循环,余同对照组;实验B组于再灌注15min后对左侧肾动脉行结扎30s、开通30s的3次反复循环,余同对照组;药物组于再灌注前5min耳缘静脉注射磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002(0.3mg/kg),余同实验A组。分别于再灌注3h、再灌注5h取兔血,测定各组血超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平。实验终末,取结扎血管支配部位心肌进行免疫组化处理,观察心肌组织蛋白激酶B(Akt)和内皮一氧化氮合酶(eNOS)含量以及心肌组织结构的变化。结果实验A组血SOD含量高于其它组(P<0.01),MDA含量低于其它组(P<0.01),实验A组心肌组织Akt和eNOS含量明显高于其它组(P<0.01);其余组间各项观察指标无显著差异。结论RISK信号转导通路参与肾缺血后处理对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用;肾缺血后处理必须在心肌再灌注后数分钟内立刻进行才能发挥其心肌保护作用。

RISK信号转导通路对肠系膜上动脉缺血后处理的心肌保护作用(英文)

目的通过在体兔心肌缺血再灌注模型，研究再灌注损伤补救酶（reperfusion injury salvage kinase，RISK）信号转导通路是否参与肠系膜上动脉缺血后处理对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法32只兔随机分为缺血再灌注组（IR组），肠系膜上动脉缺血后处理组（MI-Post C组），缺血预处理＋肠系膜上动脉缺血后处理组（IPC＋MIPostC组），药物干预＋肠系膜上动脉缺血后处理组（DI＋MI—PostC组），每组8只。实验达终点时，取结扎血管支配部位心肌测定心肌梗死面积并观察心肌细胞超微结构改变；利用Western—blot技术检测各组动物心肌蛋白激酶B（Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白磷酸化的表达。结果MI—PostC组和IPC＋MI—PostC组坏死面积占总面积之比均明显低于其他组（F=4．72，q=3．69～4．20，P〈0．05）；而二者之间相比，坏死面积占总面积之比无明显差别（P〉0．05）；DI＋MI—PostC组LY294002消除了缺血后处理的上述减少心肌梗死面积的作用（q=4．18，P〈0．05）。MI-PostC组Akt和eNOS蛋白表达明显高于IR和DI＋MI—PostC组（F=276．34、31．8，q=9．02～29．82，P〈0．01）；DI＋MI—PostC组LY294002消除了缺血后处理减轻再灌注损伤作用。结论心肌缺血再灌注时立即行肠系膜上动脉缺血后处理与心肌缺血预处理共同运用并不能产生额外的心脏保护作用；RISK信号转导通路参与肠系膜上动脉缺血后处理对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用。

缺血后调适对大鼠骨胳肌缺血再灌注损伤的作用及其机制研究

目的:探讨缺血后调适对大鼠骨胳肌缺血再灌注损伤(IRI)的作用及其机制。方法:随机将18只大鼠分为3组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后调适组(IPoC组),每组6只。各组均分离股动脉(右侧),IR组及IPoC组均施以4h缺血,缺血后IR组直接进行再灌注,IPoC组则行4个循环30s再灌注/30s缺血操作后再行灌注,Sham组仅分离股动脉无缺血再灌注操作。运用pH仪对缺血期、调适期、再灌注期进行测量;并于再灌注2h后取大鼠胫前肌行western blotting检测RISK通路中相关蛋白(Akt、Erk1/2及其磷酸化激活物p-Akt、p-Erk1/2)的表达情况;运用分光光度计监测Ca^(2+)诱发的线粒体通透性转换孔(MPTP)开放情况;测定24h后腓肠肌湿/干重(W/D)比值。结果:(1)IPoC组在调适初期2.67min内能维持组织内酸性环境,pH均值为(6.81±0.133)。(2)与Sham组比较,IPoC组的p-Akt/t-Akt、p-Erk1/2/t-Erk1/2比值均明显增加(均P<0.01),IR组的p-Akt/t-Akt、p-Erk1/2/t-Erk1/2比值则明显降低(均P<0.01)。(3)在2 min、4 min时,IPoC组MPTP开放数低于其他两组(均P<0.05)。(4)IPoC组W/D比值明显低于IR组(P<0.05),而Sham组与IPoC组W/D比值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:缺血后调适能有效减轻大鼠骨骼肌缺血再灌注所致的肌肉水肿,其机制可能是通过维持再灌注初期组织酸环境,激活RISK通路而对再灌注骨骼肌起到保护作用。

木犀草素预处理对H_2O_2诱导大鼠心肌H9C2细胞损伤的保护机制研究

为了探讨木犀草素能否通过再灌注损伤挽救激酶(Reperfusion injury salvage kinase,RISK)细胞信号通路发挥抗心肌氧化应激损伤保护作用,本实验分别用1、50、100、150μmol/L的木犀草素预处理大鼠心肌来源的H9c2细胞,再使用650μmol/L的H_2O_2制作氧化应激损伤模型。利用MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)检测细胞存活率,然后用最适浓度的木犀草素预处理H9c2细胞并利用激光共聚焦显微镜技术检测线粒体膜电位,Western blot检测P-ERK1/2、P-Akt、P-GSK-3β以及凋亡相关蛋白细胞色素C。最后我们发现不同浓度的木犀草素预处理均能提高细胞存活率,其中在100μmol/L时达到最佳效应。与H_2O_2组相比,100μmol/L的木犀草素预处理可以使TMRE(四甲基罗丹明乙酯)强度降低程度明显减轻,对抗H_2O_2引起的细胞氧化损伤。同时木犀草素预处理可以降低细胞色素C表达,使P-GSK-3β、P-Akt、P-ERK1/2表达升高,渥曼青霉素(PI3K抑制剂)和PD98059(ERK1/2抑制剂)可以阻断这种作用。因此我们认为木犀草素预处理可以减轻H_2O_2引起的氧化应激损伤,这一作用可能是通过RISK信号通路增加P-GSK-3β表达,抑制m PTP开放实现的。

白藜芦醇对再灌注心肌的保护作用机制及其研究进展

急性心肌梗死（Acute Myocardial Infarction，AMI）所引起的再灌注损伤（Reperfusion Injury，RI）严重危害人类的健康，是目前临床治疗中急待解决的重要问题。近年来，很多学者致力于其相关的亚细胞结构及分子信号通路等机制研究，包括内质网，RISK通路，GSK-3β及线粒体等，这些成果为临床治疗提供了可靠的理论依据。