乳腺癌中RIZ1基因启动子甲基化状态的探讨

目的:研究乳腺癌组织中RIZ1启动子甲基化状态及与临床、病理指标之间的关系,并探讨该甲基化状态与RIZ1 mRNA表达的相关性。方法:应用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP)检测人乳腺癌组织和相应癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织中RIZ1启动子甲基化状态,结合患者的临床与病理资料分析结果,并结合半定量RT-PCR法检测结果加以分析。结果:34例乳腺癌标本中RIZ1启动子甲基化阳性率为44.1%(15/34),该甲基化状态与患者年龄、肿瘤TNM分期、有无淋巴结转移、雌激素受体(ER)是否阳性无相关性(均为P>0.05)。RIZ1启动子甲基化标本中的RIZ1 mRNA表达水平低于未甲基化标本者,两者差异具有显著性(P<0.05),RIZ1表达降低与其启动子高甲基化状态之间有相关性(P<0.05)。结论:RIZ1基因启动子高甲基化是乳腺癌中常见的分子病理学改变之一;RIZ1 mRNA表达与RIZ1启动子高甲基化呈负相关。

卵巢上皮性癌中RIZ1基因表达缺陷的意义及其与甲基化的关系

目的:研究抑癌基因RIZ1在卵巢上皮性癌组织及卵巢癌细胞系中的表达变化,分析其表达变化与甲基化的关系。方法:以卵巢癌组织及卵巢癌细胞系为研究对象。RT-PCR检测RIZ1 mRNA水平;MSP检测RIZ1基因甲基化状况;蛋白印迹检测RIZ1蛋白表达。结果:卵巢癌组织、卵巢癌细胞系及正常卵巢组织中RIZ1 mRNA相对含量的平均值分别为0.32±0.14,0.26±0.11和1.17±0.08。RIZ1蛋白相对含量的平均值分别为0.38±0.11,0.34±0.06和1.56±0.14。卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中RIZ1的甲基化率分别为25.8%、20%。卵巢癌组织、卵巢癌细胞系分别与正常卵巢组织比较,RIZ1基因的表达差异均有统计学意义(P<0.05);存在甲基化的卵巢癌组织及细胞系中,RIZ1基因表达缺失或下降。5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理RIZ1基因发生甲基化的卵巢癌细胞系后,RIZ1基因重表达;且去甲基化处理后,卵巢癌细胞生长均减慢。结论:RIZ1基因表达缺陷与卵巢癌的发生有关,DNA甲基化是其表达缺陷的原因之一;去甲基化处理可使RIZ1基因重表达,并抑制卵巢癌细胞的增殖。

RIZ1表达对髓性白血病细胞株凋亡的影响

背景与目的RIZ1是近年来发现的抑癌基因,在多种实体瘤如乳腺癌、肝癌和胃癌中RIZI均表达下降或无表达。本研究探讨了RIZ1转录对髓性白血病细胞凋亡的作用。方法采用RT-PCR法检测5种髓性白血病细胞株即AML193、KG-1、KG-1a、K562、Ery-1中RIZ1mRNA转录状况。将含RIZ1全长cDNA的重组质粒pRIZ1RH转入该基因表达缺乏的细胞株中,以制备强制性基因表达细胞模型。细胞株导入单纯载体(pcDNA3.1)作为对照。于基因导入后24h应用FCM细胞凋亡率。结果该5种细胞株中,AML193与K562呈RIZ1mRNA无转录或低转录,但导入pRIZ1RH24h后则出现转录或转录明显增加,且测得该两细胞株凋亡率分别为(22.7±0.7)%、(28.6±1.2)%,均高于相应对照组[分别为(11.7±1.6)%、(9.0±0.8)%],差异均有显著性(P<0.01)。结论RIZ1的转录能够诱导AML193和K562髓性白血病细胞株凋亡,提示该基因可作为其失活的髓性白血病患者之基因疗法的重要靶分子。

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对BGC823胃癌细胞株RIZ1基因去甲基化转录调控作用

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胃癌细胞系BGC823细胞株RIZ1基因的去甲基化转录调控作用及对细胞株生长增殖的影响,寻找胃癌治疗的新靶点.方法:使用3种不同浓度5-Aza-CdR干预胃癌BGC823细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测药物干预前后RIZ1基因的甲基化状态和RIZ1 mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CdR处理的BGC823细胞中RIZ1基因启动子区域CpG岛高甲基化,且RIZ1 mRNA不表达,经2,5,10μmol/L5-Aza-CdR处理48 h后,RIZ1基因启动子区域高甲基化得到逆转,细胞中均有RIZ1 mRNA表达,相对定量值分别为0.509,0.716,0.831;3种浓度5-Aza-CdR处理BGC823细胞后,与对照组比较,细胞增殖速度出现不同程度减慢(P<0.05),随着浓度的增加其抑制作用增强;并显著抑制BGC823细胞生长周期,与对照组相比,G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论:5-Aza-CdR能有效逆转胃癌BGC823细胞RIZ1基因的异常甲基化,从而激活因高甲基化导致RIZ1基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,抑制肿瘤细胞生长.

人食管鳞癌组织中RIZ1基因表达水平的研究

目的:研究RIZ1基因mRNA及蛋白在人食管鳞癌中的表达。方法:以48例人食管鳞癌组织、相应癌旁及正常组织为研究对象,Real-time PCR法检测RIZ1基因mRNA表达情况;55例癌组织及相应正常组织采用免疫组织化学法检测RIZ1蛋白的表达情况。结果:统计结果显示人食管鳞癌组织中RIZ1 mRNA的表达量显著低于正常食管组织(P<0.01),癌旁组织中的表达量也显著低于正常食管组织(P<0.01),但癌组织与癌旁组织的表达量无显著性差异(P=0.067)。RIZ1蛋白在癌组织中阳性表达率为29.1%(16/55),在正常食管组织中阳性表达率为76.4%(42/55),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:人食管鳞癌组织中RIZ1基因不仅在mRNA转录水平,而且在蛋白表达水平明显减低。提示RIZ1表达降低可能与食管鳞癌的发生有关,RIZ1在食管鳞癌的发生过程中起到抑制作用。RIZI可能是食管鳞癌的潜在抑制基因。

乳腺癌中RIZ1的表达及其临床意义初探

目的研究R IZ1基因mRNA表达的改变与乳腺癌发生及与患者相关临床和病理特征之间的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测34例乳腺癌标本及相应癌旁组织、15例乳腺良性肿瘤R IZ1基因mRNA的表达状况,并结合相关指标进行分析。结果R IZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达明显低于癌旁乳腺组织与乳腺良性肿瘤组织,差异均有显著性(均P<0.05)。R IZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达与年龄、肿瘤TNM分期、淋巴结转移、激素受体(ER)状况无相关关系(均P>0.05)。结论:R IZ1基因mRNA表达降低可能与乳腺癌的发生相关。

抑癌基因RIZ1与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

临床常见的妇科三大恶性肿瘤宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌,其发生机制与多种癌基因的激活、抑癌基因的失活以及外源刺激因素等有关,其中一个很重要的因素是抑癌基因的失活。RIZ1基因为近几年新发现的肿瘤抑制基因,属于核组蛋白甲基转移酶超家族。RIZ1基因表达沉默存在于人类多种肿瘤细胞中。大量研究证实:DNA启动子甲基化是导致RIZ1基因表达沉默的主要原因,去甲基化可以使RIZ1重新表达,进而抑制肿瘤细胞的生长促进其凋亡。

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1调控肥胖和肿瘤信号通路研究综述

视网膜母细胞瘤结合锌指蛋白1(retinoblastoma-interacting zinc finger protein 1,RIZ1)基因,又称PRDM2(positive regulatory domain 2)基因,是PRDM基因家族一员,其蛋白序列包含1个PR结构域、1个核激素受体结合基序、8个锌指结构域和1个视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)相互作用基序。RIZ1主要定位于细胞核内,在核内发挥转录抑制因子、基因调控、蛋白质-蛋白质相互作用等功能。RIZ1是代谢通路的重要参与者,其通过调控代谢相关基因影响基础代谢,抑制肥胖的形成;RIZ1功能突变或含量不足与多种肿瘤发生发展相关,其通过激活下游致癌基因或调控代谢参与肿瘤进程。RIZ1通过v-akt鼠科胸腺瘤病毒癌基因同源物Ⅲ(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog 3,AKT3)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1),以及作为协同激活剂等方式分别调控AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、IGF-1、雌激素这3条肿瘤和肥胖相关分子信号通路。3条分子通路功能有差异且其下游分子存在交叉,提示RIZ1在不同年龄、性别和器官中的作用可能不同。详细研究RIZ1与RIZ2在代谢进程中的调控作用有助于全面了解RIZ1参与肥胖和肿瘤形成的机制。未来基于RIZ1靶点进行诊断研究或功能恢复可能对代谢性疾病和肿瘤的诊断和治疗有重要意义。

RIZ1基因在骨髓增生异常综合征中的表达及其意义

目的探讨不同类型及不同危险度分级骨髓增生异常综合征(MDS)患者RIZ1mRNA的表达及其与临床特征的相关性。方法收集2014年1月至2017年12月清华大学附属垂杨柳医院及山西医科大学第二医院收治的46例初发MDS患者和10名健康对照者(均为造血干细胞移植术供者),采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MDS患者及健康对照者骨髓细胞中RIZ1mRNA表达水平。结果与健康对照者相比,MDS患者的RIZ1mRNA相对表达量下降[中位数(P25,P75):0.557(0.333,0.815)比1.003(0.895,1.812)],差异有统计学意义(Z=-2.991,P=0.0003)。依据世界卫生组织(WHO)分型,难治性贫血/环形铁粒幼细胞性难治性贫血/难治性血细胞减少伴多系发育异常(RA/RAS/RCMD)、难治性贫血伴有原始细胞过多Ⅰ(RAEB-Ⅰ)、难治性贫血伴有原始细胞过多Ⅱ(RAEB-Ⅱ)、MDS转变成急性髓系白血病(MDS/AML)组和健康对照组的RIZ1mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(χ2=19.500,P<0.01);进一步两两比较结果显示,RAEB-Ⅰ、RAEB-Ⅱ、MDS/AML组的RIZ1mRNA相对表达量均低于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。依据国际预后评分系统(IPSS)分类,低危、中危-1、中危-2及高危组MDS患者和健康对照组的RIZ1mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(χ2=19.214,P=0.001);进一步两两比较结果显示,中危-1、中危-2及高危组的RIZ1mRNA相对表达量均低于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05),并且随疾病危险度分级升高,RIZ1mRNA表达呈下降趋势。RIZ1mRNA表达水平与患者年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板计数及染色体核型均无相关性(均P>0.05)。结论MDS患者RIZ1mRNA表达水平下降,且在不同类型及不同危险度分级中表达存在差异,该基因可能参与MDS发病机制,并与疾病进展有关。

RIZ1基因表达缺陷对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因（RIZ1）表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状况;以3×105/瓶为细胞观察单位,5 μmol/L的5-杂氮2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对细胞进行去甲基化处理48 h,用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测RIZ1的mRNA和蛋白表达,观察处理前后的差异;细胞增殖实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡.结果 在SW480细胞中可以扩增出RIZ1基因启动子的甲基化条带,经去甲基化处理后,则能检测出该基因的mRNA和蛋白的表达条带,其增殖速度明显减慢,凋亡率从（4.4±1.7）%增高到（23.8±2.6）%,差异有统计学意义（P＜0.05）,5 μmol/L的5-aza-CdR可显著上调SW480中RIZ1的表达;而LoVo细胞中未检测到基因启动子的甲基化,处理前后其基因表达、增殖和凋亡差异均无统计学意义（P＞O.05）.结论 抑癌基因RIZ1启动子异常甲基化在调节其表达中发挥重要作用,对RIZ1进行去甲基化处理使其重新表达能明显减缓结肠癌SW480细胞的生长,促进其凋亡.

卵巢上皮性肿瘤中RIZ1基因表达缺陷的临床意义

目的:探讨抑癌基因RIZ1在卵巢上皮性肿瘤组织及卵巢癌细胞系中的表达及其表达变化与卵巢癌发生的关系。方法:以卵巢肿瘤组织及卵巢癌细胞系为研究对象。RT-PCR检测RIZ1 mRNA水平;蛋白印迹检测RIZ1蛋白表达。结果:卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性肿瘤组织及正常卵巢组织中RIZ1 mRNA相对含量的平均值分别为0.42±0.16、0.34±0.12、0.68±0.12及1.17±0.08,RIZ1蛋白相对含量的平均值分别为0.48±0.11、0.38±0.08、0.82±0.11及1.56±0.14。卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性卵巢肿瘤组织分别与正常卵巢组织比较,RIZ1基因的表达差异均有统计学意义(P<0.05);良性卵巢肿瘤组织与卵巢癌组织比较,RIZ1基因的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RIZ1基因表达缺陷与上皮性卵巢癌的发生密切相关。

抑癌基因RIZ1启动子区甲基化与卵巢癌的关系

目的:探讨抑癌基因RIZ1启动子区甲基化与卵巢上皮性癌发生的关系。方法:以卵巢癌组织及卵巢癌细胞系为研究对象。MSP检测RIZ1基因甲基化状况;RT-PCR、蛋白印迹分别检测RIZ1mRNA及蛋白表达;细胞增殖实验检测5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理卵巢癌细胞前后细胞的增殖状况。结果:卵巢癌组织、卵巢癌细胞系、良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的甲基化率分别为25.8%、40%、0%和0%。5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理RIZ1基因发生甲基化的卵巢癌细胞系后,RIZ1基因重新获得表达;且去甲基化处理后,卵巢癌细胞生长均减慢。结论:抑癌基因RIZ1启动子区甲基化与上皮性卵巢癌的发生有关,DNA甲基化是其表达缺陷的原因之一。

急性髓系白血病干细胞RIZ1基因启动子甲基化状态研究

目的探讨急性髓系白血病（AML）[除外急性早幼粒细胞性白血病（APL）即非APL]白血病干细胞RIZ1基因启动子甲基化状态与发病的相关性。方法应用流式分选仪提取20例初诊为急性髓系白血病患者CD34^＋CD38^-CD123^＋的干细胞，通过甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测6例健康者和20例AML（非APL）患者骨髓CD34^＋CD38^-CD123^＋细胞RIZ1基因启动子区域甲基化状态，用实时定量PCR（RT—PCR）检测RIZ1基因的表达情况。结果RIZ1基因在健康者骨髓细胞中呈非甲基化状态，而在40％AML（非APL）患者骨髓CD34^＋CD38^-CD123^＋细胞启动子区域存在甲基化，与健康者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。AML患者RIZ1基因mRNA相对表达水平明显低于健康者。结论在大部分AML（非APL）患者白血病干细胞中，RIZ1基因启动子区域发生甲基化，其mRNA表达水平也明显降低。RIZ1基因启动子区域甲基化可能与AML（非APL）的发病相关，其甲基化检测对AML（非APL）的早期诊断具有重要的临床意义。

SOCS-1和RIZ1基因启动子区CPG岛甲基化与胃癌发病的关系

目的检测细胞因子信号转导抑制因子(SOCS-1)和Rb结合锌指结构基因(RIZI)启动子区甲基化状态,初步探讨其甲基化状态与胃癌发生的关系。方法收集南京市原发性胃癌患者96例为胃癌组,采用1:1病例-对照研究方法 ,随机选取非消化系统疾病、非肿瘤患者96例为对照组,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测胃癌组及对照组外周血DNA的SOCS-1和RIZl基因基因启动子区甲基化状态。结果胃癌组SOCS-I(OR=4.845,P<0.001,95%CI:2.506～9.367)和RIZI基因(OR=3.338,P=0.01,95%CI:1.591～7.003)启动子区甲基化率均高于对照组,且有统计学意义。在胃癌组中,发现SOCS-1基因甲基化异常与年龄、性别、Lauren分型、胃癌发生部位、TNM分期等无统计学关联(P>0.05),而与肿瘤淋巴有无转移有一定关联(P=0.002);RIZI基因甲基化异常与年龄、性别、Lauren分型、胃癌发生部位、TNM分期、淋巴结转移均未见统计学关联(P>0.05)。结论 SOCS-1和RIZI基因启动子区异常甲基化可能具有肿瘤特异性,检测SOCS-1和RIZI基因甲基化状态对于胃癌的早期诊断和治疗有一定意义。

5-氮-2'脱氧胞苷逆转人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因的表达

目的:观察甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne RIZ1基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨人卵巢癌细胞系OVCAR3和AnglneRIZ1基因失活的机制及5-Aza-CdR对RIZ1基因表达的调控。方法:用5-Aza-CdR(浓度为5μmol/L)处理体外培养的人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne后,采用MSP法检测用药前后细胞中RIZl基因的甲基化状态,RT-PCR及Western-blot法检测用药前后细胞中RIZ1基因mRNA及蛋白表达的变化。结果:在人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中,RIZ1基因启动子区呈异常甲基化状态,RIZ1基因mRNA及蛋白表达缺失,经过5-Aza-CdR处理后,RIZ1基因启动子区呈非甲基化状态,其mRNA及蛋白重表达。结论:5-Aza-CdR可改变人卵巢癌细胞系OVCAR3和Anglne中RIZ1基因甲基化状态,从而调控癌细胞中RIZ1基因的表达。