期刊文献+
共找到98篇文章
< 1 2 5 >
每页显示 20 50 100
RLM-RACE法扩增獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因5′-cDNA末端序列 被引量:2
1
作者 王景艳 张高华 +2 位作者 苏乔 安利佳 刘兆普 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期903-907,共5页
根据已获得的盐生植物獐茅(Aeluropus littoralisvar.sinensisDebeaux)液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter)基因部分cDNA片段,设计2条特异引物(GSP1、GSP2),采用RLM-RACE(RNA ligase-medi-ated rapid amplification of 5′and 3... 根据已获得的盐生植物獐茅(Aeluropus littoralisvar.sinensisDebeaux)液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter)基因部分cDNA片段,设计2条特异引物(GSP1、GSP2),采用RLM-RACE(RNA ligase-medi-ated rapid amplification of 5′and 3′cDNA ends)法获得了其5-′cDNA末端序列,并找出了转录起始位点。该片段长816 bp,与芦苇液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因序列同源性最高达91%,与拟南芥、盐角草、水稻、大麦、小麦的同源性分别为81%、82%、86%、87%和81%,为该基因全长的克隆及启动子的研究奠定了基础。与其它测定基因转录起始位点的方法相比,RLM-RACE方法更快捷、简便、准确。 展开更多
关键词 獐茅 NA^+/H^+逆向转运蛋白 rlm-race 5-′cDNA末端 转录起始位点
下载PDF
RLM-RACE法快速克隆盐角草胆碱单加氧酶cDN A5′末端全序列 被引量:2
2
作者 葛庆燕 吴凇 +1 位作者 苏乔 安利佳 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期336-338,共3页
采用RLM-RACE法,根据已获得的盐角草胆碱单加氧酶基因的部分序列,设计2条特异性嵌套PCR引物,成功地克隆了该基因cDNA 5′末端全序列,测序结果显示该片段包括5′UTR 154个核苷酸和编码区606个核苷酸,编码N端202个氨基酸.Blast P结果表明... 采用RLM-RACE法,根据已获得的盐角草胆碱单加氧酶基因的部分序列,设计2条特异性嵌套PCR引物,成功地克隆了该基因cDNA 5′末端全序列,测序结果显示该片段包括5′UTR 154个核苷酸和编码区606个核苷酸,编码N端202个氨基酸.Blast P结果表明,该片段编码的蛋白序列与辽宁碱篷及其他藜科植物的胆碱单加氧酶同源性达到85%以上.同时找出了其转录起始位点,即为该序列的第1个碱基g. 展开更多
关键词 rlm-race 盐角草 胆碱单加氧酶 cDNA 5′末端 转录起始位点
下载PDF
Yr5-virulent races of Puccinia striiformis f.sp.tritici possess relative parasitic fitness higher than current main predominant races and potential risk
3
作者 Gensheng Zhang Mudi Sun +4 位作者 Xinyao Ma Wei Liu Zhimin Du Zhensheng Kang Jie Zhao 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2024年第8期2674-2685,共12页
Wheat stripe rust,caused by Puccinia striiformis f.sp.tritici(Pst),is one of the most destructive fungal diseases of wheat,and seriously threatens safe production of the crop worldwide.In China,new races historically ... Wheat stripe rust,caused by Puccinia striiformis f.sp.tritici(Pst),is one of the most destructive fungal diseases of wheat,and seriously threatens safe production of the crop worldwide.In China,new races historically appeared and rapidly developed to be predominant races and have resulted in ineffectiveness and replacement of wheat resistance cultivars as well as massive reduction in yield.In the present study,the relative parasitic fitness of the two newlyemerged Yr5-virulent races(TSA-6 and TSA-9)were compared with those of four currently predominant Chinese races(CYR31,CYR32,CYR33,and CYR34)based on evaluation on 10 Chinese wheat cultivars.As a result,there were significant differences in the relative parasitic fitness parameters among overall tested races based on multiple comparison(LSD)analysis(P<0.05).The principal component analysis(PCA)of overall parasitic fitness parameters indicated that the sporulation ability,infection and spore survivability,expansion capacity,and potential pathogenicity were the most important parasitic fitness attributes of the tested races.Based on the establishment of extracted three principal components and a comprehensive factor score mathematical models,evaluations of the parasitic fitness attributes of tested races showed that the level of relative parasitic fitness of the tested six races was:CYR32(1.15)>TSA-9(0.95)>TSA-6(0.92)>CYR34(0.29)>CYR31(–1.54)>CYR33(–1.77).The results indicated that two Yr5-virulent races TSA-9 and TSA-6 possessed relative parasitic fitness higher than races CYR34,CYR31,and CYR33,but lower than race CYR32,and have potential risks in developing to be predominant races.Therefore,continual monitoring of both Yr5-virulent races,and their variants is needed.The use of wheat cultivars(lines)with Yr5 resistance gene singly in wheat breeding is essential for being avoided,and is suggested to combine with other effective stripe rust resistance genes. 展开更多
关键词 wheat stripe rust Puccinia striiformis f.sp.tritici parasitic fitness Yr5 new race
下载PDF
3种5’RACE技术的比较与优化 被引量:12
4
作者 邓雪柯 殷建华 曹毅 《成都医学院学报》 CAS 2007年第1期20-25,共6页
目的研究环化法、末端脱氧核糖核酸转移酶法和SMART反转录酶法3种常用5’RACE的技术的特点,并对它们进行了优化。方法以播娘蒿RNA为模板,先按文献标准方法进行5’RACE,然后通过增加反应时间,提高部分反应物浓度等方法进行优化。结果未... 目的研究环化法、末端脱氧核糖核酸转移酶法和SMART反转录酶法3种常用5’RACE的技术的特点,并对它们进行了优化。方法以播娘蒿RNA为模板,先按文献标准方法进行5’RACE,然后通过增加反应时间,提高部分反应物浓度等方法进行优化。结果未优化前环化法和TdT酶法条带几乎不可见,SMART反转录酶法隐约可见条带,但不清晰。优化条件后,环化法出现弥散条带,TdT酶法胜之,但条带依旧弥散,而SMART反转录酶法最佳,获得清晰特异性条带。结论SMART5’RACE效果最好,其次为TdT酶法,环化法效果有待改进,同时通过优化条件可以明显增加产物的特异性,为实验研究中5’RACE方法的选择提供了依据。 展开更多
关键词 5race 比较 优化
下载PDF
利用RACE技术扩增大豆抗病基因同源cDNA 5′末端序列 被引量:4
5
作者 王邦俊 王强 +2 位作者 张志刚 张劲松 李学刚 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期425-427,共3页
利用抗病基因保守序列筛选大豆cDNA文库,获得一抗病基因同源cDNA片段,命名为KR3-1。根据KR3-1设计两个基因特异引物(GSP和NGSP),分别与通用引物(UPM)和巢式通用引物(NUP)共同扩增,成功地克隆到了该基因的5’末端序列。该扩增片段长447bp... 利用抗病基因保守序列筛选大豆cDNA文库,获得一抗病基因同源cDNA片段,命名为KR3-1。根据KR3-1设计两个基因特异引物(GSP和NGSP),分别与通用引物(UPM)和巢式通用引物(NUP)共同扩增,成功地克隆到了该基因的5’末端序列。该扩增片段长447bp,与已知序列重叠部分为129bp。 展开更多
关键词 race技术 扩增 大豆 抗病基因 末端序列
下载PDF
利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子相互作用肽cDNA5′末端快速扩增及序列分析 被引量:2
6
作者 邓建川 刘杞 +3 位作者 陈曜 孙航 唐琳 王娜 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期463-465,共3页
目的:利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子(hALR)相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法:按照5′-RACE试剂盒(Takara)操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′末端快速扩增,用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果:... 目的:利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子(hALR)相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法:按照5′-RACE试剂盒(Takara)操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′末端快速扩增,用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果:成功获取487bp的5′-RACE反应产物,其中5′端延伸了275bp,同源序列分析表明与人Citron激酶mRNA高度同源。结论:5′-RACE技术可以用于快速有效扩增已知部分cDNA序列的5′末端,Citron激酶可能是与hALR具有相互作用的蛋白。 展开更多
关键词 5′-race 人肝再生增强因子 相互作用肽 CDNA
下载PDF
浙贝母环阿屯醇合成酶基因5`-RACE快速扩增及序列分析 被引量:3
7
作者 朱振洪 葛立军 +1 位作者 王丽丽 李雪玲 《浙江中医药大学学报》 CAS 2012年第5期558-562,共5页
[目的]克隆浙贝母环阿屯醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)5`末端cDNA序列。[方法]利用简并引物及RT-PCR方法获得CAS的核心基因,应用cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术快速克隆5`末端片段,采用NCBI网站上... [目的]克隆浙贝母环阿屯醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)5`末端cDNA序列。[方法]利用简并引物及RT-PCR方法获得CAS的核心基因,应用cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术快速克隆5`末端片段,采用NCBI网站上的Protein Blast软件进行氨基酸同源性比对。[结果]从浙贝母叶片中成功地克隆出一条长691bp的CAS基因5`末端cDNA片段,含起始密码子及163bp的5`延伸区。对5`末端的150个氨基酸同源性分析表明,该片段与C.asiatica,G.glabra,A.thaliana,W.somnifera的CAS同源性分别达72%,66%,71%,71%。[结论]上述结果表明所克隆的片段为浙贝母CAS的5`末端序列,为下一步CAS全长基因的克隆及CAS在浙贝母次生代谢中的功能研究打下基础。 展开更多
关键词 浙贝母 CAS 5`-race 克隆 序列分析
下载PDF
β淀粉样肽单克隆抗体可变区基因的5′RACE扩增及序列分析 被引量:1
8
作者 王鑫 张莹 何金生 《生物技术通讯》 CAS 2010年第2期192-195,共4页
目的:克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法:从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA,根据恒定区序列设计基因特异性引物,通过5′RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因,测定并分析可变区基... 目的:克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法:从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA,根据恒定区序列设计基因特异性引物,通过5′RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因,测定并分析可变区基因序列,并克隆入pMD18-T载体。结果:重链可变区基因序列全长450bp,编码150个氨基酸残基;轻链可变区基因序列全长429bp,编码143个氨基酸残基。在GeneBank中对氨基酸序列进行比对分析,二者均符合小鼠IgG可变区基因的特征。根据Kabat法则对A8抗体轻链和重链可变区氨基酸序列基因进行分析并确定了3个抗原互补决定区(CDR)、4个框架区(FR)和信号肽。结论:通过5′RACE法得到了抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因,为进一步研究抗体三维结构,以及对该抗体进行人源化改造奠定了基础。 展开更多
关键词 Β淀粉样肽 单克隆抗体 可变区序列 5race
下载PDF
抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体可变区基因的5'RACE扩增及序列分析
9
作者 樊红艳 刘树玲 +2 位作者 房婷 杨秀旭 于长明 《生物技术通讯》 CAS 2013年第4期457-461,共5页
目的:克隆并分析抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体轻链和重链的可变区基因。方法:从分泌抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,根据小鼠IgG恒定区序列设计特异性引物,通过5′RACE法扩增其轻链和重链的可变区基因,克... 目的:克隆并分析抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体轻链和重链的可变区基因。方法:从分泌抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,根据小鼠IgG恒定区序列设计特异性引物,通过5′RACE法扩增其轻链和重链的可变区基因,克隆入pMD18-T载体,测序并分析其可变区序列。结果:3株抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的重链可变区基因序列全长均为423 bp,编码141个氨基酸残基;轻链可变区基因序列全长均为393 bp,编码131个氨基酸残基;在GenBank中对氨基酸序列进行比对分析,均符合小鼠IgG可变区基因的特征;根据Kabat法则对3株抗体轻链和重链可变区氨基酸序列进行分析,确定了3个抗原互补决定区、4个框架区和前导肽。结论:通过5'RACE法得到了3株抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体轻链与重链可变区基因,为进一步研究抗体三维结构、人源化改造奠定了基础。 展开更多
关键词 人前列腺干细胞抗原 单克隆抗体 可变区序列 5'race
下载PDF
不同方法制备的RNA模板对杜仲肉桂醇脱氢酶基因5'-RACE扩增的影响
10
作者 李晓毓 《黄山学院学报》 2008年第5期64-65,共2页
比较研究了分别以Trizol、改良CTAB法和热硼酸盐法制备的杜仲叶片RNA为模板进行肉桂醇脱氢酶基因5'末端扩增的不同效果。实验发现以改良CTAB法提取的RNA做模板时,得到的5'RACE产物特异性强,条带亮而清晰,效果最好。
关键词 RNA制备 改良CTAB法 5′-race
下载PDF
马铃薯低温响应的ScmiR390-5p及其靶基因表达与结构分析 被引量:5
11
作者 谢洁 王明 +4 位作者 丁红映 李青 王万兴 熊兴耀 秦玉芝 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期2295-2308,共14页
【目的】研究马铃薯富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat receptor-like protein kinase LRR-RLK)类受体蛋白激酶基因SCLRRK1受miR390(ScmiR390-5p)调控响应非生物胁迫的机理。【方法】通过低温响应马铃薯miRNA测序分析与靶基因预测... 【目的】研究马铃薯富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat receptor-like protein kinase LRR-RLK)类受体蛋白激酶基因SCLRRK1受miR390(ScmiR390-5p)调控响应非生物胁迫的机理。【方法】通过低温响应马铃薯miRNA测序分析与靶基因预测,发现ScmiR390-5p通过调控1个可能的LRR类受体蛋白激酶基因对低温做出响应;利用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)验证ScmiR390-5p和SCLRRK1响应低温胁迫的表达情况;利用RLM-5′RACE确定ScmiR390-5p作用于SCLRRK1的切割位点;利用PCR技术克隆得到SCLRRK1的DNA序列和CDS序列,生物信息学分析SCLRRK1的结构和功能;利用RT-qPCR分析ScmiR390-5p/SCLRRK1在马铃薯各组织中的表达情况及其响应各种非生物胁迫的表达情况。【结果】RT-qPCR结果表明,低温诱导ScmiR390-5p表达,SCLRRK1的表达则受到低温的抑制,ScmiR390-5p和SCLRRK1的表达在低温胁迫下呈负相关性;RLM-5′RACE分析表明,ScmiR390-5p作用于SCLRRK1的切割位点是ATTCCT//CCTGAGTT,马铃薯ScmiR390-5p/SCLRRK1调控模块在低温响应中起作用。克隆结果表明SCLRRK1的CDS序列长度为2 685bp,编码894个氨基酸,DNA序列长度为3 549 bp,含有1个内含子、2个外显子、3′非编码区和5′非编码区,ScmiR390-5p的靶位点位于SCLRRK1 CDS序列内部(960—981 bp,GGAACTATTCCTCCTGAGTTT)。生物信息学显示SCLRRK1是1个富含亮氨酸重复序列(leucine-richrepeat,LRR)的类受体蛋白激酶基因,编码的蛋白属于跨膜分泌蛋白。马铃薯组织表达RT-qPCR分析显示,ScmiR390-5p在叶中的表达量最高,根次之,茎中(地上茎、块茎和匍匐茎)表达量较低;而SCLRRK1的表达情况与ScmiR390-5p相反,其在叶中的表达最低,在茎中表达最高(匍匐茎>块茎>地上茎)。多种非生物胁迫结果显示,ScmiR390-5p和SCLRRK1表达在NaCl胁迫下呈负相关,ScmiR390-5p受到NaCl胁迫诱导表达。与对照相比,ABA和6-BA处理下ScmiR390-5p表达先下降之后呈波浪小幅回调;6-BA处理下SCLRRK1表达持续升高,ABA处理下SCLRRK1表达先上升后下降。GA3、PEG和IAA处理8 h时,ScmiR390-5p的表达达到峰值,GA3、PEG和IAA处理都能诱导SCLRRK1表达,但其变化趋势与ScmiR390-5p相关性不强。【结论】SCLRRK1具备编码LRR类受体蛋白激酶的核酸、氨基酸序列和结构基础,是ScmiR390-5p的靶基因;ScmiR390-5p/SCLRRK1调控模块在马铃薯组织器官中具备明显作用;ScmiR390-5p在转录后水平通过抑制马铃薯SCLRRK1的表达对低温胁迫做出响应,同时,马铃薯ScmiR390-5p/SCLRRK1调控模块在NaCl和6-BA胁迫响应中起作用,但不对ABA、GA3、IAA和PEG胁迫做出响应,ScmiR390-5p和SCLRRK1分别在转录水平受到ABA、GA3、IAA和PEG胁迫信号调控。 展开更多
关键词 马铃薯 ScmiR390-5p SCLRRK1 实时荧光定量PCR rlm-5′race
下载PDF
葡萄microRNA156b和microRNA172c及其靶基因在冬芽二次成花过程中的表达特性研究 被引量:4
12
作者 王晨 张演义 +3 位作者 房经贵 宋长年 刘洪 王西成 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期59-64,共6页
利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用R... 利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用RLM-5'-RACE验证了miRNAs作用其靶基因的方式。结果表明:仅5月28日摘心处理的冬芽能够进行花芽分化并形成花序,而其他处理及对照未能花芽分化。2种RT-PCR检测结果基本一致,5月28日摘心处理的2条miRNAs表达水平明显下降,且花序中有最低表达。相应的靶基因在冬芽二次成花过程中的表达水平呈现出与其miRNAs相反的变化趋势。RLM-5'-RACE结果显示,2条miRNAs介导靶基因裂解,裂解位点均在miRNAs 5'端的第10和11位碱基之间。表明microRNA156b和microRNA172c通过介导相应靶基因的裂解调控其靶基因的表达,从而影响葡萄冬芽的二次成花。 展开更多
关键词 葡萄 microRNAs 靶基因 冬芽 实时荧光定量RT-PCR rlm-5'-race
下载PDF
茶树类黄酮3’,5’-羟化酶在大肠杆菌的表达和优化 被引量:4
13
作者 陈啸天 高丽萍 +3 位作者 赵磊 刘亚军 王云生 夏涛 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期707-713,共7页
儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基... 儿茶素是茶叶主要特征和功能成分之一,其中B环三羟基儿茶素约占儿茶素总量的65%以上。类黄酮3’,5’-羟化酶是类黄酮合成中B环5’羟基化的唯一酶系,与B环三羟基儿茶素合成积累密切相关。采用RACE技术,克隆了茶树类黄酮3’,5’-羟化酶基因的1 944 bp的全长序列,开放阅读框区域为55~1 587 bp,编码510个氨基酸,推测其分子量为57.1 kDa,等电点为9.06。该基因重组至pET-32a(+)表达载体上,在大肠杆菌Rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中温度诱导条件;利用钴离子吸附柱纯化了目的蛋白。该研究为开展F3’5’H酶的反应动力学、酶的器官组织定位等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 类黄酮3’ 5’-羟化酶 race 原核表达
下载PDF
人肝刺激因子基因5′-侧翼序列克隆和结构分析 被引量:3
14
作者 王新楠 宋智刚 +3 位作者 吴媛 陈莉 赵彦艳 安威 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1171-1176,共6页
为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定... 为探讨人肝刺激因子 (humanhepaticstimulatorsubstance ,hHSS)基因表达调控的分子机制 ,分离人了hHSS基因组DNA ,克隆其 5′ 侧翼序列 4 890bp ,与GenBank比对后 ,将hHSS基因定位于人 16号染色体。通过逆转录PCR(RT PCR)和 5′RACE确定hHSS基因转录起始位点 。 展开更多
关键词 hHSS 5′-侧翼序列 5′race 基因转录
下载PDF
石榴果肉PgF3′5′H基因克隆及不同温度处理下的表达分析 被引量:4
15
作者 关晓弯 陈磊 +1 位作者 涂佳丽 张水明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期435-443,共9页
为探讨不同温度处理对采后石榴果肉花青苷含量的影响及花青苷合成相关基因(F3′5′H)在石榴果肉花青苷生物合成途径中的作用,该研究以"玉石籽"石榴为试材,于不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理下测定石榴果肉花青苷含量,同时利用... 为探讨不同温度处理对采后石榴果肉花青苷含量的影响及花青苷合成相关基因(F3′5′H)在石榴果肉花青苷生物合成途径中的作用,该研究以"玉石籽"石榴为试材,于不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理下测定石榴果肉花青苷含量,同时利用RACE技术克隆了石榴果肉花青苷合成相关基因,命名为PgF3′5′H,GenBank登录号为KU058892;并利用RT-PCR技术分析PgF3′5′H基因在不同贮期温度下石榴果肉中的表达特性。结果表明:(1)不同温度处理下,石榴果肉花青苷含量随着贮藏时间(0~56d)的增长呈上升趋势;在整个贮藏过程中,15℃条件下,花青苷含量最高,10℃次之,5℃和0℃则处于较低水平;15℃时花青苷含量在14d后表现不稳定。(2)PgF3′5′H基因全长cDNA为1 199bp,开放阅读框918bp,编码305个氨基酸,在N端36~39处含有细胞色素P450家族基因的特征保守氨基酸序列(CYP基序"PPGP");生物信息学分析表明,该基因编码的氨基酸序列与巨桉的EgF3′5′H2、麻风树的JcF3′5′H2和荷花的NnF3′5′H2氨基酸序列一致性分别高达86%、82%和81%。(3)在0℃、5℃、10℃处理条件下,石榴果肉PgF3′5′H基因表达量随着贮藏时间(0~56d)的延长均呈上升趋势,15℃处理下,石榴果肉PgF3′5′H基因表达量不稳定;石榴果肉PgF3′5′H基因表达与花青苷含量呈显著正相关关系。研究结果为深入探讨采后石榴果肉花青苷的含量变化奠定了基础。 展开更多
关键词 石榴果肉 花青苷 温度 PgF3′5′H race RT-PCR
下载PDF
骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因全序列RACE扩增方法的建立 被引量:2
16
作者 唐博 曹贵方 +1 位作者 杨银凤 王秀梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期151-156,共6页
为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 c... 为获得骆驼β-防御素基因(caBD-1 cDNA)的全长序列,采用锚定PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素基因的部分已知序列,设计了1条特异性引物作为上游引物,将反转录引物中的部分序列即3′接合器引物作为下游引物,成功地克隆了caBD-1 cDNA的3′末端序列;采用反向嵌套PCR RACE技术,根据已获得的骆驼β-防御素cDNA的部分序列,设计了1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地克隆了骆驼β-防御素caBD-1cDNA的5′末端序列。结果显示,获得了骆驼β-防御素caBD-1 cDNA基因的全序列。证实,RACE技术用于防御素基因的扩增是可行的。 展开更多
关键词 Β-防御素 3’race 5race 锚定PCR 反向嵌套PCR 骆驼
下载PDF
猪ApoA5基因cDNA的克隆、序列分析及组织表达研究 被引量:4
17
作者 李步高 郭晓红 +4 位作者 曹果清 高鹏飞 王效京 刘宏 周忠孝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期913-920,共8页
旨在克隆猪ApoA5基因cDNA全序列,并对其进行序列分析,研究该基因的组织表达规律。试验以山西马身猪肝脏组织为材料,采用RT-PCR与RACE技术,对猪ApoA5基因的cDNA进行克隆,并对其进行了生物信息学分析。采用荧光定量PCR检测并分析了ApoA5m... 旨在克隆猪ApoA5基因cDNA全序列,并对其进行序列分析,研究该基因的组织表达规律。试验以山西马身猪肝脏组织为材料,采用RT-PCR与RACE技术,对猪ApoA5基因的cDNA进行克隆,并对其进行了生物信息学分析。采用荧光定量PCR检测并分析了ApoA5mRNA在2个猪种(马身猪和大白猪)中多个组织的表达规律。结果表明:猪ApoA5基因cDNA全长1 917bp,包括1 092bp的开放阅读框(ORF),24bp的3′-UTR和801bp的5′-UTR;编码区(CDS)共编码364个氨基酸,与牛、马、人、犬、猴、兔、褐鼠和小鼠氨基酸序列的同源性分别为81.7%、80.0%、78.3%、77.5%、76.5%、73.6%、67.1%和66.7%;ApoA5mRNA除了在肺脏和脾脏中未检测到外,在其他8种组织中均有表达,其中在肝脏组织中高丰度表达,在皮下脂肪与背最长肌中中等表达,低量表达于小肠、肾脏、心脏、胰脏和胃,并且在皮下脂肪与背最长肌中ApoA5mRNA的表达量存在显著的品种差异。猪ApoA5基因在动物进化中比较保守,ApoA5mRNA的表达量受到组织和品种影响,推测ApoA5基因对脂肪沉积性状有一定的影响。 展开更多
关键词 ApoA5基因 克隆 race 序列分析 组织表达
下载PDF
柽柳翻译起始因子(eIF-5A)基因的克隆及原核表达 被引量:8
18
作者 杨传平 姜静 +2 位作者 田梗 王玉成 刘桂丰 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期433-438,共6页
根据柽柳cDNA文库中获得的eIF-5A基因片段,用RACE技术克隆出其全长cDNA序列。cDNA长度为799bp,编码159个氨基酸。将该cDNA序列克隆到原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-eIF5A。不同浓度NaCl胁迫下大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(... 根据柽柳cDNA文库中获得的eIF-5A基因片段,用RACE技术克隆出其全长cDNA序列。cDNA长度为799bp,编码159个氨基酸。将该cDNA序列克隆到原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-eIF5A。不同浓度NaCl胁迫下大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(pET28a-eIF5A)比E.coliBL21(pET28a)有明显的抗盐性,前者菌株存活率在1.0mol·L-1NaCl盐胁迫下是后者的9.3倍,据此认为E.coliBL21(pET28a-eIF5A)的耐盐性可能与eIF-5A基因的表达相关。该基因的GenBank登录号为AY587771(基因)、AAT01416(蛋白)。 展开更多
关键词 柽柳 race EIF-5A 原核表达 耐盐 原核表达载体 基因片段 克隆 翻译起始 全长CDNA序列
下载PDF
朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端序列的克隆及植物表达载体的构建 被引量:1
19
作者 王磊 钟鸣 +4 位作者 郭志富 张丽 张佳 赵莉 李浩戈 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期30-34,共5页
采用改良的RT-PCR及5′RACE法,成功地克隆了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA 5′端序列,与已知序列拼接,获得了BADHcDNA全长1781bp,包含一个完整的开放阅读框(ORF),编码506个氨基酸。其含有醛脱氢酶高度保守序列VT/SLELGGKSP,及其... 采用改良的RT-PCR及5′RACE法,成功地克隆了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA 5′端序列,与已知序列拼接,获得了BADHcDNA全长1781bp,包含一个完整的开放阅读框(ORF),编码506个氨基酸。其含有醛脱氢酶高度保守序列VT/SLELGGKSP,及其后29位与酶功能有关的Cys。多序列比对和系统进化分析表明,朝鲜碱茅BADH与大麦BBD1同源性最高,并构建了PBI121-BADH植物表达载体。 展开更多
关键词 朝鲜碱茅 甜菜碱醛脱氢酶 5race 高GC 表达载体
下载PDF
红麻Ms5基因的克隆及多转录本分析 被引量:3
20
作者 唐向民 金刚 +3 位作者 李刚 周琼 陈鹏 周瑞阳 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期536-540,共5页
为研究Ms5基因在红麻(Hibiscus canabius L.)花药中的转录特征,以L23A不育系为试材,基于已知的红麻Ms5基因5′端cDNA序列,采用3′RACE和RT-PCR技术对该基因全长cDNA序列进行克隆。序列比对分析结果表明,红麻花药组织中同时存在Ms5基因2... 为研究Ms5基因在红麻(Hibiscus canabius L.)花药中的转录特征,以L23A不育系为试材,基于已知的红麻Ms5基因5′端cDNA序列,采用3′RACE和RT-PCR技术对该基因全长cDNA序列进行克隆。序列比对分析结果表明,红麻花药组织中同时存在Ms5基因2种不同的转录本,其长度分别为972和1 105bp,依次命名为HcMs5-α和HcMs5-β。这2种转录本均包含了完整且一致的编码序列,其编码序列(CDS)全长为858bp,预测编码的蛋白质含有285个氨基酸残基,分子质量为32.4ku,理论等电点为7.62;两者5′端前972bp序列完全一致,但3′端的非编码区(UTR)长度有所不同,HcMs5-β在第972bp以后比HcMs5-α多出133bp的序列,具有选择性转录终止的特征。这种转录终止信号的可选择性可能与该基因转录后水平的调控有关。 展开更多
关键词 红麻 Ms5基因 3′race 多转录本 选择性转录终止
下载PDF
上一页 1 2 5 下一页 到第
使用帮助 返回顶部