ZNF205通过靶向RIG-I正调控RLR抗病毒信号通路

目的探究ZNF205(zinc finger protein 205)对RIG-I(retinoic acid-inducible gene I)介导的RLR(RIG-I like receptors,RLRs)抗病毒信号通路的影响。方法采用免疫共沉淀、免疫印迹、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、双荧光素酶报告基因实验、实时荧光定量PCR、病毒空斑等实验探索ZNF205在RLRs信号通路中的作用。结果ZNF205与RIG-I相互作用。过表达ZNF205促进了SeV诱导的IRF3(interferon regulatory factor 3)的二聚化,也增强了RIG-I-N(aa1-284)介导或SeV诱导的IFN-β(interferon beta)启动子的活性,同时还增强了SeV诱导的IFN-β的转录。病毒空斑实验结果显示过表达ZNF205能够抑制病毒的复制。研究结果还表明,ZNF205促进RIG-I的泛素化修饰以及RIG-I的K63泛素化修饰。结论ZNF205在RLR抗病毒先天免疫信号通路中起正调控作用。

非洲猪瘟病毒拮抗宿主cGAS-STING信号通路的研究进展

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)拥有多种逃逸宿主免疫应答的策略,造成病毒难以被宿主清除。cGAS-STING信号通路介导的天然免疫在抗ASFV感染中发挥了重要作用,然而病毒编码的多个蛋白靶向该通路中的不同分子以拮抗宿主的I型干扰素应答。利用基因编辑技术敲除这些病毒基因后,ASFV对宿主的致病性降低,成为基因缺失疫苗的研制潜在靶点。本文对目前已知参与调控宿主cGAS-STING信号通路的病毒蛋白进行总结,旨在阐明这些蛋白免疫逃逸cGAS-STING信号通路的分子机制,加深对ASFV免疫逃逸策略的理解,以期为ASFV致病机制研究与疫苗创制提供参考。

Notch信号通路在成人EB病毒感染所致传染性单核细胞增多症中的作用

目的:观察成人传染性单核细胞增多症(IM)患者Notch信号通路分子和Th22细胞的变化,检测抑制Notch信号通路对Th22细胞的调控作用。方法:纳入42例IM患者和21例健康对照者,采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞,酶联免疫吸附试验检测血浆白细胞介素(IL)-17和IL-22水平,流式细胞术检测CD3+CD4+IL-17+Th17细胞和CD3+CD4+IL-22+Th22细胞比例,实时定量PCR法检测Th17转录因子维甲酸相关孤独核受体γt(RORγt)、Th22转录因子芳香烃受体(AhR)及Notch信号通路分子(包括Notch受体、Notch配体、Notch下游分子)mRNA相对表达量。纯化CD4+T细胞,使用γ-分泌酶抑制剂(GSI)刺激培养,检测GSI刺激后细胞增殖、Th17和Th22细胞比例、IL-17和IL-22分泌、转录因子mRNA相对表达量变化。结果:IM组外周血单个核细胞中Notch1和Notch2 mRNA的相对表达量分别为13.58±3.18、4.73±1.16,均明显高于对照组的1.09±0.12、1.07±0.15(均P<0.001),而Notch3和Notch4 mRNA相对表达量在IM组和对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。IM组Notch配体DLL1和Jagged1 mRNA相对表达量、Notch信号下游分子Hes1、Hes5和Hey1 mRNA相对表达量均高于对照组(均P<0.001)。IM患者Th17和Th22细胞比例分别为5.03%±1.15%、4.48%±1.29%,均高于对照组的4.36%±0.82%、3.83%±0.55%(均P<0.05);血浆IL-17和IL-22水平分别为(301.1±53.82)pg/ml、(101.2±16.45)pg/ml,均高于对照组的(237.2±72.18)pg/ml、(84.75±11.83)pg/ml(均P<0.001);RORγt和AhR mRNA相对表达量分别为1.25±0.22、1.21±0.12,均高于对照组的0.99±0.15、1.04±0.11(均P<0.001)。CD4+T细胞增殖水平、Th17细胞比例、IL-17分泌和RORγt mRNA相对表达量在无GSI刺激组和经GSI刺激组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。经GSI刺激后Th22细胞比例、IL-22分泌和AhR mRNA相对表达量较无GSI刺激降低(均P<0.05)。结论:Notch信号通路通过AhR调控IM患者CD4+T细胞分泌IL-22,Notch-AhR-Th22细胞通路可能参与IM发病。

TGFβ1/Smads信号通路抗纤维化抑制心室重构及红花黄色素干预作用的研究

目的 研究红花黄色素对心肌梗死后的心室重构及TGFβ1/Smads信号通路的影响。方法 结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,假手术组开胸显露左冠状动脉前降支但不行结扎。建模成功大鼠随机分为模型组,红花黄色素高、中、低剂量组,氯沙坦组,给药4周。观察心脏形态结构变化;分析血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)含量变化;Westem blot检测心肌组织转化生长因子β1(TGFβ1)、SMAD2/3、P-SMAD2/3蛋白表达量。结果 与假手术组比较,模型组心脏体积变大,梗死区面积大,左室壁凹陷,变薄;与模型组比较,给药组左心室壁没有明显凹陷,梗死区范围和体积变小;血清MDA降低,SOD、GSH-Px和CAT活性增强(P<0.05);与模型组比较,给药组心肌组织TGFβ1及SMAD2/3蛋白表达下降(P<0.05)。结论 红花黄色素能够减轻心室重构,缓解氧化应激,可能是通过抑制TGFβ1/Smads信号通路而实现。

薏苡附子败酱散通过抗三结构域蛋白21-Toll样受体4-t-核因子-κB信号通路对类风湿关节炎MH7A细胞的影响

目的观察不同浓度薏苡附子败酱散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡及炎症反应的影响,探究其作用机制。方法2022年2―8月,大鼠用不同浓度薏苡附子败酱散及蒸馏水灌胃制备含药血清;20μg/L的TNF-α处理的MH7A细胞记为TNF-α组,TNF-α+含药血清处理的MH7A细胞记为薏苡附子败酱散低浓度组、薏苡附子败酱散中浓度组、薏苡附子败酱散高浓度组,正常培养的MH7A细胞标记为对照组。细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞的存活、凋亡及白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ;蛋白质印迹法(WB)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、抗三结构域蛋白21(TRIM21)、Toll样受体4(TLR4)、t-核因子(NF)-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、p-NF-κB抑制因子(IκB)-α和t-IκB-α蛋白表达。pcDNA 3.1组(转染空载体)、pcDNA+TRIM21组(转染pcDNA 3.1+TRIM21)、薏苡附子败酱散中浓度+si-con组(转染si-con+4.70 g/kg含药血清)、薏苡附子败酱散中浓度+si-TRIM21组(转染si-TRIM21+4.70 g/kg含药血清)。结果与对照组相比,TNF-α组细胞存活率(105.07±1.90比185.67±3.06)、TRIM21(0.56±0.02比0.68±0.04)、MMP-3(0.18±0.00比0.63±0.02)、MMP-9(0.39±0.01比0.82±0.01)、TLR4(0.25±0.02比0.68±0.07)、p-NF-κB p65(0.24±0.01比0.68±0.06)、p-IκB-α(0.22±0.01比0.55±0.04)蛋白表达和IL-1β(31.65±0.66比101.93±0.60)、IFN-γ(8.53±0.16比63.76±1.35)含量均显著升高,凋亡率(6.54±0.06比1.17±0.08)均显著降低;与TNF-α组相比,薏苡附子败酱散低浓度组(185.67±3.06比153.77±3.09;0.68±0.04比0.37±0.02;0.63±0.02比0.47±0.02;0.82±0.01比0.73±0.01;103.2±0.7比92.93±0.85;66.3±1.45比54.47±1.46;0.68±0.07比0.53±0.05;0.68±0.06比0.53±0.06;0.55±0.04比0.47±0.01;1.84±0.07比6.67±0.28)、薏苡附子败酱散中浓度组(185.67±3.06比136.23±1.57;0.68±0.04比0.57±0.02;0.63±0.02比0.37±0.02;0.82±0.01比0.57±0.00;103.2±0.7比86.4±0.75;66.3±1.45比38.1±0.92;0.68±0.07比0.43±0.07;0.68±0.06比0.59±0.01;0.55±0.04比0.40±0.03;1.84±0.07比9.59±0.29)、薏苡附子败酱散高浓度组(185.67±3.06比143.47±1.50;0.68±0.04比0.47±0.02;0.63±0.02比0.41±0.05;0.82±0.01比0.62±0.00;103.2±0.7比89.63±0.42;66.3±1.45比40.17±0.90;0.68±0.07比0.51±0.06;0.68±0.06比0.69±0.07;0.55±0.04比0.41±0.02;1.84±0.07比8.89±0.08)细胞存活率、TRIM21、MMP-3、MMP-9蛋白和IL-1β、IFN-γ含量及TLR4、p-NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达均显著降低,凋亡率均显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA+TRIM21组细胞TRIM21蛋白表达(0.24±0.03比0.51±0.04)、细胞凋亡率(1.61±0.11比12.43±0.61)均显著升高,MMP-3(0.64±0.02比0.41±0.04)、MMP-9(0.82±0.03比0.45±0.02)、IL-1β(110.63±0.55比90.93±0.60)、IFN-γ(64.5±0.82比48.1±1.25)及细胞存活率(179.03±0.74比120.07±0.60)均显著降低;敲减TRIM21显著抑制薏苡附子败酱散中浓度对损伤细胞的治疗作用且显著升高TLR4(0.45±0.06比0.61±0.02)、p-NF-κB p65(0.49±0.02比0.56±0.02)、p-IκB-α(0.38±0.01比0.62±0.01)的蛋白表达。结论薏苡附子败酱散增强TNF-α诱导的MH7A细胞的生存能力,其作用机制与上调TRIM21抑制TLR4-NF-κB信号通路活性有关。

半枝莲抗肿瘤的信号通路研究进展

半枝莲在中国药用历史悠久,经现代研究证实含有黄酮类、多糖类、二萜类等多种抗肿瘤有效成分。梳理近年来半枝莲及其活性成分靶向肿瘤的各个信号通路的相关文献发现,半枝莲及其活性成分通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)、Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-cate-nin)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)途径、核因子-κB(NF-κB)、蛋白53(p53)和Hedgehog等多条信号通路,发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、降低迁移和侵袭能力、抗肿瘤血管形成、调节机体的免疫功能等作用,达到抗肿瘤效应。广泛应用于结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤疾病的治疗。研究以细胞信号通路为切入点,总结半枝莲抗肿瘤的作用机制,以期为深入挖掘半枝莲抗肿瘤机制及其临床应用提供参考。

Rho A-Rock 1信号通路对传染性脾肾坏死病毒感染的调控及作用

【目的】探究传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)复制增殖与Rho A-Rock 1通路的关系。【方法】采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ISKNV感染CPB细胞12,24,48,72和96 h后病毒DNA拷贝数的变化;同时采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹方法检测病毒感染CPB细胞12,24,48和72 h后Rho A与Rock 1转录及蛋白表达水平的变化;通过Rho A抑制剂(CCG-1423和Rhosin)、Rock 1抑制剂(Thiazovivin和Y-27632)及siRNA抑制Rho A-Rock 1通路,研究Rho A-Rock 1通路抑制对ISKNV复制增殖的影响。【结果】ISKNV感染12~48 h,病毒的DNA拷贝数无显著变化,感染72 h病毒DNA拷贝数显著上升,感染96 h病毒的拷贝数上升变缓,说明ISKNV感染72 h时病毒正处于复制增殖的高峰期。RT-qPCR及蛋白免疫印迹结果表明,ISKNV感染72 h时,Rho A和Rock 1 mRNA转录水平和蛋白水平均显著上调。Rho A抑制剂Rhosin和CCG-1423及Rock 1抑制剂Y-27632和Thiazovivin均可使ISKNV基因组拷贝数和病变的CPB细胞数显著下调;利用siRNA敲降Rho A和Rock 1时,ISKNV的基因组拷贝数也显著下调。【结论】Rho A-Rock 1信号通路可正调控ISKNV的感染,抑制Rho A-Rock 1通路可显著抑制ISKNV复制增殖。

延胡索通过靶向CXCL17激活AMPK信号通路下调PD-L1抑制EB病毒感染诱导的胃癌免疫逃逸

目的探讨延胡索对EB病毒(EBV)阳性胃癌细胞免疫逃逸的作用及其靶向CXCL17影响EBV阳性胃癌细胞免疫逃逸的机制。方法GEO2R在线分析软件筛选EBV阳性胃癌组织中的差异表达基因。采用EBV阴性胃癌AGS细胞和EBV阳性胃癌SUN-719细胞进行实验。实时qPCR和Western blotting检测EBV阴性和EBV阳性胃癌细胞中CXCL17表达。将CXCL17 siRNA转染EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞PD-L1表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。用延胡索提取物(2、4、8μg/mL)处理EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞CXCL17和PD-L1表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将CXCL17过表达质粒转染延胡索提取物(8μg/mL)处理的EBV阳性胃癌细胞,Western blotting检测细胞PD-L1和p-AMPK表达;将EBV阳性胃癌细胞与T细胞共培养,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CXCL17在EBV阳性胃癌组织和细胞中表达上调(P<0.05)。沉默CXCL17降低EBV阳性胃癌细胞PD-L1表达,抑制与T细胞共培养的EBV阳性胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05)。延胡索处理降低EBV阳性胃癌细胞CXCL17和PD-L1表达,抑制与T细胞共培养的EBV阳性胃癌细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05);过表达CXCL17逆转了延胡索处理对EBV阳性胃癌细胞PD-L1表达和细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的促进作用(P<0.05);过表达CXCL17还降低了延胡索处理的EBV阳性胃癌细胞p-AMPK表达(P<0.05)。结论CXCL17在EBV阳性胃癌细胞中表达上调,延胡索通过下调EBV阳性胃癌细胞CXCL17表达抑制胃癌细胞免疫逃逸,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。

苦参碱调控PI3K/AKT信号通路对呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部炎症的作用机制研究

目的:基于PI3K/AKT信号通路观察苦参碱对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠的保护作用机制。方法:采用RSV病毒悬液滴鼻感染C57BL/6J小鼠建立模型。实验分为3组:对照组、RSV组、RSV+苦参碱组,每组10只。苏木精—伊红(HE)染色及Masson染色法观察小鼠肺组织病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠肺泡灌洗液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平,蛋白免疫印迹(western blotting)检测肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达,免疫组化检测肺组织Bax、Caspase-3、PI3K、AKT表达。结果:与对照组比较,RSV组可见明显肺水肿,肺组织细胞呈现染色体聚集,核膜收缩,出现显著的肺部病变症状,同时,肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平上升,Bax和Caspase-3表达水平升高,Bcl-2、P-PI3K、P-AKT表达水平降低(均P<0.05)。与RSV组相比,RSV+苦参碱组小鼠肺水肿显著缓解,肺部病变症状显著减轻,肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平显著降低,Bcl-2、PPI3K、P-AKT表达显著升高(均P<0.05)。结论:苦参碱可抑制RSV导致的小鼠肺部炎症反应,促进肺组织细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

辣蓼黄酮通过调控核因子E2相关因子2信号通路及组蛋白乙酰化缓解伪狂犬病毒感染小鼠诱导的脾脏和肺脏氧化应激

本研究通过探索辣蓼黄酮对核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路及组蛋白乙酰化的调控效果,以阐明辣蓼黄酮干预伪狂犬病毒(PRV)感染小鼠诱导氧化应激的分子机制。将60只无特定病原体(SPF)级昆明种小鼠,随机分为6个组(每组10只小鼠),即空白对照组、PRV组、维生素C(VC)组(灌服100 mg/kg BW VC)及辣蓼黄酮高、中、低剂量组(灌服200、100和50 mg/kg BW辣蓼黄酮混悬液),各组灌服量均为0.2 mL。PRV感染小鼠7 d后,通过荧光定量PCR测定小鼠脾脏和肺脏组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、依赖还原型辅酶Ⅰ(Ⅱ)醌氧化还原酶1(NQO1)、乙酰转移酶(HAT)和去乙酰转移酶(HDAC)的mRNA表达水平;通过免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western Blot)测定iNOS、Nrf2、HO-1、NQO1、乙酰化组蛋白H3(AcH3)和乙酰化组蛋白H4(AcH4)的蛋白表达水平。结果表明:与空白对照组相比,PRV组脾脏组织中iNOS、HAT的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),脾脏组织中HO-1、HDAC的mRNA表达水平极显著降低(P<0.01);PRV组肺脏组织中iNOS、Nrf2、HO-1、NQO1、HAT的mRNA表达水平和iNOS、Nrf2、AcH3的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),肺脏组织中AcH4的蛋白表达水平极显著降低(P<0.01)。与PRV组相比,辣蓼黄酮高、中、低剂量组脾脏组织中Nrf2、HO-1和HDAC的mRNA表达水平和AcH4的蛋白表达水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),脾脏组织中HAT的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01);辣蓼黄酮高、中、低剂量组肺脏组织中iNOS的mRNA表达水平和AcH3的蛋白表达水平显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01),肺脏组织中AcH4的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。由此可见,辣蓼黄酮对Nrf2信号通路和组蛋白乙酰化修饰具有调控作用,且其通过该调控作用缓解PRV感染小鼠脾脏和肺脏诱导的氧化应激。

紫云英苷抗肿瘤作用相关信号通路的研究进展

紫云英苷是一种天然的类黄酮,以抗肿瘤等多样化的药理应用而闻名。研究发现紫云英苷具有巨大的抗肿瘤潜力,通过调节PI3K/Akt信号通路、MAPKs信号通路、JAK/STAT信号通路、NF-κB信号通路、Notch1通路、microRNA的表达、肿瘤侵袭和转移等诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤的增殖、侵袭和迁移。本文综述了近年来紫云英苷有关抗肿瘤信号通路的文献报道,分析并总结了每一条通路诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制,以期为紫云英苷在抗肿瘤信号通路的开发和利用提供实验和理论依据。

血流限制抗阻训练通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路减轻2型糖尿病大鼠肾纤维化

目的:探究血流限制抗阻训练对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾纤维化的影响及其通过抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad家族成员3(Smad3)信号通路减轻肾纤维化的潜在机制。方法:采用高脂饲料和链脲佐菌素(STZ)联合制备大鼠T2DM模型,造模成功后随机分为T2DM对照(CON,n=5)组、低负荷抗阻训练(LRT,n=5)组、高负荷抗阻训练(HRT,n=5)组、血流限制(BFR,n=5)组和血流限制抗阻训练(BFRT,n=5)组,进行为期8周的运动训练。记录各组大鼠肾脏指数、空腹血糖(FBG)、血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;通过HE和Masson染色观察肾脏形态学变化,并计算胶原容积分数(CVF);RT-qPCR检测肾脏组织中Klotho、TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot检测肾脏组织中Klotho、TGF-β1、Smad3、磷酸化Smad3(p-Smad3)、α-SMA和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平。结果:对比其他各组,血流限制抗阻训练组大鼠FBG、SCr、BUN和肾脏CVF显著下降(P<0.05),Klotho表达水平显著上升(P<0.05),TGF-β1、p-Smad3、CTGF和α-SMA表达水平显著下降(P<0.05),Smad3表达水平无显著变化(P>0.05)。结论:血流限制抗阻训练可减轻T2DM大鼠肾纤维化程度,其机制可能与上调Klotho表达,阻断TGF-β1/Smad3信号通路,从而抑制细胞外基质的沉积有关。

抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2/C-C基序趋化因子受体2信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究

目的 探讨乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2(CCL2)/C-C基序趋化因子受体2(CCR2)信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究。方法 研究起止时间为2021年12月至2022年10月。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测2.5、5.0、10.0、20.0、30.0μmol/L乌头碱处理后的人膀胱癌5637细胞存活率,筛选出合适的乌头碱作用浓度。将5637细胞分为对照组、乌头碱低剂量(10μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+空载组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+CCL2过表达组,分组处理后,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Edu)染色法及Hoechst 33258染色分别检测各组5637细胞存活率、增殖率、凋亡率;采用Transwell实验及划痕实验分别检测各组5637细胞侵袭数、迁移率;采用免疫荧光染色检测各组5637细胞凋亡相关蛋白BCL2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达比值(Bax/Bcl-2);采用免疫印迹法检测各组5637细胞CCL2/CCR2信号通路相关蛋白及上皮间质转化标志蛋白[神经钙黏素(N-cadherin)、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)、紧密连接蛋白1(ZO-1)、上皮钙黏素(E-cadherin)]表达。结果 与对照组相比,乌头碱低剂量组、乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2(0.69±0.09、0.20±0.03、0.19±0.04比1.21±0.13),CCR2(0.78±0.12、0.26±0.06、0.27±0.07比1.33±0.20)、Ncadherin(0.65±0.06、0.12±0.02、0.11±0.03比1.24±0.12)与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率均降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率相比乌头碱低剂量组进一步降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与Ecadherin蛋白表达进一步升高(P<0.05)。与乌头碱高剂量组相比,乌头碱高剂量+CCL2过表达组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 乌头碱可通过CCL2/CCR2信号通路而抑制膀胱癌细胞存活、增殖及侵袭和迁移,促使其凋亡。

鸡娃草乙酸乙酯提取物通过NF-κB信号通路对LPS诱导下RAW264.7细胞的抗炎作用研究

目的:观察鸡娃草乙酸乙酯提取物通过NF-κB信号通路对脂多糖(LPS)诱导下RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用。方法:以不同浓度鸡娃草乙酸乙酯提取物作用RAW264.7细胞24 h,分析在LPS刺激下药物对细胞形态变化的影响;CCK-8法检测RAW264.7细胞活力;倒置显微镜观察RAW264.7细胞形态;NO试剂盒检测RAW264.7细胞的NO释放量;ELISA检测细胞TNF-α、IL-6、IL-10的分泌;RT-PCR检测iNOS、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测细胞IκB-α、NF-κB(P65)蛋白表达。结果:与模型组比较,鸡娃草乙酸乙酯提取物高浓度组TNF-α、IL-10分泌显著降低,中、高浓度组NO、IL-6分泌及iNOS、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA和p-IκB-α/IκB-α、p-P65/P65水平显著降低。结论:本研究初步证实了鸡娃草乙酸乙酯提取物可通过NF-κB信号通路减少LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症相关因子的释放而发挥抗炎作用。

抗炎通腑方对脓毒症急性肺损伤大鼠mtDNA-STING-NLRP3信号通路的影响

目的探讨抗炎通腑方对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的影响及作用机制。方法将35只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松(DEX)组、中药(TCM)组和TCM+DEX组,每组7只。分别给予相应药物灌胃、造模。酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中巨噬细胞计数;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测肺组织中干扰素基因刺激因子(STING)、磷酸化干扰素基因刺激因子(P-STING)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白信使核糖核酸(ASC mRNA)和相关蛋白的表达水平。测定肺组织湿/干比(W/D),观察肺组织病理学改变。检测肺组织中巨噬细胞表达情况。结果与正常组比较,各组指标显著升高;与模型组比较,DEX组、TCM组及TCM+DEX组各指标均显著降低。与模型组比较,TCM+DEX组改变最为明显,肺组织损伤改善,W/D值(4.77±0.29 vs.3.78±0.48)及巨噬细胞计数(13.39±2.06 vs.7.09±1.42)均降低(P<0.05),IL-6(152.51±22.27 vs.58.92±13.53)、IL-1β(126.19±10.02 vs.45.69±6.67)、IL-18(59.12±6.31 vs.31.75±4.23)及TNF-α(126.57±8.25 vs.49.59±8.12)水平均降低(P均<0.01),肺组织中线粒体DNA(mtDNA)损伤及释放、P-STING(0.32±0.03 vs.0.16±0.03)、STING mRNA(19.24±2.70 vs.0.32±0.16)、NLRP3 mRNA(20.03±5.06 vs.1.20±0.04)、ASC mRNA(16.96±4.31 vs.3.41±2.52)和相关蛋白的表达均降低(P<0.01)。结论抗炎通腑方可能通过调控mtDNA-STING-NLRP3信号通路减轻脓毒症ALI大鼠的炎症。

呼吸道合胞病毒对上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞自噬和mTOR信号通路基因的影响

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞自噬和mTOR信号通路相关基因的影响。方法 选择2022年11月至2023年12月唐山职业技术学院附属医院收治的145例上呼吸道感染儿童为研究对象,同时纳入同期体检的年龄和性别匹配的健康儿童(n=10)为健康对照组。采集所有儿童鼻咽分泌物标本(NPA),利用RT-PCR进行RSV筛查,通过G(黏附)基因扩增测定RSV毒株的分子特征并进行系统发育分析。利用qRT-PCR检测25例RSV阳性NPA样本(RSV组)和10例健康对照NPA样本(健康对照组)的呼吸道上皮细胞自噬相关基因(BECN1、ATG3、ATG5、NPC1与GABARAP)和mTOR信号通路相关基因(AKT1、mTOR、PDPK1、RICTOR与TSC1)的表达水平。结果 在145份上呼吸道感染儿童NPA样本中,69份(47.6%)为RSV阳性。对31株有代表性的RSV进行循环基因型检测,经BLAST分析,31株RSV均为RSV-A型。通过靶向G基因的胞外域部分,系统发育分析发现31株RSV-A聚类为具有72 bp核苷酸重复的ON1基因型。此外,毒株分别属于谱系1(51.6%),其次是谱系3(29%)和谱系2(19.4%)。RSV组呼吸道上皮细胞中ATG3和NPC1 mRNA表达水平显著高于健康对照组(均P<0.001)。RSV组呼吸道上皮细胞中AKT1、mTOR和TSC1 mRNA表达水平显著低于健康对照组(均P<0.001)。结论 RSV感染可以提高上呼吸道感染儿童呼吸道上皮细胞中自噬相关基因(ATG3和NPC1)的表达,抑制mTOR信号通路相关基因(AKT1、mTOR和TSC1)的表达,进而逃避宿主免疫系统,以实现其在宿主内的生存方式。

基于NF-κB信号通路研究鸡娃草石油醚提取物对LPS诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

目的:观察鸡娃草石油醚提取物(Pm-PE)通过核因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞的抗炎作用。方法:以不同浓度Pm-PE作用于RAW264.7细胞24 h,分析在LPS刺激下药物对细胞形态变化的影响;采用CCK-8法检测不同浓度的Pm-PE对RAW264.7细胞活性的影响;以一氧化氮(NO)试剂盒法检测致RAW264.7炎症细胞的NO释放量;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的分泌;以逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测促炎因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、TNF-α、IL-6和抗炎因子IL-10的mRNA表达情况;以免疫印迹法(Western blot)检测细胞NF-κB p65、IκB-α蛋白的表达。结果:与LPS模型组比较,Pm-PE不同剂量组能剂量依赖性显著降低NO、TNF-α、IL-6的分泌水平和下调iNOS、TNF-α、IL-6 mRNA的表达,同时调节抗炎因子IL-10的表达;Pm-PE中、高剂量组能显著性抑制NF-κB p-p65和p-IκB-α蛋白的相对表达水平。结论:鸡娃草石油醚提取物可通过NF-κB信号通路减少LPS诱导的RAW264.7细胞炎症相关因子的释放,从而发挥抗炎作用。

化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制

目的:研究化痰通腑方通过TGF-β1/Smad3信号通路对脓毒症肺损伤患者抗炎反应及预后的作用机制。方法:本次前瞻性研究的研究对象为80例脓毒症肺损伤患者,研究时间为2019年3月至2022年12月,将研究对象按随机数字表法分为2组各40例。对照组采用基础治疗,研究组在对照组基础治疗上服用化痰通腑方。连续治疗5 d。比较2组疗效情况、入住重症监护室(ICU)时间、机械通气时间,以及根据1个月随访结果记录28 d病死率,比较2组治疗前后脓毒症症状评分、氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))、肺泡动脉氧分压差[Pa(A-a)O_(2)],以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量和Smad3蛋白表达水平。结果:治疗结束后,2组脓毒症症状评分(恶心呕吐评分除外)均低于治疗前(P<0.05),研究组脓毒症症状评分均低于对照组(P<0.05);研究组入住ICU时间和机械通气时间均低于对照组(P<0.05),为期1个月的随访结果显示,2组均无28 d病死病例;研究组治疗总有效率92.50%高于对照组75.00%(P<0.05);治疗结束后,2组PaO_(2)/FiO_(2)均高于治疗前(P<0.05),研究组PaO_(2)/FiO_(2)高于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组Pa(A-a)O2均低于治疗前(P<0.05),研究组Pa(A-a)O_(2)低于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组血清TNF-α、IL-6、IL-8含量均低于治疗前(P<0.05),研究组血清TNF-α、IL-6、IL-8含量均低于对照组(P<0.05);治疗结束后,2组血清TGF-β1含量和Smad3蛋白表达水平均低于治疗前(P<0.05),研究组血清TGF-β1含量和Smad3蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论:化痰通腑方治疗脓毒症肺损伤疗效良好,可改善机体炎症水平和提高预后,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路的表达有关。

禽传染性支气管炎病毒拮抗JAK-STAT信号通路的研究

已有报道显示冠状病毒拮抗干扰素下游JAK-STAT信号通路,然而,关于传染性支气管炎病毒(IBV)对JAK-STAT信号通路的拮抗,鲜有报道。本文通过Western blot试验,证实IBV感染抑制STAT1和STAT2的磷酸化;间接免疫荧光实验证实IBV和nsp15核酸酶活性缺陷型重组病毒rIBV-nsp15-H238A均能抑制STAT1的核转位,说明IBV感染确实拮抗JAK-STAT信号通路,且nsp15核酸酶活性不是必需的。进一步实验证明,IBV编码的核酸内切酶nsp15,能够抑制内源性和外源性的STAT1表达,并且nsp15的核酸酶活性位点及其三聚化能力都是必需的。由于nsp15缺陷型毒株rIBV-nsp15-H238A能够跟野生型IBV一样拮抗JAK-STAT信号通路,推测IBV还编码其他蛋白,作用于JAK-STAT信号通路,需要进一步对病毒蛋白进行筛选和研究。