降低lncRNA-RMRP表达抑制人肺癌细胞系A549的增殖和侵袭

目的探讨抑制线粒体RNA加工核糖核酸内切酶RNA组分(RMRP)表达对人肺癌细胞系A549增殖和侵袭的影响;检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者全血和组织中RMRP表达,比较在不同临床指标表达差异性,以期为NSCLC机制研究提供参考资料。方法收集2016年3月至2021年3年在焦作市人民医院行手术治疗的NSCLC患者122例,同期,在体检中心选取健康者50名作为对照组。RT-qPCR检测全血和组织中RMRP mRNA水平。培养A549细胞分为si-RMRP组、siRNA-NC组和空白组(blank组)。RT-qPCR、CCK-8法和Transwell小室法分别检测细胞中RMRP表达、增殖活性和侵袭细胞数。结果NSCLC患者全血中RMRP相对表达量显著高于对照组(P<0.001);NSCLC组织中RMRP相对表达量高于癌旁组织(P<0.001);低分化、淋巴结转移和TNM分期Ⅲ的NSCLC患者全血和组织中RMRP相对表达量较高分化、未发生淋巴结转化和TNM分期Ⅰ~Ⅱ明显升高(P<0.05);Si-RMRP组细胞中RMRP相对表达量低于空白组(blank组)和siRNA-NC组(P<0.001);相比与blank组和siRNA-NC组,24、48、72和96 h时si-RMRP组细胞吸光度(A)值均降低(P<0.05);Si-RMRP组细胞侵袭数低于blank组和siRNA-NC组(P<0.001)。结论NSCLC患者全血和组织中RMRP相对表达量升高,下调A549细胞中RMRP基因表达可抑制细胞增殖,减少细胞侵袭。

lncRNA RMRP通过JAK/STAT信号通路在子宫内膜癌细胞增殖和凋亡中的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA RMRP(lncRNA RMRP)在子宫内膜癌中的生物学功能及主要分子机制。方法 收集在我院接受手术治疗的30例子宫内膜癌患者的癌组织和癌旁组织标本,RT-qPCR法检测lncRNA RMRP在子宫内膜癌组织和癌旁组织、HESC细胞和HEC-1-A细胞中的表达。体外培养子宫内膜癌细胞系HEC-1-A,将空载体、pcDNA-RMRP、NC-siRNA、RMRPsiRNA、NCmimic、miR-580-3pmimic、pcDNA-RMRP+NCmimic、pcDNA-RMRP+miR-580-3pmimic、RMRP-siRNA+空载体、RMRPsiRNA+pcDNA-JAK2、NC inhibitor、miR-580-3p inhibitor分别转染至HEC-1-A细胞中,作为空载体组、pcDNA-RMRP组、NC-siRNA组、RMRP-siRNA组、NC mimic组、miR-580-3p mimic组、pcDNA-RMRP+NC mimic组、pcDNA-RMRP+miR-580-3p mimic组、RMRP-siRNA+空载体组、RMRP-siRNA+pcDNA-JAK2组、NC inhibitor组、miR-580-3p inhibitor组。RT-qPCR检测lncRNA RMRP、miR-580-3p在细胞中的表达;CCK-8法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-580-3p与lncRNA RMRP、JAK2的靶向互作关系;Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白表达。结果 与癌旁组织相比,lncRNA RMRP在子宫内膜癌组织中均显著高表达(P<0.05)。与HESC细胞比较,lncRNA RMRP在HEC-1-A细胞中的表达显著升高(P<0.05)。pcDNA-RMRP可显著促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,而RMRP-siRNA可显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-580-3p是lncRNA RMRP的下游靶miRNA,lncRNA RMRP可负向调控miR-580-3p的表达。JAK2是miR-580-3p的下游靶基因,miR-580-3p可负向调控JAK2蛋白的表达。pcDNA-RMRP可显著增加细胞中JAK2、p-JAK2和p-STAT3蛋白水平,而pcDNA-RMRP与miR-580-3p mimic共转染后,细胞中JAK2、p-JAK2、p-STAT3蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。RMRP-siRNA可显著降低细胞中JAK2、p-JAK2、p-STAT3蛋白水平,而RMRP-siRNA与pcDNA-JAK2共转染后,细胞中JAK2、p-JAK2、p-STAT3蛋白水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,RMRP-siRNA与pcDNA-JAK2共转染后,细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 敲低lncRNA RMRP通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进细胞凋亡,可能成为子宫内膜癌潜在的治疗靶点。

LncRNA RMRP对LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症因子表达的影响

目的 探讨LncRNA RMRP对LPS诱导的肺泡上皮细胞BEAS-2B凋亡、炎性反应的影响。方法 选取2021年10月-2021年12月正常培养的BEAS-2B细胞为对照组,LPS处理细胞建立炎症损伤模型,并作为LPS组,将RMRP沉默表达载体及其对照载体分别转染正常BEAS-2B细胞,48 h后LPS处理,分别为LPS+SiCON组和LPS+Si-RMRP组。RT-PCR验证LncRNA RMRP的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达量;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3及cleaved Caspase-3蛋白表达。结果 与对照组比较,LPS处理后细胞存活率、Bcl-2蛋白显著降低,凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax、cleaved Caspase-3蛋白显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),LPS组RMRP的表达量(4.05±0.27)显著高于对照组(1.01±0.12),差异有统计学意义(t=30.867,P<0.05);沉默表达RMRP后细胞存活率、Bcl-2蛋白显著升高,凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax、cleaved Caspase-3蛋白显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS+Si-RMRP组RMRP的表达量(0.89±0.06),显著低于LPS+Si-CON组(4.02±0.19),差异有统计学意义(t=47.127,P<0.05)。结论 LncRNA RMRP能抑制肺泡上皮细胞凋亡,降低炎性因子水平,促进细胞增殖。

胃液长链非编码RNA RMRP的检测及其临床价值分析

目的检测长链非编码RNA(lncRNA)线粒体RNA处理核糖核酸内切酶RNA组份(RMRP)在不同患者胃液中的水平及其变化规律,结合临床病理因素探讨胃液RMRP作为胃癌筛查标志物的临床价值。方法以胃液GAPDH为参照,采用qRT-PCR法检测并比较45例正常或轻度胃炎患者胃液、30例胃溃疡患者胃液、16例慢性萎缩性胃炎患者胃液和39例胃癌患者胃液中RMRP水平及其变化规律,结合临床病理因素探讨胃液RMRP水平与胃癌的相关性,构建ROC曲线确定胃液RMRP作为胃癌筛查标志物的灵敏度与特异度,通过联合检测胃液RMRP、血清癌胚抗原(CEA)和胃液CEA在早期胃癌和进展期胃癌中的阳性率探讨胃液RMRP的临床价值。结果相对于正常或轻度胃炎患者,胃溃疡患者胃液RMRP水平无明显变化(P>0.05),而慢性萎缩性胃炎患者胃液RMRP水平明显降低,胃癌患者胃液RMRP水平显著升高(均P<0.01)。胃癌患者胃液RMRP水平与患者年龄、幽门螺杆菌感染情况均有关(均P<0.05)。ROC曲线显示胃液RMRP的灵敏度和特异度分别为0.56和0.75。胃液RMRP联合血清或胃液CEA筛查胃癌的效果明显优于传统肿瘤标志物血清CEA水平(均P<0.05)。结论胃液lncRNA RMRP是潜在的胃癌筛查标志物,为临床诊治胃癌研究提供了新的思路。

长链非编码RNA RMRP RNA促成骨分化的研究进展

RMRP RNA是一个长链非编码RNA。RMRP RNA不同位点的突变,包括转录区和调控区的突变会导致几种常染色体隐性的骨骼发育不良,其中之一是CHH。RMRP RNA可以通过形成核酸内切酶RNase MRP发挥功能,或者通过Dicer酶依赖途径产生2种microRNA,即RMRP-S1和RMRP-S2,调控细胞。与RMRP RNA研究相关最多的方面是关于癌症的发生,在成骨分化中研究很少。该综述从成骨发育过程,RNase MRP、RMRP-S1和RMRP-S2的底物与成骨发育的可能的关系几个方面进行阐述,为后续研究RMRP RNA在成骨发育中的分子机制提供一个参考。

菊米提取物调控lncRNA RMRP基因对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化成分的影响

目的探讨菊米提取物对高糖(high glucose,HG)诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化成分表达的影响与分子机制。方法将肾小管上皮细胞HK-2分为NC(空白对照)组、OSM(渗透压对照)组、HG(高糖处理)组、HG+低、中、高剂量组、si-NC+HG组、si-LncRNA RMRP+HG组、pcDNA+HG+高剂量组、pcDNA-LncRNA RMRP+HG+高剂量组。其中,NC组以5.5 mmol/L葡萄糖处理,OSM组以5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇处理,HG组以30 mmol/L葡萄糖处理,HG+低、中、高剂量组以30 mmol/L葡萄糖+0.01、0.02、0.04 mg/mL菊米提取物处理,si-NC+HG组、siLncRNA RMRP+HG组、pcDNA+HG+高剂量组和pcDNA-LncRNA RMRP+HG+高剂量组转染si-NC、si-LncRNA RMRP、pcDNA、pcDNA-LncRNA RMRP后以30 mmol/L葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖+0.04 mg/mL菊米提取物处理。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞活性,蛋白质免疫印迹法检测纤维化因子α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen type I alpha 1,COL1a1)表达,ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,RT-q)检测LncRNA RMRP表达。结果0.01、0.02、0.04 mg/mL浓度的菊米提取物使高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2的活性逐渐增加,α-SMA、Fn、COL1a1蛋白表达、TNF-α、IL-6水平和LncRNA RMRP表达逐渐减少(P<0.05)。si-LncRNA RMRP抑制高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2中α-SMA、Fn、COL1a1蛋白表达、TNF-α和IL-6水平(P<0.05)。LncRNA RMRP可以减弱菊米提取物对高糖处理的肾小管上皮细胞HK-2炎性和纤维化因子表达的抑制作用。结论菊米提取物通过下调LncRNA RMRP表达,抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎性和纤维化成分的表达。

长链非编码RNA RMRP对急性心肌梗死并发急性心力衰竭的预测价值

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清长链非编码RNA RMRP(lncRNA RMRP)的相对表达水平及对AMI并发急性心力衰竭(AHF)的预测价值。方法纳入惠州市第六人民医院心血管内科于2018年7月至2019年3月收治的AMI患者142例为病例组,同期年龄和性别相匹配的体检健康人员80例为对照组,根据起病48 h是否发生AHF将病例组分为AHF亚组和非AHF亚组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测病例组和对照组血清lncRNA RMRP相对表达水平。采用Spearman分析lncRNA RMRP相对表达水平与患者心功能和心力衰竭标志物间的关系,并探讨其预测AHF的价值。结果病例组血清lncRNA-RMRP相对表达水平高于对照组(P<0.05)。AHF亚组血清lncRNA-RMRP相对表达水平高于非AHF亚组(P<0.05)。血清lncRNA-RMRP相对表达水平与左心室射血分数(LVEF)呈负相关(r=-0.843,P<0.001),与超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肌钙蛋白I(cTnI)和N末端B型利纳肽前体(NT-proBNP)均呈正相关(r=0.643、0.743、0.943,P<0.05)。受试者工作特征曲线显示,当血清lncRNA-RMRP截断值为1.34时,lncRNA-RMRP预测AMI患者并发AHF的AUC为0.896(95%CI:0.844~0.948),灵敏度为88.4%,特异度为83.3%。当血清NT-proBNP截断值为1675 ng/mL时,NT-proBNP预测AMI患者并发AHF的AUC为0.809(95%CI:0.717~0.932),灵敏度为78.2%,特异度为70.4%。当cTnI截断值为12.13μg/L时,cTnI预测AMI患者并发AHF的AUC为0.746(95%CI:0.632~0.818,P<0.001),灵敏度为78.7%,特异度为72.4%。当hs-CRP截断值为9.24 mg/L时,hs-CRP预测AMI患者并发AHF的AUC为0.723(95%CI:0.604~0.738,P<0.001),灵敏度为61.3%,特异度为69.2%。血清lncRNA-RMRP预测AMI并发AHF的AUC大于NT-proBNP、cTnI和hs-CRP单项检测。结论血清lncRNA-RMRP相对表达水平可作为AMI患者并发AHF的早期预测因子。

LncRNA RMRP靶向调控miR-613对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)RMRP对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法qRT-PCR检测正常乳腺细胞HBL-100和4种乳腺癌细胞(SK-BR-3、BT-549、MCF-7和MDA-MB-231)中RMRP和miR-613的表达水平。以MCF-7细胞为研究对象,分别构建沉默RMRP或过表达miR-613的乳腺癌细胞株,qRT-PCR检测RMRP和miR-613的表达水平,MTT法检测细胞存活,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测增殖相关蛋白(Cyclin D1)和凋亡相关蛋白(Cyt-c、Bax和Bcl-2)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RMRP和miR-613的靶向调控关系。结果与HBL-100细胞相比,4种乳腺癌细胞RMRP的表达显著上调,miR-613的表达显著下调。稳定沉默RMRP或过表达miR-613的细胞株构建成功。沉默RMRP或过表达miR-613均可显著抑制CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达,促进Cyt-c和Bax蛋白的表达,抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡。miR-613是RMRP的靶基因,RMRP可负性调控miR-613的表达。抑制miR-613可逆转沉默RMRP对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默RMRP通过上调miR-613表达激活线粒体凋亡途径进而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。

长链非编码RNA RMRP RNA功能的多样性

RMRP RNA是一个长链非编码RNA,它具有多种功能,包括和其它蛋白形成核酸内切酶RNase MRP,产生2种miRNA,作为miRNA海绵,和转录因子结合调控基因表达以及产生1种siRNA,从不同层面调控基因表达。RMRP RNA广泛参与不同的生命过程,异常表达的RMRP RNA也参与癌症和各种疾病的发生。

长链非编码RNA RMRP通过JAK2/STAT3信号通路增强胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性的机制研究

目的探讨长链非编码RNA RMRP(lncRNA-RMRP)对胶质瘤替莫唑胺(TMZ)耐药的影响,并检测lncRNA-RMRP在胶质瘤细胞系(U87、U118)TMZ耐药细胞株(U87TR、U118TR)和原发胶质瘤组织、复发胶质瘤组织中的表达情况。方法用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)检测lncRNA-RMRP在U87、U87TR、U118、U118TR和胶质瘤组织、复发胶质瘤组织中的表达情况。U87TR、U118TR分别转染lncRNA-RMRP,并分为U87TR-RMRP组、U87TRNC组、U118TR-RMRP组和U118TR-NC组。用CCK-8方法检测400μmol·L^(-1)TMZ处理0,24,48,72,96 h后,U87、U87TR、U118、U118TR细胞的活力。用Western Blotting检测JAK2/STAT3相关蛋白的表达。结果 LncRNARMRP在U87、U87TR中表达量分别为(1.03±0.21)和(0.12±0.07),在U118、U118TR中表达量分别为(1.07±0.32)和(0.43±0.15),在复发胶质瘤组织和原发胶质瘤组织中表达量分别为(1.36±0.78)和(3.41±1.61),差异均有统计学意义(均P<0.01)。CCK-8检测结果显示,U87和U87TR的细胞增殖力分别为(2.62±0.22)和(4.01±0.12),U118和U118TR的细胞增殖力分别为(2.45±0.09)和(4.47±0.09),差异均有统计学意义(均P<0.01)。U87和U87TR的半抑制浓度(IC_(50))分别为(99.33±9.02)和(253.30±15.28)μmol·L^(-1),U118和U118TR的IC_(50)分别为(100.00±10.00)和(233.30±15.28)μmol·L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.01)。CCK-8检测结果显示,U87TR-RMRP和U87TR-NC的细胞增殖力分别为(2.18±0.14)和(4.36±0.13),U118TR-RMRP和U118TR-NC的细胞增殖力分别为(3.25±0.21)和(4.29±0.11),差异均有统计学意义(均P<0.01)。U87TRRMRP组和U87TR-NC组的TMZ IC_(50)分别为(142.30±6.81)和(283.30±15.28)μmol·L^(-1),U118TR-RMRP组和U118TR-NC组的TMZ IC_(50)分别为(189.70±16.01)和(300.30±10.02)μmol·L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.01)。U87TR-RMRP组和U87TR-NC组的p-JAK2分别为(1.02±0.23)和(0.49±0.13),p-STAT3分别为(1.02±0.0.21)和(0.28±0.07),差异均有统计学意义(均P<0.05)。U118TR-RMRP和U87TR-NC组的p-JAK2分别为(1.00±0.13)和(0.29±0.04),p-STAT3分别为(1.09±0.27)和(0.36±0.04),差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论LncRNA-RMRP通过JAK2/STAT3信号通路增强胶质瘤细胞对TMZ敏感性。

1例软骨-毛发发育不全的临床及遗传学特征分析

患儿,女,以“显著矮身材”为首发症状。母孕期超声检查多次提示四肢偏短。患儿表现为毛发细软、稀疏、色浅,四肢偏短,影像学检查提示骨骺改变。全外显子基因测序检测阴性。进一步行Sanger测序检测到线粒体处理RNA的内切酶复合物RNA组分(RNA component of mitochondrial RNA processing endoribonuclease,RMRP)基因,一个非编码RNA基因,存在g.181G→A/g.255C→T复合杂合变异,g.255C→T为新发现的突变。软骨-毛发发育不全临床表现复杂,典型症状有助于诊断该病;特别是全外显子基因测序检测阴性时,应考虑该病并进行鉴别诊断;必要时完善一代测序(Sanger法)检测,以帮助确诊、评估预后及产前诊断。新发现的变异丰富了该病的基因谱。