MicroRNA调控CLDN1功能的研究进展

microRNA(微小RNA,miRNA)是一类非编码RNA中(既非蛋白质进行编码形成的RNA)的一种,长约有20~25个核苷酸长的小分子RNA。CLDN1(紧密连接蛋白1,Claudin-1)是紧密连接蛋白家族中的一员,其含有211个氨基酸残基来组成大约为23 kDa的蛋白。CLDN1主要存在于细胞连接中,形成细胞间连接部位,并形成屏障功能。研究表明,miRNA可以调节编码CLDN1蛋白基因的翻译过程,并影响其稳定性来调节功能,影响呼吸、消化、肿瘤、中枢神经、循环以及皮肤屏障等众多系统疾病的发生发展过程中。本文就miRNA对CLDN1的调节作用以及与相关疾病发生发展的关系进行综述,为防治与CLDN1改变相关的疾病提供新的见解及其研究思路。

MicroRNA调控哺乳动物骨骼肌发育

Micro RNA(mi RNA)是一类长度大约为22 bp的小分子非编码RNA,广泛存在于哺乳动物中,部分mi RNA表达具有时空和组织特异性。哺乳动物中mi RNA主要通过与靶基因3?UTR区结合抑制其翻译,调控机体生物学功能。mi RNA在哺乳动物骨骼肌发育中发挥重要调节作用。哺乳动物骨骼肌发育是一个复杂的生物学过程,包括骨骼肌干细胞增殖、迁移、分化,成肌细胞增殖、分化、肌管融合,肌纤维肥大,能量代谢,纤维类型转换等。mi RNA参与骨骼肌发育的各个环节,通过靶向各个时期的关键因子调控骨骼肌发育。本文对mi RNA在骨骼肌发育中的调控作用进行了综述,以期为深入理解骨骼肌发育规律提供参考。

靶向ASGPR1的外源性microRNA对HBV表达和复制的抑制作用

目的:设计并构建ASGPR1靶向的microRNA表达载体,观察其对ASGPR1基因的抑制作用及其在HBV感染基因治疗中的应用价值.方法:以ASGPR1为靶基因,设计并构建3个针对ASGPR1不同位点的microRNA表达载体,通过脂质体方法转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR和Western blot检测其对ASGPR1mRNA和蛋白的抑制作用,乙肝五项定量和HBVDNA检测其对HBV的抑制作用.结果:ASGPR1mRNA和蛋白的平均水平分别下降了57.3%和49.8%(P<0.01);在病毒水平3种amiRNA均能明显抑制相应细胞株中HBsAg和HBeAg的分泌,其中以a miRNA-ASGPR1-610抑制作用最强,对培养72h的细胞上清中的HBsAg和HBeAg抑制率分别为31.3%和33.6%(P<0.01),HBV DNA的抑制率为29.7%(P<0.01).结论:靶向ASGPR1的外源性microRNA能显著抑制靶基因的表达,进而抑制HBV的复制和表达.ASGPR1可以作为慢性HBV感染基因治疗的候选靶点.

基于生物信息学方法挖掘奶山羊miRNAs研究

microRNAs(miRNAs)是长约22nt的内源非编码小分子RNA,在转录后基因调控中发挥重要作用。奶山羊是具有重要经济价值的产乳动物,有关奶山羊miRNAs研究相对匮乏,识别和鉴定新的奶山羊miRNA至关重要。文章以与奶山羊高度同源的绵羊基因组为参考数据库,应用生物信息学方法得到101条新的奶山羊miRNAs序列,并对其进行序列特性分析,为今后基因组信息不全物种的miRNAs挖掘与鉴定提供参考。

通督调神针灸预处理对脑缺血再灌注大鼠miRNA664及MMP9调控机制的研究

目的探讨通督调神针灸预处理对脑缺血再灌注大鼠神经行为功能和脑水含量的影响及mi RNA664、MMP9表达的调控作用机制。方法将130只Wistar大鼠随机分为A组(电针预处理组)30只、B组(艾灸预处理组)30只、C组(阿司匹林预处理组)30只、D组(模型组)30只和E组(空白对照组)10只。A组进行电针治疗;B组用清艾条悬灸;C组用阿司匹林10 mg/kg灌胃。治疗7 d后各组进行脑缺血再灌注模型制作,于再灌注后24 h,观察大鼠神经行为功能和脑水含量以及皮质区相关mi RNA、MMP9的表达。结果 A组、B组、C组和D组神经行为学评分与E组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。A组、B组神经行为学评分与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。A组神经行为学评分与B组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。A组、B组、C组和D组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与E组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。A组、B组和C组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与D组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。A组和B组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。A组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与B组比较,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论通督调神针灸预处理可有效降低脑缺血再灌注大鼠的神经行为学评分和脑水含量,并通过调控mi RNA664的表达降低MMP9相对表达量。通督调神针灸预处理脑保护机制之一可能通过调控mi RNA664的表达降低MMP9相对表达量,诱导脑缺血耐受,减轻脑水肿。

MicroRNA-193b与肥胖的研究进展

microRNAs(miRNAs)是近年来新发现的一类大小为20-25个核苷酸的单链非编码小分子RNA,具有内源性、高保守的特点,通过与靶mRNA碱基互补配对,发挥降解或抑制靶mRNA翻译的作用。近期研究发现,miRNA与肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病密切相关。肥胖越来越成为一个遍及全球的严重公共健康问题,主要表现为脂肪细胞数量异常增加和体积异常增大,是以机体能量代谢失衡导致脂肪过度积聚为主要特征的一种代谢性疾病。miRNA-193b-365在脂肪细胞分化和肥胖状态下异常表达,推测其可能参与了脂肪细胞分化以及肥胖的发生发展。深入理解脂肪细胞分化机制对于防治肥胖具有重大意义。本文就此领域的研究进展作一综述。

MicroRNA-145与肿瘤的关系及研究进展

随着人们对生命科学的认识不断加深,作为非编码RNA的重要代表micro RNA受到越来越多的青睐。人类多种肿瘤的发生发展及侵袭转移与micro RNAs（mi RNAs）存在着密切关系,mi RNAs可能成为一类新的致癌基因或抑癌基因,通过抑制靶m RNA翻译或诱导靶m RNA降解在转录后水平调控基因表达,参与肿瘤的发生、发展及侵袭转移。

骨髓增生异常综合征患者循环microRNA-144的检测及其临床意义

目的探讨mi RNA-144在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法收集MDS患者24例,健康对照12例,q RT-PCR检测外周血mi RNA-144相对表达量,统计分析mi RNA-144在MDS中的表达情况及与其预后相关性。结果 mi RNA-144在MDS亚型难治性血细胞减少伴单系病态造血(RCUD)、难治性血细胞减少伴多系病态造血(RCMD)、难治性贫血伴环形铁粒幼细胞(RARS)、难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)及难治性贫血伴原始细胞增多-2(RAEB-2)中的相对表达量分别为3.81、3.64、4.56、6.49及8.73,均显著高于健康对照组,P<0.01;mi RNA-144在预后好和预后差组中的相对表达量分别为3.81和7.18,差异具有统计学意义,P<0.01。结论 mi RNA-144在MDS中高表达,且可作为潜在的预后评估指标。

MicroRNA-146b在病毒性心肌炎小鼠血清中的表达及其意义

目的研究病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠血清micro RNA-146b(mi R-146b)浓度,探究其在VMC发病中的变化及其意义。方法用柯萨奇病毒B3(CVB3)建立Balb/c VMC小鼠模型,实验组注射100 TCID50病毒液0.1 m L,对照组注射等量磷酸盐缓冲液。在注射的第0、1、2、4和6周分别采用实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测两组小鼠血清mi R-146b浓度,同时用酶联免疫吸附试验法检测血清中白细胞介素(interleukin,IL)-17和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的浓度。结果实验组相应时间点小鼠血清mi R-146b浓度均高于对照组,差异均有统计意义(P<0.05)。血清mi R-146b浓度和血清IL-17与TNF-α浓度呈正相关(r=0.37,P<0.05;r=0.68,P<0.05)。结论 mi R-146b在VMC小鼠血清中表达明显增高,与IL-17和TNF-α呈正相关,提示循环中的mi R-146b可能通过IL-17和TNF-α而参与了VMC的发病过程。

MicroRNA-135在肿瘤中的研究进展

Mircro RNA(mi RNAs)通过与信使RNA(m RNA)的序列互补来降解靶m RNA并抑制蛋白质翻译,在细胞增殖、分化、发育和凋亡等方面起着重要的作用。许多mi RNA可作为原癌基因或抑癌基因,在肿瘤的发生和发展中发挥重要作用。越来越多的研究表明,微mi R-135(mi R-135)与肿瘤的发生发展密切相关,本文主要对近年来mi R-135参与调节肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、转移、耐药和预后等方面的机制作一综述,期望能对肿瘤的早期诊断、治疗和预后判断有所帮助。

miRNA与肿瘤及其对瘢痕疙瘩作用研究进展

miRNA(microRNA)是一类对基因具有调控功能的内源性非编码小分子RNA。这类非编码的小RNA分子通过调节基因的表达在生物发育、脂肪代谢、细胞的分化、增殖和凋亡等过程中发挥着重要作用。研究表明miRNA表达异常能导致疾病甚至肿瘤的发生,有类似于抑癌基因或癌基因的功能。瘢痕疙瘩本质上属于实体瘤的一种,近几年来miRNA在瘢痕疙瘩发生机制中的作用成为了研究热点。因此,关于miRNA对瘢痕疙瘩作用的深入研究有望为类肿瘤样病理组织瘢痕疙瘩的治疗提供新的思路。

南方根结线虫Mi-eft2基因RNAi沉默效应研究

以南方根结线虫延长因子2基因(Mi-eft2)T克隆质粒为模板,克隆该基因的3个部分片段(各200 bp),作为体外合成ds RNA的模版,利用该ds RNA(F1ds,F2ds,F3ds)干扰南方根结线虫2龄幼虫(J2)的Mi-eft2表达。结果显示,利用real-time PCR作为检测方法,干扰处理后的J2线虫Mi-eft2的表达量(F1、F2、F3),与对照处理的J2线虫Mi-eft2的表达量(F0)相比,分别降低了21%、69%、0.02%。将经过干扰处理的J2线虫和作为对照处理的J2线虫(500头/株)分别接种5株番茄,培养45 d后观察表型。发现干扰处理后J2线虫与对照处理的J2线虫接种番茄后产生的根结数相比较,分别减少了57.09%、68.94%、7.01%。说明Mi-eft2表达的沉默效应会使南方根结线虫对番茄造成的危害程度相应降低,也说明了利用RNAi干扰该基因表达的方法有利于对南方根结线虫病害防治方法的探索。

靶向Wnt1的miRNA与circRNA及其靶基因间相互作用的生物信息学分析

为对靶向Wnt1的7种mi RNAs进行circ RNAs及其靶基因的预测,同时分析其与circ RNAs及靶基因间的相互作用,分别采用Starbase及mi RWALK软件,对文献报道的靶向Wnt1基因的let-7e、mi R-21、mi R-34a、mi R-122、mi R-148a、mi R-148b与mi R-152等7种mi RNAs的circ RNAs和对应的靶基因进行生物信息学预测.利用Cytoscape 3.2.1对这7种mi RNAs和预测所得到的circ RNAs及对应的靶基因进行网络分析.并进一步对预测到的靶基因通过DAVID软件进行通路分析.Starbase软件对这7种不同mi RNAs所预测的靶circ RNAs的数量分别为58、15、41、20、28、28、28个.分别比较mi RWALK中7～9个以上软件共有的mi RNAs及其与靶基因的关系,发现CHD7基因是唯一一个在三种不同预测范围内与mi R-21、mi R-148a、mi R-148b和mi R-152等4种mi RNAs相对应的靶基因.CNOT6、NBEA、ZFYVE26与ZDHHC17是在两种不同预测范围内与至少4个mi RNAs相对应的靶基因.在7种mi RNAs所预测靶基因相关的KEGG信号通路中,7～9个软件以上共有的信号通路为Focal adhesion信号通路、MAPK信号通路、Notch信号通路与TGF-beta信号通路.在MAPK信号通路中DUSP1与MRPS35_hsa_circ_001042均分别是与mi R-21、mi R-148a、mi R-148b及mi R-152等4种mi RNAs相互作用的靶基因与circ RNA.本研究对靶向Wnt1的mi RNAs及其相互作用的circ RNAs、靶基因与信号通路等进行了网络分析与预测,为进一步分析它们之间的相互作用奠定了基础.

POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA的筛选、靶基因预测和生物信息学分析及其调控机制探讨

目的采用生物信息学方法分析术后认知功能障碍(POCD)小鼠海马组织中差异表达miRNA(DEMs)及其靶基因(DEGs),并构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA的调控网络图,探讨其机制。方法在GEO数据库中搜索下载POCD小鼠海马组织与正常小鼠海马组织基因表达谱芯片数据GSE95070,采用R软件lim⁃ma函数包筛选出差异表达的miRNA,即DEMs。将DEMs分别输入到miRTarBase、TargetScan、miRDB数据库中,三个数据库中皆存在的靶基因为差异表达的DEMs靶基因,即DEGs。使用R软件中的ggplot2、enrichplot函数包对DEGs进行了基因本体(GO)功能富集分析和KEGG信号通路分析。通过STRING在线工具构建DEGs蛋白互作网络(PPI),将蛋白间相互作用得分>0.4的节点输入到可视化工具Cytoscape软件中,利用cytoHubba插件筛选出节点度值排名前10的节点,即为可能参与小鼠POCD发生发展的枢纽基因。选取枢纽基因及其相应的DEMs,利用Cyto⁃scape软件构建POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图。结果共筛选出19个显著差异表达的DEMs,得到448个DEGs。GO功能富集分析结果显示,DEGs在DNA结合的转录因子激活活性、特异性RNA聚合酶Ⅱ、微小GTP酶结合等分子功能中显著富集,在树突的形成以及调节、促进神经胶质细胞的增殖等生物学过程中显著富集,在突触膜的有机组成成分、细胞边缘以及囊泡运输等细胞组分中显著富集。KEGG信号通路分析结果显示,DEGs在Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路、Hepatitis C信号通路、Apelin信号通路等通路中显著富集。小鼠POCD发生发展的10个枢纽基因分别为Gsk3β、Igf1、Cd34、Ubxn7、Smad2、Smarca4、Stat1、Grb2、Sin3a、Ncam1,相应的6个DEMs分别为mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p、mmu-miR-592-3p、mmu-miR-28a-3p、mmu-miR-181c-5p、mmu-miR-351-5p,成功构建了POCD小鼠海马组织中差异表达miRNA-mRNA调控网络图,其中mmu-miR-362-3p调控Gsk3β的关系对、mmu-miR-3065-5p调控Igf1的关系对在调控网络中节点度最高。结论与正常小鼠海马组织相比,POCD小鼠海马组织中有19个差异表达的DEMs和448个DEGs;DEGs与树突的形成以及调节等有关,参与介导Cushing综合征相关通路、cGMP-PKG信号通路等。mmu-miR-362-3p、mmu-miR-3065-5p等差异表达的miRNA可能是通过调节Gsk3β、Igf1等靶基因的表达,影响POCD的发生发展。

血液及痰液miRNAs检测在肺癌早期筛查和诊断中的价值

肺癌已经成为了世界上发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一。微小RNA(micro RNA,mi RNA)在血液及痰液中的变化反映了肺癌发生发展的状况。因此血液及痰液中的mi RNAs可以作为一种新的肿瘤标志物运用到肺癌的早期筛查和诊断中。本文就mi RNAs与肺癌发生发展的关系,以及血液及痰液中mi RNAs检测在肺癌早期筛查和诊断中的临床价值进行综述。

MiRNA在动脉粥样硬化血管新生中的作用

在动脉粥样硬化斑块的发展过程中,血管新生是一个重要的影响因素,局部新生血管和斑块稳定性密切相关。随着斑块内新生血管数量的增加,斑块内脂质和各种炎细胞堆积,最终导致基质降解,纤维帽变薄,斑块破裂,进而引发严重的心血管事件。mi RNA的研究越发地让我们认识到,mi RNA不仅在肿瘤疾病领域,在动脉粥样硬化领域中也发挥着极其重要的作用。近年来,在心血管系统中发现多种可能与动脉粥样硬化相关的mi RNA,可能为动脉粥样硬化的早期诊断和治疗选择提供了新的线索。

长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P<0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P<0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P<0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。

c-MYC调节的miRNA-92b在结直肠癌发生发展中的功能及机制探究（英文）

micro RNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用.目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道.本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制.采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样本中与癌旁组织相比显著高表达.通过结肠癌细胞株SW620稳转细胞及裸鼠皮下成瘤模型,发现过表达miR-92b可以显著促进细胞增殖及体内肿瘤生长.同时还发现miR-92b可以分泌形式存在于胞外及外周血中,提示miR-92b是一个具有分泌特性的micro RNA.在分子机理方面,c-MYC可通过调节miR-92b的启动子活性从而促进后者转录,并且c-MYC在结直肠癌组织样本中也存在高表达.进一步,通过在线预测、报告质粒活性检测及蛋白质印迹技术证实FBXW7是一个新的miR-92b靶基因.由于FBXW7已报道为c-MYC泛素降解过程中的关键泛素化连接酶之一,本研究结果提示结直肠癌中c-MYC、miR-92b及FBXW7三者间可能存在分子调节环路.综上所述,本研究为miR-92b在结直肠癌中的功能及机制提供了新的视角,并为miR-92b在结直肠癌早期诊断中的应用提供了新的参考.

miRNA-30a在肾细胞癌中的表达及作用

目的:探讨微小RNA(miRNA)-30a在肾细胞癌组织和细胞中表达及其临床意义。方法:收集95例2006年4月至2011年3月哈尔滨医科大学附属第二医院收治患者,从获取的新鲜肾细胞癌组织和对应的正常对照组织样本以及肾癌细胞系中分别提取总RNA,应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测miRNA-30a表达水平,并分析mi RNA-30a与临床病理资料和预后的关系。采用生物信息学方法预测可能的靶基因并进行验证。利用MTT法验证mi RNA-30a对细胞增殖的作用。结果:miRNA-30a在肾癌组织中表达水平显著低于正常肾组织(P<0.01),在肾癌细胞系中表达低于正常肾上皮细胞。miRNA-30a可抑制肾癌细胞的增殖。生物信息学方法和q RT-PCR表明,异黏蛋白(MTDH)为mi RNA-30a靶基因。Kaplan-Meier生存分析显示,miRNA-30a高表达的肾癌患者总生存期优于低表达者(P<0.01)。结论:miRNA-30a在肾癌中低表达,mi RNA-30a低表达与肾癌不良预后有关,并且mi RNA-30a可通过MTDH抑制肾癌细胞的增殖。

甲醛对肝脏miRNA-21及其下游TIMP-3和RECK蛋白的影响

目的:探讨甲醛对小鼠肝脏m i R N A-21及其下游基质金属蛋白酶组织抑制因子-3(the tissue inhibitors of metalloproteinase 3,T I M P-3)和伴有K a z a l基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(reversion-inducing cysteinerich protein with Kazal motifs,RECK)的影响.方法:将40只♀昆明小鼠随机分为甲醛染毒组(高浓度组、中浓度组、低浓度组)和对照组,每组10只.每日上午10时给予染毒组腹腔注射不同浓度的甲醛溶液,给予对照组注射等量的生理盐水,持续30 d.应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测各组小鼠肝组织中mi RNA-21的表达量,同时用Western blot、免疫组织化学二步法检测各组小鼠肝组织中TIMP-3和RECK蛋白的表达情况.结果:低浓度组、中浓度组、高浓度组中的mi RNA-21相对于对照组的表达量分别是1.16±0.18、1.61±0.29、2.48±0.49,组间有明显差异(F=38.02,P<0.0001).对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组中的TIMP-3蛋白的相对表达量分别是1.30±0.058、1.04±0.083、0.85±0.070、0.23±0.067,组间有明显差异(F=125.8,P<0.0001).对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组中的RECK蛋白的相对表达量分别是1.24±0.057、1.11±0.056、0.68±0.042、0.35±0.066,组间有明显差异(F=158.7,P<0.0001).随着染毒溶液浓度的增加,mi RNA-21相对表达量与TIMP-3相对表达量呈负相关(r=-0.990,P=0.01),与RECK相对表达量亦呈负相关(r=-0.974,P=0.026).结论:甲醛染毒可以升高mi RNA-21在肝脏中的表达,且呈浓度依赖关系.同时可降低TIMP-3和RECK蛋白的表达,亦呈浓度依赖关系.