丙肝患者血清HCV-RNA含量与肝功能及血常规指标的相关性

目的探讨丙肝患者血清HCV-RNA含量与肝功能和血常规指标的相关性,为丙肝患者早期诊断和治疗效果监测提供参考依据。方法选取丙肝患者651例,应用实时荧光定量PCR法检测血清HCV-RNA含量。根据血清HCVRNA含量分为六组,分析患者血清HCV-RNA含量与肝功能和血常规指标的关系。结果随着丙肝患者血清HCVRNA含量增加,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),AST/ALT,谷氨酰基转移酶(GGT)和总胆红素(TBIL)均呈升高趋势,而清蛋白/球蛋白比值(A/G)呈下降趋势(ALT,AST,AST/ALT,GGT,TBIL和A/G的最低值与最高值分别是32.3±9.7 U/L与96.2±13.6 U/L,31.1±8.38 U/L与113.5±15.9 U/L,0.86±0.09与1.19±0.11,29.2±14.5 U/L与52.7±16.2 U/L,17.2±4.32μmol/L与26.0±5.58μmol/L,0.98±0.07与1.35±0.14),差异有统计学意义(F=457.1,656.4,149.1,40.18,46.56和146.98,均P<0.01)。血细胞计数结果显示,随着血清HCVRNA含量增加,白细胞(WBC)、中性粒细胞比值(NEUT%)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)和血小板(PLT)呈下降趋势而淋巴细胞比值(LY%)呈上升趋势[WBC,NEUT%,LY%,RBC,Hb和PLT的最低值与最高值分别是(4.30±0.22)×10~9/L与(6.02±0.27)×10~9/L,(48.13±3.56)%与(59.28±3.40)%,(31.05±3.41)%与(38.81±4.65)%,(3.73±1.70)×10^(12)/L与(4.65±1.88)×10^(12)/L,(122.01±5.58)g/L与(135.37±8.50)g/L,(102.65±16.87)×10~9/L与(148.21±14.40)×10~9/L],除RBC的差异无统计学意义(F=1.926,P>0.05),WBC,NEUT%,LY%,Hb和PLT的差异均具有统计学意义(F=349.0,132.145,43.65,38.91和52.21,均P<0.01)。结论丙肝患者肝功能和血细胞计数指标与血清HCV-RNA含量有关,联合检测血清HCV-RNA含量与肝功能和血细胞计数指标对丙型肝炎的诊断及疗效观察有指导意义。

HCV RNA水平对HCV/HIV合并感染自然进程的影响

目的探讨HCV RNA PCR水平对丙型肝炎病毒(HCV)/人类免疫缺陷病毒(HIV)合并感染自然进程的影响。方法采用实时荧光定量PCR方法检测HCV RNA,比较初次就诊高效反转录病毒治疗(HAART)前的HCV/HIV合并感染(HCV/HIV组)、HCV单纯感染(HCV组)、HIV单纯感染(HIV组)患者的HCV RNA、HIV RNA、CD4+T淋巴细胞计数、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、甘胆酸(CG)、Ⅲ型胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、年龄等指标。结果 HCV/HIV组与HCV组和HIV组CD4+T淋巴细胞计数分别为139.75±91.586、647.16±363.379、288.0±219.6个/微升(P<0.01)。与HCV组患者的发病年龄分别为37±15和52±13岁(P<0.01)。HCV RNA分别为6.0417±0.93524和5.2553±1.62773log/ml(P<0.05);CⅣ分别为105.30±24.630和95.41±52.889ng/ml(P<0.05);CG分别为1444.98±1721.597、139.00±165.640μg/ml(P<0.01);PCⅢ分别为285.52±244.558、159.82±86.928ng/ml(P<0.01);ALT分别为104.42±107.90、46.22±32.589U/L(P<0.01)。与HIV组HIV RNA分别为4.8±0.9和4.1±1.0log/ml(P<0.01)。结论 HCV/HIV合并感染可以加重和加快HCV、HIV疾病的自然进程。高水平的HCV RNA是HCV/HIV合并感染患者的HCV、HIV疾病自然进程的危险因素之一。

月季花瓣的RNA提取方法

以富含类黄酮的月季花瓣为试验材料,通过比较不同方法,优化和改进提取步骤,发现CTAB多级沉淀法、改良异硫氰酸胍法提取的RNA的完整性和纯度较好,电泳显示28S和18S条带清晰,28S条带亮度是18S的两倍。而SDS-LiCl法、RNArose Reagent试剂快速法提取的RNA黄酮胶状沉淀难溶,电泳图谱28S和18S条带模糊难辨,5S条带很亮。这为月季花色差减文库构建及花色相关基因克隆奠定了良好的基础。

长链非编码RNA在结直肠癌中的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是指一类转录本长度大于200核苷但不具有蛋白质编码功能的长链RNA分子,其种类繁多,结构各异,在染色体修饰、转录及转录后、表观遗传等多种层面上调控相关基因的表达,广泛参与机体生理和病理过程。近年来大量研究发现,LncRNA的异常表达与肿瘤的发生发展、侵袭、转移等过程密切相关。在结直肠癌中,LncRNA的异常表达亦扮演着重要角色。文中就LncRNA在结直肠癌中的作用进行综述,为其在临床研究结直肠癌的诊断和治疗应用中提供理论依据。

HL-60细胞内DNA甲基化作用与RNA聚合酶活力的关系

以 S-腺苷酰 - L-甲硫氨酸 ( SAM)为诱导物 ,在 1 0 μmol/L最佳浓度下可诱导 HL- 60细胞分化达 1 6%左右 .HPLC测定结果证明 ,诱导物处理后 HL- 60细胞 DNA甲基化水平升高 .通过 3 H-UTP同位素参入法 ,测定了不同处理时间和不同浓度 SAM对 HL- 60细胞 DNA模板体外转录活性的影响 ,发现体外活力下降 .比较了不同浓度α-鹅膏蕈碱存在下 RNA聚合酶活力的变化 ,结果表明 SAM处理后细胞中不同

模板甲基化水平对鼠肝RNA聚合酶体外转录活性的影响

利用３Ｈ－ＵＴＰ同位素参入法，研究了大鼠肝细胞ＲＮＡ聚合酶在核内外的转录活性，结果表明：在细胞核内的转录活性明显低于在无核抽提物中的转录活性。利用自身的ＤＮＡ模板，优于利用外加的ＤＮＡ模板。并比较了不同ＤＮＡ甲基化水平的模板对ＲＮＡ聚合酶体外转录活性的影响，发现模板的甲基化水平与其体外转录水平呈反相关。

基于RNA-seq的黄肉猕猴桃类胡萝卜素合成相关基因的表达分析

【目的】探讨黄肉猕猴桃发育过程中果实类胡萝卜素合成途径中相关差异基因的功能。【方法】以黄肉型中华猕猴桃‘金丰’果实为试材,在前期RNA-seq测序的基础上,利用实时荧光定量PCR技术检测其类胡萝卜素合成过程中相关差异基因的表达水平。【结果】Unigene23885、CL10798、Unigene11266、CL1511四个基因相对表达量较高,其他基因表达量相对较低;相关性分析结果显示,类胡萝卜素含量与Unigene11266、Unigene23885、Unigene2673三个基因相对表达量显著相关,与基因Unigene23823、Unigene12775相对表达量呈极显著相关。聚类分析结果显示,基因Unigene23885和Unigene11266、基因CL1511和CL10798分别被聚为一类,其表达模式非常接近且与其他基因明显不同,并在类胡萝卜素合成中高水平表达,基因CL10467与其距离最近。【结论】综合相关性分析和聚类分析,基因Unigene11266、Unigene23885可能是类胡萝卜素合成的关键基因,且较其他基因而言,基因CL10467、Unigene12775、CL10798、CL1511、Unigene2673与其关系更密切。

PIWIL4在肝门部胆管癌中的mRNA及蛋白表达

目的探讨PIWIL4在肝门部胆管癌(HCCA)中的m RNA及蛋白表达。方法收集经我院病理学检查确诊为HCCA的癌组织及癌旁(>1 cm)组织手术切除标本40例,采用聚合酶链反应(RT-PCR)及Western-blot印迹检测PIWIL4 m RNA和蛋白在癌组织及癌旁组织中的相对表达情况,并分析其与临床病理因素间的关系。结果 (1)40例样本中26例癌组织的PIWIL4表达明显高于癌旁组织,6例癌组织与癌旁组织差异不明显,8例癌组织中PIWIL4的表达低于癌旁组织。癌组织中PIWIL4的m RNA相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。(2)40例样本中26例患者肿瘤中的PIWIL4蛋白表达水平高于癌旁组织,14例患者肿瘤中的PIWIL4蛋白表达水平与癌旁组织差异不明显。(3)PIWIL4蛋白表达水平与肿瘤分化程度、肝内转移及门静脉癌栓有关(P<0.05)。结论 HCCA癌组织中PIWIL4基因处于激活状态,可将其作为一个诊治HCCA的新的靶点,且PIWIL4蛋白表达水平的增加可能与HCCA肿瘤恶性程度密切相关。

香蕉长链非编码RNA基因MalncPSA的克隆及表达分析

香蕉与枯萎病互作机理研究一直是近年来研究的热点,本文从香蕉根部克隆到一个lncRNA基因MalncPSA,通过生物信息学发现其位于异分枝酸合成酶基因ICS上游2 605 bp处。通过RT-PCR检测,对这2个基因在感、抗病香蕉种质中的表达水平进行分析,结果表明,MalncPSA和MaICS的表达趋势相似,在枯萎病菌侵染香蕉植株后3-27 h表达水平增加,而到51 h表达水平下降,并且在抗性种质中的变化幅度比在感病种质中大。对香蕉根部水杨酸的测定也表明,水杨酸含量的变化与这2个基因表达水平的变化相似。本研究结果表明,MalncPSA可能参与香蕉受胁迫下水杨酸的合成调控。

一种快速分析香蕉果实采后mRNA水平变化的新方法

采用SMARTPCRcDNA合成与计算机软件相结合的方法,快速分析香蕉果实采后mRNA水平的变化。在28℃条件下分别将处于同株同穗同梳相邻位置的香蕉果实放置24、48、72h。应用这种方法对其总mRNA水平进行了分析,结果表明,香蕉采后48h时,与采后0h相比,mRNA水平最高。该方法由于使用了计算机软件TheScionImage,可对cDNA电泳图进行数字化分析,具有用材少,敏感性高,快捷方便等特点,特别适用于对较多样品进行分析。

一种改进的小叶锦鸡儿叶总RNA提取方法

针对旱生植物小叶锦鸡儿富含蛋白物质及多糖类物质的特点,在常规Trizol方法的基础上进行改进,摸索出一种小叶锦鸡儿叶总RNA提取的方法.

HCV RNA定量与丙型肝炎临床及病理的关系

目的 探讨HCV RNA定量与丙型肝炎临床及病理的关系及判断疗效。方法 采用美国PE公司生产的5700型荧光定量PCR仪，对665例丙型肝炎病毒单纯感染的慢性肝炎及肝硬化患者行HCV RNA定量检测，对部分患者行血生化及肝穿刺病理检查，用不同类型干扰素治疗。结果 慢性丙型肝炎的HCV RNA定量值比肝炎肝硬化高（P〈0．001）。20例患者的HCV RNA定量与肝脏病理分析，HCV RNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显关系。但肝组织炎症程度与血清生化指标有一定相关性，血清丙氨酸转氨酶的高低与肝组织的炎症程度成正相关。32例用不同干扰素治疗，疗效与HCV RNA值可能有关，HCV RNA值越低，效果越好。结论 HCV RNA定量慢性丙型肝炎比肝炎肝硬化高，HCV RNA定量与肝组织炎症及纤维化无明显关系，干扰素治疗疗效与HCV RNA值可能有关。HCV RNA定量是丙型肝炎诊断和观察抗病毒治疗的一项可靠指标。

基于并行的同源RNA序列快速搜索算法

cmsearch程序是目前最流行的同源RNA搜索工具之一,其最大的缺陷在于搜索速度过慢,严重影响了其应用范围。文章基于序列划分策略采用两级工作池方式实现同源RNA的并行搜索,并对其中所涉及的通信和负载平衡问题进行了优化。测试结果表明,此文方法具有良好的可扩展性,在120个处理器时,并行效率可达86.3%,能够用于全基因组范围内的大规模同源RNA序列搜索。

豌豆蚜可溶型海藻糖酶基因克隆及RNA干扰效应

为了明确豌豆蚜可溶型海藻糖酶基因在基于RNA干扰技术的害虫防治中的应用潜力,该研究根据豌豆蚜基因组数据克隆获得了可溶型海藻糖酶基因(ApTre-1),通过在线软件对其氨基酸序列进行了分析,并利用实时荧光定量PCR技术分析了ApTre-1基因在豌豆蚜不同龄期的表达水平变化;设计合成了2种dsRNA片段(dsApTre-1-1和dsApTre-1-2),采用显微注射法测定了其对靶基因ApTre-1的RNA干扰效率;选取干扰效率较高的dsRNA片段与人工饲料混合后,进一步采用饲喂法测定其对豌豆蚜生长的影响和致死效应.研究结果表明:豌豆蚜ApTre-1基因的开放阅读框全长为1770 bp,编码589个氨基酸,在DNA水平上由9个外显子和8个内含子组成;ApTre-1蛋白的N端含有一段长为20 aa的信号肽序列,具有典型的昆虫海藻糖酶标签序列.荧光定量PCR检测结果表明:ApTre-1基因在豌豆蚜1龄若虫阶段的相对表达量最高.显微注射法测定结果表明:dsApTre-1-1对靶基因ApTre-1具有相对较高的干扰效率.进一步采用饲喂法测定结果表明:豌豆蚜取食dsApTre-1-1后,靶基因表达水平显著下降,豌豆蚜的生长也受到较为明显的抑制,但死亡率较低(17.5%).

大鼠脑、肝组织3种RNA相对表达量与死亡时间的关系

目的研究大鼠脑、肝脏组织3种RNA相对表达量与死亡时间的关系,比较两组织用于死亡时间推断的适用性。方法将48只Wistar大鼠随机分为6组,断颈处死,分别于死后0、24、48、72、120、168 h取大鼠脑皮质及肝右外叶。提取脑、肝组织总RNA,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)技术检测两组织中miR(脑特异性miR-124、肝特异性miR-122)及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β-肌动蛋白(β-actin)mRNA的循环阈值(cyclic threshold,Ct)。用Best Keeper程序筛选内参,对目的RNA的Ct值进行2^(-ΔΔC)t转换,用SPSS及Graph Pad软件对其进行单因素方差分析,并对ΔCt值进行曲线回归分析。结果 miR-124和miR-122分别为脑、肝组织的内参。脑组织GAPDH、β-actin mRNA的相对表达量在死后72 h内逐渐增加,并于死后72 h达到峰值,之后逐渐下降(P<0.05);而肝GAPDH、β-actin mRNA的相对表达量从死后48 h开始逐渐下降(P<0.05)。所有分子的最适回归模型均为三次模型,且肝组织的相关系数r大于脑组织。结论大鼠脑、肝组织中GAPDH、β-actin mRNA的相对表达量与死亡时间具有相关性,肝组织比脑组织更适用于死亡时间推断。

长链非编码RNA AGAP2-AS1在胶质瘤增殖过程中作用机制的研究

目的探究长链非编码RNA AGAP2-AS1在胶质瘤增殖过程中的作用机制。方法选取2018年12月-2019年11月期间的30例胶质瘤患者为观察组,同时期的30例脑外伤患者为对照组。比较两组的组织AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达情况,并比较观察组中不同分级胶质瘤的AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达情况,比较转染siRNA AGAP2-AS1与siRNANC的U87及U251细胞克隆数。结果观察组的RNA AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达显著高于对照组,不同分级胶质瘤的RNA AGAP2-AS1 mRNA表达量、Ras及ERK1/2蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),转染siRNA AGAP2-AS1的U87及U251细胞克隆数显著低于siRNA-NC,差异有统计学意义(P<0.05)。结论长链非编码RNA AGAP2-AS1可通过调控ERK/MAPK信号通路影响胶质瘤的增殖,下调AGAP2-AS1可显著影响胶质瘤细胞的克隆形成能力。

口腔鳞癌组织中长链非编码RNA对其发生发展机制的影响

口腔鳞状细胞癌是目前最常见的口腔恶性肿瘤之一,在近年来发病率逐年升高并有年轻化的趋势。OSCC的恶性程度高,OSCC患者的总体生存率在过去的很长一段时间并未得到有效改善,始终维持在50%左右。既往的口腔肿瘤研究者们多试图以优化临床治疗方法为突破口。他们花费大量的人力、物力在对治疗方法不断优化的探索上,他们不仅对手术、放疗、化疗等方法进行优化,同时也在探索治疗方法的优化组合。以期达到提高患者的生存率的目的,但让研究者感到遗憾的是优化临床治疗方案的结果目前并不理想。近年来随着分子生物学迅猛发展,大量研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)在肿瘤细胞中异常表达,并在肿瘤发展进程中扮演重要的角色。因此,许多研究者逐渐意识到可以通过深入研究LncRNA在OSCC的分子发生机制层面的作用,进而分析OSCC发生和发展的可能机制。积极探索临床治疗OSCC的有效分子靶点对促进OSCC的早期发现、诊断及治疗都具有积极的意义。所以本文主要探讨在分子层面LncRNA对口腔鳞癌发生发展机制的影响的研究进展。

小鼠CDC26基因短发夹RNA重组腺病毒载体的构建与表达分析

目的:构建靶向CDC26基因的短发夹RNA(shRNA)重组腺病毒载体,干扰小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中CDC26的表达。方法:设计小鼠靶向CDC26基因的shRNA,插入穿梭质粒pENTRY-EF1a-EGFP-Mir30,通过Gateway系统获得重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA;线性化后转染HEK293A细胞,进行病毒包装;用包装的重组腺病毒感染MEF,24 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后用荧光定量PCR法检测MEF内CDC26 mRNA的变化,以检测所设计shRNA的敲低效率。结果:构建的重组腺病毒载体pAd-CDC26-shRNA经酶切鉴定后正确;转染HEK293A细胞后8 d,观察到细胞病变及GFP的大量表达,表明重组腺病毒包装成功;感染MEF后,实时荧光定量PCR检测表明,细胞内CDC26 mRNA的水平较对照组敲低了73.14%,腺病毒注射7 d后,注射CDC26 shRNA的小鼠血糖较对照组明显降低。结论:构建了具有较高敲低效果的小鼠CDC26基因shRNA重组腺病毒,并且具有体内活性。

胶质瘤中Circular RNA PRKCI的表达及预后相关影响因素研究

目的:探讨Circular RNA PRKCI在脑胶质瘤中的表达及其预后意义。方法:通过定量逆转录聚合酶链式反应检测Circular RNA PRKCI在61例脑胶质瘤组织及正常脑组织中的表达水平,并绘制Kaplan-Meier曲线、对数秩检验和Cox分析,以阐明Circular RNA PRKCI的临床意义。结果:与正常组织相比,Circular RNA PRKCI在胶质瘤患者中的表达增高(P<0.001),且Circular RNA PRKCI表达上调与WHO分级的增高有关(P=0.017)。Kaplan-Meier分析结果显示,Circular RNA PRKCI高表达患者的5年存活率明显低于低表达Circular RNA PRKCI的患者(P=0.0309)。Cox单因素和多因素分析显示,Circular RNA PRKCI过度表达(P<0.001)可作为胶质瘤患者预后的独立影响因素。结论:Circular RNA PRKCI在胶质瘤组织中高表达,且高Circular RNA PRKCI表达的患者预后不良,提示Circular RNA PRKCI可能是胶质瘤患者相关预后判断和治疗的潜在靶点。

慢性丙肝患者血清IL-6、IL-10、IL-32水平与HCV-RNA载量关系研究

目的探究慢性丙肝患者血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-32(IL-32)水平与丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)载量的关系。方法选择我院于2015年3月至2018年3月收治的慢性丙型肝炎(CHC)患者90例为CHC组,同期以90例来我院进行健康体检的健康者为健康组,采用ELISA法检测所有受试者的血清IL-6、IL-10、IL-32水平,采用PE5700荧光PCR仪和实时荧光定量聚合酶链反应法检测CHC组患者的HCV-RNA载量,对比CHC组患者和健康组受试者的血清IL-6、IL-10、IL-32水平;对不同病毒载量的CHC患者血清IL-6、IL-10、IL-32水平进行对比,并分析病毒载量与检测指标之间的相关性。结果经对比,CHC组患者的血清IL-6、IL-10、IL-32水平均显著高于健康组受试者(P<0.05);随着病毒载量的不断增大,CHC患者的IL-6、IL-10、IL-32水平均显著升高(P<0.05);通过Pearson相关性分析结果显示,血清IL-6、IL-10、IL-32水平均与HCV-RNA载量显著相关,且为正相关。结论慢性丙肝患者血清IL-6、IL-10、IL-32水平与HCV-RNA载量呈正相关,可通过检测机体的血清IL-6、IL-10、IL-32水平了解丙型肝炎的发病机制和慢性化过程,对临床诊断慢性肝炎、了解疾病进展、评价治疗效果等意义重大。