微RNA-705对MC3T3-E1细胞成骨分化能力的影响

目的：观察微RNA（miR）-705对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化能力的影响。方法：将转染了miR-705模拟物、抑制物、对照物的Mc3T3-E1细胞加入成骨诱导液，在其成骨诱导7d时采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测ALP的活性；在成骨诱导14d时，用RT-PCR和蛋白质印迹技术检测Runt相关转录因子2（Runx2）和骨钙素（OCN）的mRNA及蛋白表达水平；在成骨诱导21d时，以茜素红染色观察钙结节形成情况并作定量分析。结果：成骨诱导7d时，模拟物组ALP活性降低，而抑制物组ALP活性升高（均P〈0．05）；成骨诱导14d时，模拟物组Runx2和OCNmRNA及蛋白表达水平较对照物组降低，而抑制物组则相反（均P〈0．05）；成骨诱导21d时，模拟物组钙结节最小，结节形成量下降，抑制物纽钙结节较大且形成量较多（均P〈0．05）。结论：miR-705对Mc313-E1细胞成骨分化过程具有抑制作用。

RNA干扰对低分化鼻咽癌细胞血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的研究血管内皮生长因子(vascular endothe-lial growth factor,VEGF)的特异性小片段干扰RNA(siRNA)对低分化鼻咽癌细胞(nasopharyngeal carcinoma cell line,CNE-2Z)VEGF表达的抑制作用,为视网膜新生血管的治疗提供新的途径。方法体外培养人CNE-2Z,并分成正常氧状态培养组(20%)和低氧(5%)培养组。采用脂质体(LF2000)将VEGFsiRNA转染两组细胞,并采用免疫细胞化学和ELISA法检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF蛋白质表达的差异。结果正常氧状态下培养的CNE-2Z细胞有VEGF165及VEGF121蛋白质的表达,主要见于细胞浆中(棕色颗粒),低氧状态下VEGF的表达增多。ELISA结果显示,正常氧状态下未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为:419.72pg/ml、410.61 pg/ml、320.76 pg/ml;低氧状态下VEGF165的含量分别为:805.61 pg/ml、798.81 pg/ml、496.56 pg/ml,转染VEGFsiRNA组VEGF的表达下调。结论VEGFsiRNA有效地、特异地抑制CNE-2Z细胞VEGF蛋白质的表达,有望成为防治视网膜血管新生性病变的一种有效方法。

靶向RAD18的小干扰RNA对人食管鳞癌ECA-109细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的：研究靶向RAD18基因的小干扰RNA （ siRNA ）对食管鳞癌细胞ECA-109增殖和化疗敏感性的影响。方法：合成针对 RAD18基因的 siRNA （ RAD18-siRNA），通过脂质体将其转染人食管鳞癌ECA-109细胞株，采用荧光定量PCR方法检测ECA-109 RAD18和CyclinD1 mRNA的表达，蛋白质印迹法检测其RAD18和CyclinD1蛋白的表达；应用CCK-8法检测ECA-109细胞的增殖和化疗药物对ECA-109细胞存活率的影响，流式细胞术检测ECA-109细胞周期；采用Pearson检验分析RAD18与CyclinD1基因表达的相关性。结果：与未转染组比较， RAD18-siRNA组RAD18表达明显降低（P＜0．05）。 RAD18-siRNA组细胞增殖抑制（P＜0．05），G1期细胞数增多，G2／M期细胞数减少（P＜0．05）。不同浓度顺铂或5-氟尿嘧啶处理细胞后，两组细胞的存活率均下降（均P＜0．05），但RAD18-siRNA组细胞半数抑制浓度较未转染组减少（ P＜0．05）。在食管鳞癌组织中， RAD18基因mRNA的表达与CyclinD1基因mRNA的表达呈正相关（ r＝0．478，P＜0．01）。结论：下调RAD18表达能够抑制食管鳞癌细胞的增殖，提高其对化疗药物的敏感性；CyclinD1在食管鳞癌中的表达水平可能参与这一过程。

miR-122对乙型肝炎病毒抗原表达的影响

目的:探讨miR-122对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg表达的影响。方法:设计合成2条miR-122的反义寡核苷酸(anti-miR-122,LNA-antimiR-122)、hsa-miR-122以及阴性对照anti-GFP,脂质体介导转染HepG2.2.15细胞。取细胞转染24 h、48 h后的培养液,时间分辨荧光免疫法检测anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组、hsa-miR-122组以及anti-GFP组HBsAg和HBeAg的表达,定量PCR检测各组HBV DNA的表达。转染48 h后,提取细胞内总RNA,Taqman技术实时荧光定量PCR检测各组miR-122的表达。结果:①转染48 h后anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组miR-122表达明显受抑制,低于阴性对照组(P<0.001)。hsa-miR-122组miR-122水平较阴性对照组升高(P<0.001)。②hsa-miR-122组HBsAg、HBeAg表达均低于阴性对照组(P<0.001);anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组HBsAg、HBeAg表达均高于阴性对照组(P<0.001)。③转染24 h与48 h后各组HBV DNA表达与阴性对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-122可调节乙型肝炎病毒抗原表达。

miR-122对IFN-α抗HCV效应的影响

目的:探讨miR-122对α-干扰素(IFN-α)抗丙型肝炎病毒(HCV)效应的影响。方法:给感染HCV的Huh7.5.1予miR-122模拟物(20 nmol/L、100 nmol/L、400 nmol/L)和(或)IFN-α(1 000 IU/ml)处理,采用荧光定量PCR检测HCV RNA水平;给Huh7.5.1细胞感染不同数量HCV(107拷贝,106拷贝,105拷贝)和(或)IFN-α处理,荧光定量PCR检测HCV RNA水平。结果:IFN-α以时间依赖方式抑制HCV复制,在48 h时使HCV RNA下降了83%。miR-122模拟物呈剂量依赖性促进HCV RNA复制(P<0.05)。IFN-α的抗病毒效应与miR-122模拟物水平(20 nmol/L、100nmol/L、400 nmol/L)成反比,与对照组比较有显著性差异(73.3%±3.5%,64.67%±5.5%,56.33%±5.1%vs 84%±4.5%,后两组P<0.05)。IFN-α的抗病毒效应与HCV载量呈反比(105拷贝组vs 107拷贝组,P<0.05)。结论:在细胞感染模型中,miR-122促进HCV的复制,并且,miR-122的表达可部分中和IFN-α的抗HCV效应。

BP素治疗晚期胰腺癌疗效观察

目的观察BP素对晚期胰腺癌患者的临床疗效。方法将40例胰腺癌患者分为BP素治疗组和对照组各20例,其中BP素治疗组每天用100mg BP素+100ml 0.9%氯化钠注射液静脉滴注,连用30d,对照组常规对症治疗。观察两组患者体重、生活质量、临床症状、瘤体大小、免疫功能、肿瘤标记物、不良反应情况。结果治疗后两组患者体重、生活质量、临床症状、瘤体大小、免疫功能差异均有统计学意义。结论 BP素治疗能够改善晚期胰腺癌患者的临床症状,有稳定瘤体、提高生活质量、保护免疫功能的作用。

两种不同溶媒皮下注射抗胃癌免疫核糖核酸效果观察

目的对比两种不同溶媒皮下注射抗胃癌免疫核糖核酸粉针的效果,寻找减轻胃癌患者皮下注射抗胃癌免疫核糖核酸注射用粉针疼痛和局部反应的有效方法。方法采用双盲目法进行自身对照观察,即单日用灭菌注射用水做溶媒,双日用0.9%的氯化钠注射液做溶媒。对单日、双日两组的临床资料进行比较分析。结果用0.9%的氯化钠注射液做溶媒双日注射疼痛反应小于单日用灭菌注射用水做溶媒皮下注射,而且比较差异有统计学意义(P<0.01);局部反应无统计学意义(P>0.05)。结论采用0.9%的氯化钠注射液做溶媒皮下注射抗乳腺免疫核糖核酸注射用粉针,能有效缓解患者的疼痛和局部反应,是一种安全可靠的溶媒。