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大肠杆菌RNA分子伴侣Hfq与DsrA和rpoS作用机制的研究进展 被引量:1
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作者 王丽君 王维维 +2 位作者 龚庆国 吴季辉 施蕴渝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第7期627-633,共7页
RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然... RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然而,Hfq使用何种机制来促进sRNA和mRNA配对一直有两种并不互斥的模型存在:Hfq远侧和近侧两个表面同时结合sRNA和mRNA,使得两条RNA相互靠近,便于形成碱基配对;Hfq可能结合一条或者两条RNA,改变它们的二级结构或者三级结构,从而促进sRNA-mRNA配对的实现.最近的研究报道,成功在体外捕捉到了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物,测定了AU6A-Hfq-A7三元复合物的晶体结构,并且在大肠杆菌体内证实了三元复合物的形成对于Hfq帮助sRNA DsrA激活mRNA rpoS的翻译是重要的.本文以sRNA DsrA和mRNA rpoS为例综述了蛋白质Hfq与RNA的结合特性,同时也讨论了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物的存在对于研究sRNA介导的调控机制的一些启示. 展开更多
关键词 hfq rna分子伴侣 Srna DSRA Mrna RPOS hfq-rna复合物晶体结构 翻译激活
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单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子hfq的基因克隆、表达及纯化
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作者 彭叶龙 乔军 +6 位作者 孟庆玲 谢堃 陈诚 刘田莉 马玉 才学鹏 陈创夫 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期80-84,共5页
为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功... 为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功构建pET-32a(+)-hfq原核表达载体。然后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG进行诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析,并采用Ni-NTA纯化目的蛋白。结果显示:克隆的hfq基因全长234 bp,编码77个氨基酸,通过SDS-PAGE可以检测到27 kDa的蛋白特异性条带;并从上清中纯化得到了Hfq融合蛋白。为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 hfq基因 srna伴侣分子 克隆 表达 纯化
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施蕴渝院士新成果:RNA与分子伴侣协同作用新模式
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《生物加工过程》 CAS CSCD 2012年第2期54-54,共1页
中国科技技术大学生命科学学院的施蕴渝院士在新研究中揭示了大肠杆菌nfq六聚体在与小RNADsrA结合过程中协同作用的新模式。相关研究论文发表在Genes & Development》上。在这篇论文中,研究人员解出了nfq与DsrA上一段RNA片段(这是一... 中国科技技术大学生命科学学院的施蕴渝院士在新研究中揭示了大肠杆菌nfq六聚体在与小RNADsrA结合过程中协同作用的新模式。相关研究论文发表在Genes & Development》上。在这篇论文中,研究人员解出了nfq与DsrA上一段RNA片段(这是一段Hfq与DsrA结合区域)AU6A(AUUUUUUA)、与ADP三元复合物的晶体结构以及Hfq与ADP二元复合物的晶体结构。 展开更多
关键词 rna片段 协同作用 分子伴侣 院士 三元复合物 生命科学学院 论文发表 晶体结构
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伴侣蛋白Hfq对禽致病性大肠杆菌致病力的影响
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作者 陈睿 王忠星 +2 位作者 姜敏 诸葛祥凯 戴建君 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第5期105-112,共8页
为了探究小RNA(sRNA)伴侣蛋白Hfq在禽致病性大肠杆菌(APEC)感染致病过程中的作用,本研究采用Red同源重组法构建了禽致病性大肠杆菌FY26的hfq缺失株FY26Δhfq,通过测定缺失株生长曲线、生物被膜形成、体内定殖、胞内存活等能力来判定sRN... 为了探究小RNA(sRNA)伴侣蛋白Hfq在禽致病性大肠杆菌(APEC)感染致病过程中的作用,本研究采用Red同源重组法构建了禽致病性大肠杆菌FY26的hfq缺失株FY26Δhfq,通过测定缺失株生长曲线、生物被膜形成、体内定殖、胞内存活等能力来判定sRNA伴侣蛋白Hfq对APEC致病力的影响。在体外,生物被膜形成能力直接决定着细菌对外界环境的抵抗能力,而在细菌进入体内后,其生长速率、黏附、定殖、吞噬细胞内的存活等能力均会直接影响其致病力。在进行了缺失株FY26Δhfq与野生株FY26的生长曲线测定试验、生物被膜形成能力测定试验、感染雏鸡试验、雏鸡体内定殖与侵袭试验、DF-1细胞黏附及HD11吞噬细胞内存活试验后,结果表明:hfq缺失株相较野生株其生长速率下降,生物背膜形成能力降低了18.6%,感染雏鸡时毒力降低,感染7 d后存活率为80%,在雏鸡体内定殖侵袭减弱,体内竞争能力下降至33.2%,对DF-1细胞的黏附能力降低,HD11吞噬细胞内的存活能力下降,单个细胞内存活的细菌数大多少于6个。研究表明,sRNA伴侣蛋白Hfq对APEC的致病力起着关键的正向调控作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌rna伴侣蛋白 Srna hfq APEC 毒力
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细菌RNA稳定性调控相关元件的研究进展 被引量:1
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作者 黄义 张维 燕永亮 《生物技术进展》 2018年第5期376-382,461,共8页
RNA降解体(细菌RNA降解的主要执行者)是一种多亚基的蛋白质复合物,主要由RNA解螺旋酶、聚核苷酸磷酸化酶(polynucleotide phosphorylase,PNPase)、内切核酸酶(ribonuclease E,RNase E)以及糖酵解途径中的烯醇化酶、磷酸果糖激酶等组成,... RNA降解体(细菌RNA降解的主要执行者)是一种多亚基的蛋白质复合物,主要由RNA解螺旋酶、聚核苷酸磷酸化酶(polynucleotide phosphorylase,PNPase)、内切核酸酶(ribonuclease E,RNase E)以及糖酵解途径中的烯醇化酶、磷酸果糖激酶等组成,参与核糖体RNA(ribosome RNA,rRNA)的加工以及信使RNA(messenger RNA,mRNA)的降解。此外,RNA分子伴侣Hfq和调控小RNA(small RNA,sRNA)在RNA稳定性调控中也发挥着重要作用。综述了细菌RNA稳定性调控相关功能元件,特别是降解体蛋白及RNA分子伴侣Hfq的最新进展,以期为研究细菌RNA稳定性及其参与的代谢调控提供理论参考。 展开更多
关键词 rna降解体 rna分子伴侣hfq 非编码rna rna稳定性 内切核酸酶
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CHOP疗法对T细胞淋巴瘤Hut 78和HH细胞环状RNA circ_001569及其下游蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 康庆伟 阎姝 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第1期10-13,共4页
目的探索CHOP疗法对T细胞淋巴瘤细胞中环状RNA circ_001569及其下游功能蛋白的影响。方法分别采用CHOP疗法中的4种化疗药物[环磷酰胺(1μmol/L)、羟基柔红霉素(0.2μmol/L)、长春新碱(1μmol/L)、泼尼松(1μmol/L)]处理T细胞淋巴瘤Hut78... 目的探索CHOP疗法对T细胞淋巴瘤细胞中环状RNA circ_001569及其下游功能蛋白的影响。方法分别采用CHOP疗法中的4种化疗药物[环磷酰胺(1μmol/L)、羟基柔红霉素(0.2μmol/L)、长春新碱(1μmol/L)、泼尼松(1μmol/L)]处理T细胞淋巴瘤Hut78和HH细胞,以常规培养细胞作为对照。分组处理24 h后检测各组细胞增殖情况,采用特异性逆转录环状RNA和茎环法逆转录miRNA,实时定量PCR检测各组circRNA_001569、miR-145和BAG4 mRNA的表达水平,Western Blot检测BAG4蛋白表达。结果 4种药物均可显著抑制Hut78细胞和HH细胞增殖(P<0.05)。经过羟基柔红霉素、长春新碱处理后,Hut78和HH细胞circRNA_001569的表达水平降低,其下游分子miR-145表达上调,BAG4 mRNA和蛋白表达下调。结论 CHOP疗法治疗T细胞淋巴瘤的过程中,环状RNAcircRNA_001569可能起到了重要的调控作用。 展开更多
关键词 淋巴瘤 T细胞 抗肿瘤联合化疗方案 环状rna circrna_001569 BAG家族分子伴侣蛋白调节因子4
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ncRNA伴侣分子hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境适应能力的影响 被引量:3
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作者 卢海亭 乔军 +6 位作者 孟庆玲 彭叶龙 陈诚 刘田莉 谢堃 才学鹏 陈创夫 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1174-1178,共5页
Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌(LM)的生命活动.利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42... Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌(LM)的生命活动.利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42℃和氯霉素压力下进行同源重组,筛选LM-SB5 hfq基因缺失株,并分析hfq基因缺失株在不同温度、pH、高盐、乙醇、H_2O_2、Triton X-100胁迫环境下的适应能力.结果成功构建得到一株遗传性稳定的LM hfq基因缺失株LM-Δhfq;LM-Δhfq对5%NaCl、3.5%乙醇、0.1%H_2O_2的适应能力显著降低,对30℃、37℃、42℃、pH 4、pH 9及Triton X-100的适应能力没有显著变化,表明Hfq参与了LM对高盐、乙醇、H_2O_2胁迫环境的适应过程.本研究为进一步揭示Hfq蛋白在参与ncRNA调控细菌生命活动的机制奠定了基础. 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 非编码rna hfq基因 同源重组 分子伴侣
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AtFKBP53 is a histone chaperone required for repression of ribosomal RNA gene expression in Arabidopsis 被引量:6
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作者 Hong Li Sheng Luan 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期357-366,共10页
Chromatin structure is important for controlling gene expression, but mechanisms underlying chromatin remodel- ing are not fully understood. Here we report that an FKBP (FK506 binding protein) type immunophilin, AtF... Chromatin structure is important for controlling gene expression, but mechanisms underlying chromatin remodel- ing are not fully understood. Here we report that an FKBP (FK506 binding protein) type immunophilin, AtFKBP53, possesses histone chaperone activity and is required for repressing ribosomal gene expression in Arabidopsis. The At- FKBP53 protein is a multidomain FKBP with a typical peptidylprolyl isomerase (PPIase) domain and several highly charged domains. Using nucleosome assembly assays, we showed that AtFKBP53 has histone chaperone activity and the charged acidic domains are sufficient for the activity. We show that AtFKBP53 interacts with histone H3 through the acidic domains, whereas the PPIase domain is dispensable for histone chaperone activity or histone binding. Ri- bosomal RNA gene (18S rDNA) is overexpressed when AtFKBP53 activity is reduced or eliminated in Arabidopsis plants. Chromatin immunoprecipitation assay showed that AtFKBP53 is associated with the 18S rDNA gene chro- matin, implicating that AtFKBP53 represses rRNA genes at the chromatin level. This study identifies a new histone chaperone in plants that functions in chromatin remodeling and regulation of transcription. 展开更多
关键词 核糖体rna基因 组蛋白H3 分子伴侣 拟南芥 镇压 染色质免疫沉淀 PPIASE 染色质结构
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水稻耐热生长的保护者--RNA解旋酶TOGR1
9
作者 王冬 薛勇彪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期273-274,共2页
近一个世纪以来的全球变暖现象已对世界范围的粮食生产造成了越来越严重的影响,而很多植物也在长期的进化过程中形成了多重机制以应对包括高温在内的外界环境变化,因此研究植物的耐热机制,进而挖掘耐热基因资源对农作物分子设计与育种... 近一个世纪以来的全球变暖现象已对世界范围的粮食生产造成了越来越严重的影响,而很多植物也在长期的进化过程中形成了多重机制以应对包括高温在内的外界环境变化,因此研究植物的耐热机制,进而挖掘耐热基因资源对农作物分子设计与育种有着重要意义,也越来越受到国内外研究者的关注。近期有研究表明,含有组蛋白H2A.Z的核小体能够感知环境温度升高并在转录水平调控热胁迫应答基因的表达。 展开更多
关键词 rna解旋酶TOGR1 水稻种植区 全球变暖现象 解旋酶 转录水平调控 分子伴侣 核小体 基因资源 粮食生产 应答基因
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RNA伴侣分子的研究进展 被引量:1
10
作者 孙卫国 曹国军 +1 位作者 杨光 邵宁生 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期347-350,共4页
RNA只有折叠成天然构像才能具有正常的功能。RNA不是孤立存在的 ,它总是与蛋白质结合成复合物发挥作用。在动力学和热力学上 ,RNA易于形成错误折叠。RNA伴侣分子可以帮助RNA正确折叠或抑制RNA错误折叠 ,可以使错误折叠的RNA构像解链并... RNA只有折叠成天然构像才能具有正常的功能。RNA不是孤立存在的 ,它总是与蛋白质结合成复合物发挥作用。在动力学和热力学上 ,RNA易于形成错误折叠。RNA伴侣分子可以帮助RNA正确折叠或抑制RNA错误折叠 ,可以使错误折叠的RNA构像解链并形成正确的空间折叠。文章对RNA伴侣分子的分子特性和作用机制进行了探讨 ,介绍了几种常见RNA伴侣分子活性鉴定的策略 ,列举了几种重要的RNA伴侣分子并论述了RNA伴侣分子的意义及当前研究中存在的问题。 展开更多
关键词 rna伴侣分子 rna折叠 天然结构
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PAQosome各亚基的基本功能研究概况
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作者 石榴 韩铭 +3 位作者 袁晓雪 叶峰 成军 蔺淑梅 《医学综述》 CAS 2023年第18期3549-3554,共6页
PAQosome可协助热激蛋白90组装大量的大型多亚基蛋白复合物,并参与蛋白质合成、核糖体生物发生、转录、剪接等基本细胞功能。目前,PAQosome各亚基作用的相关研究主要集中在肿瘤方面,其在多数肿瘤中上调,且与肿瘤的发生、发展、预后密切... PAQosome可协助热激蛋白90组装大量的大型多亚基蛋白复合物,并参与蛋白质合成、核糖体生物发生、转录、剪接等基本细胞功能。目前,PAQosome各亚基作用的相关研究主要集中在肿瘤方面,其在多数肿瘤中上调,且与肿瘤的发生、发展、预后密切相关。此外,其还与阿尔茨海默病的发生、淋巴细胞和生殖细胞的发育、纤维化的形成有关,而上述功能的实现依赖于PAQosome各亚基的功能差异。因此,深入认识PAQosome各亚基的基本功能有助于进一步指导后续PAQosome在非肿瘤疾病中功能的研究。 展开更多
关键词 PAQosome 前折叠亚单位 p53和DNA损伤调控分子1 非常规预折叠rna聚合酶Ⅱ亚基5相互作用体 伴侣样普遍表达的预折叠蛋白 天冬酰胺合成酶结构域1上游开放读码框
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《基因与发育》:研究揭示RNA与分子伴侣协同作用新模式
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《现代生物医学进展》 CAS 2012年第8期I0004-I0004,共1页
来自中国科技大学生命科学学院的研究人员在新研究中揭示了大肠杆菌Hfq六聚体在与小RNA DsrA结合过程中协同作用的新模式。相关研究论文”Cooperation of Escherichia coil Hfq hexamers in DsrA binding”发表在国际分子和发育生物学... 来自中国科技大学生命科学学院的研究人员在新研究中揭示了大肠杆菌Hfq六聚体在与小RNA DsrA结合过程中协同作用的新模式。相关研究论文”Cooperation of Escherichia coil Hfq hexamers in DsrA binding”发表在国际分子和发育生物学权威学术期刊《基因与发育》(Genes&Development)P。 展开更多
关键词 发育生物学 协同作用 分子伴侣 rna 基因 生命科学学院 中国科技大学 大肠杆菌
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目的基因全长cDNA合成及克隆技术进展 被引量:6
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作者 张光祥 马正强 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第5期1-5,共5页
在基因克隆、基因功能和表达调控研究中 ,获得目的基因尤其是表达丰度低的基因全长cDNA仍然是一个技术难题。本文对近年来有关反转录过程中影响全长cDNA合成的因素与对策的研究进行了总结 ,特别对消除mRNA二级结构阻碍的方法及其效果、... 在基因克隆、基因功能和表达调控研究中 ,获得目的基因尤其是表达丰度低的基因全长cDNA仍然是一个技术难题。本文对近年来有关反转录过程中影响全长cDNA合成的因素与对策的研究进行了总结 ,特别对消除mRNA二级结构阻碍的方法及其效果、较高反应温度和金属离子对模板mRNA完整性的影响、RNA分子伴侣在反应温度不变的情况下改善cDNA第一链质量的效果等作了较为详细的介绍。此外 ,还介绍了确保具有完整5′端的cDNA进入后续研究的几种新方法。 展开更多
关键词 反转录 rna分子伴侣 目的基因 全长CDNA 克隆
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异源表达古菌TRAM基因增强水稻的耐旱性 被引量:1
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作者 陈巍 李华丽 邱金龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1676-1685,共10页
干旱会直接影响水稻的生长发育,导致其产量和品质下降。在水稻中异源表达细菌RNA分子伴侣Csp能够显著提高水稻的耐旱能力,并且不影响水稻的正常生长。古菌中也发现具有类似细菌分子伴侣Csp功能的TRAM (TRM2 and MiaB)蛋白,且古菌的DNA... 干旱会直接影响水稻的生长发育,导致其产量和品质下降。在水稻中异源表达细菌RNA分子伴侣Csp能够显著提高水稻的耐旱能力,并且不影响水稻的正常生长。古菌中也发现具有类似细菌分子伴侣Csp功能的TRAM (TRM2 and MiaB)蛋白,且古菌的DNA复制、转录和翻译等过程与真核生物有着更为相似的调控方式,然而,古菌中RNA分子伴侣蛋白能否调控植物耐旱能力还未见报道。我们选取了嗜冷甲烷古菌Methanolobus psychrophilus R15中两个TRAM蛋白在水稻中进行研究,发现在水稻中过量表达Mpsy3066和Mpsy0643两个TRAM蛋白均能显著提高水稻苗期和成株期时对干旱胁迫的耐受能力。同时,我们在水稻原生质体中验证了TRAM蛋白可以发挥其分子伴侣的功能消除RNA的错误折叠对翻译的影响,这可能是TRAM转基因植物发挥其耐旱能力的作用机制。该工作初步展示了异源表达古菌TRAMs可以作为提高水稻耐旱能力的一种有效手段。 展开更多
关键词 水稻 干旱胁迫 rna分子伴侣 古菌 TRAM
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诺如病毒复制的“拉链头”
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《科学中国人》 2018年第5期14-14,共1页
中国科学院武汉病毒研究所周溪研究组发现诺如病毒3号非结构性蛋白(NS3)蛋白具有RNA解旋酶及分子伴侣功能,为抗诺如病毒药物的研发提供了新思路,研究成果发表于《病毒学杂志》.作为急性肠炎的主要致病原,诺如病毒每年约感染6.84亿人,... 中国科学院武汉病毒研究所周溪研究组发现诺如病毒3号非结构性蛋白(NS3)蛋白具有RNA解旋酶及分子伴侣功能,为抗诺如病毒药物的研发提供了新思路,研究成果发表于《病毒学杂志》.作为急性肠炎的主要致病原,诺如病毒每年约感染6.84亿人,导致约21万人的死亡. 展开更多
关键词 病毒复制 中国科学院武汉病毒研究所 拉链头 结构性蛋白 rna解旋酶 分子伴侣 急性肠炎 研究成果
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