circRNA CPSF6核内转移促进同型半胱氨酸诱导的滋养细胞凋亡

目的探讨环状RNA剪切及多聚腺苷酸化特异因子6(circRNA CPSF6)在同型半胱氨酸(Hcy)致滋养细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞,分为对照组(0 mmol/L Hcy处理)与1 mmol/L Hcy处理组。采用免疫荧光细胞化学染色检测滋养细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达,Western blot法检测caspase-3蛋白水平;实时定量PCR检测circRNA CPSF6的mRNA表达水平;同时,运用小干涉RNA(siRNA)技术敲低滋养细胞circRNA CPSF6表达,Western blot法检测细胞caspase-3、caspase-9、B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)表达;实时定量PCR检测circRNA CPSF6在Hcy处理前后滋养细胞胞质/胞核中的表达水平。结果与对照组相比,Hcy处理组caspase-3表达明显增加,circRNA CPSF6 mRNA表达上调;敲低circRNA CPSF6后,caspase-3表达降低,线粒体凋亡途径被抑制;正常培养的滋养细胞中circRNA CPSF6在胞质大量表达,而给予Hcy处理后,circRNA CPSF6主要在胞核表达。结论通过circRNA CPSF6核内转移激活线粒体凋亡途径促进Hcy诱导的滋养细胞凋亡。

结直肠癌组织中SEC62、LSM12表达与临床病理参数、上皮间质转化及预后的关系

目的分析结直肠癌(CRC)组织中前蛋白易位因子(SEC62)、RNA剪切因子(LSM12)表达与临床病理参数、上皮间质转化(EMT)及预后的关系。方法选取92例CRC患者,术中收集CRC组织及癌旁组织。用实时荧光定量PCR法检测SEC62、LSM12 mRNA及EMT相关基因[E-钙黏蛋白(E-cadherin/N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist转录因子(TWIST)基因],用免疫组化法检测SEC62、LSM12蛋白。分析结直肠癌组织中SEC62、LSM12 mRNA表达与临床病理参数、EMT相关基因的关系。从癌症基因组图谱数据库(TCGA,https://portal.gdc.cancer.gov)下载643例CRC患者的癌组织RNAseq数据,分析SEC62、LSM12 mRNA表达与CRC患者5年总生存率的关系。结果与癌旁组织比较,CRC组织中SEC62、LSM12、N-cadherin、TWIST mRNA表达高,E-cadherin mRNA表达低,SEC62、LSM12蛋白阳性表达率高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。不同TNM分期、分化程度及有无淋巴结转移的CRC组织中SEC62、LSM12 mRNA表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。CRC组织中SEC62 mRNA表达与N-cadherin、TWIST mRNA表达呈正相关(r分别为0.643、0.721,P均<0.05),与E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.684,P<0.05)。CRC组织中LSM12 mRNA表达与N-cadherin、TWIST mRNA表达呈正相关(r分别为0.715、0.786,P均<0.05),与E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.687,P<0.05)。根据SEC62、LSM12 mRNA表达的中位数将TCGA中643例CRC患者分为SEC62 mRNA高表达者(>3.12,n=322)、低表达者(≤3.12,n=321),LSM12 mRNA高表达者(>2.57,n=321)、低表达者(≤2.57,n=322)。SEC62 mRNA高表达者5年总生存率低于SEC62 mRNA低表达者(Log-rankχ^(2)=5.960,HR=1.547,95%CI:1.225~1.820,P<0.05);LSM12 mRNA高表达者5年总生存率低于LSM12 mRNA低表达者(Log-rankχ^(2)=6.012,HR=1.649,95%CI:1.253~1.834,P<0.05)。结论CRC组织中SEC62、LSM12高表达,二者表达变化与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移、EMT及预后有关。