RNA结合基序单链相互作用蛋白3在人乳头瘤病毒16型相关宫颈癌细胞和鳞状细胞癌组织中的表达

目的探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)在人乳头瘤病毒16型(HPV16)相关宫颈癌细胞和鳞状细胞癌组织中的表达。方法通过Western blotting方法检测RBMS3在HPV16 E7表达阳性和阴性宫颈癌细胞中的表达,通过免疫组织化学(IHC)染色方法检测RBMS3在HPV16 E7表达阳性和阴性宫颈鳞状细胞癌组织中的表达,并分析RBMS3和HPV16 E7表达的关系。结果 Western blotting结果显示,HPV16 E7在宫颈癌C33-A细胞中不表达,而HPV16 E7在宫颈癌Si Ha细胞中表达;C33-A细胞中RBMS3的表达显著高于Si Ha细胞(P<0.01)。IHC结果显示,RBMS3在HPV16 E7表达阳性宫颈鳞状细胞癌组织中的表达显著低于HPV16 E7表达阴性宫颈鳞状细胞癌组织(P<0.01),RBMS3和HPV16 E7表达呈负相关(P<0.01)。结论 HPV16相关宫颈鳞状细胞癌组织中RBMS3的表达与HPV16 E7的表达呈负相关,RBMS3可能与HPV16相关宫颈癌的发生有关。

三角形五肽重复蛋白研究进展

三角形五肽重复(PPR)蛋白是植物中一个庞大的蛋白家族,能够从RNA剪切、编辑、降解和翻译等多个方面影响细胞器中RNA的新陈代谢,PPR蛋白由连续的PPR基序构成,蛋白呈右手螺旋结构,具有与RNA单链结合的能力。随着研究的深入,人工设计合成PPR蛋白技术已经成熟,PPR蛋白与RNA结合的规律已较为清晰,人工PPR蛋白有望被开发成为细胞器中介导RNA调控的新型生物技术。

胃腺癌组织RBMS1、AKAP12表达变化及其临床意义

目的探讨胃腺癌组织RNA结合基序单链相互作用蛋白1(RBMS1)、A激酶锚定蛋白12(AKAP12)表达变化及其临床意义。方法选择胃腺癌患者102例,取手术切除的胃癌组织及其癌旁组织(距肿瘤组织边缘5 cm以上,经病理检查明确为正常胃组织),采用免疫组化法检测RBMS1、AKAP12表达。比较胃癌组织与癌旁正常组织RBMS1、AKAP12阳性表达率,采用Pearson线性相关分析法分析胃癌组织RBMS1阳性表达与AKAP12阳性表达的关系。分析胃癌组织RBMS1、AKAP12阳性表达与临床病理特征的关系以及二者表达与预后的关系。结果胃癌组织RBMS1阳性表达率显著高于癌旁正常组织,AKAP12阳性表达率显著低于癌旁正常组织(χ^(2)分别为75.583、53.204,P均<0.05)。胃癌组织RBMS1阳性表达与AKAP12阳性表达呈负相关关系(r=-0.625,P<0.05)。胃癌组织RBMS1、AKAP12阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤最大径、肿瘤部位、组织分化程度无关(P均>0.05)。所有患者术后随访2~36个月,中位随访时间25.30个月。随访期间失访1例,死亡30例,3年总体生存率为70.30%(71/101)。胃癌组织RBMS1阳性表达者与阴性表达者3年总体生存率分别为66.20%(47/71)、80.00%(24/30),胃癌组织AKAP12阳性表达者与阴性表达者3年总体生存率分别为82.14%(23/28)、65.75%(48/73)。胃癌组织RBMS1阳性表达者3年总体生存率显著低于其阴性表达者(χ^(2)=4.310,P<0.05),胃癌组织AKAP12阳性表达者3年总体生存率显著高于其阴性表达者(χ^(2)=4.569,P<0.05)。结论胃腺癌组织RBMS1高表达、AKAP12低表达,二者表达变化与肿瘤TNM分期、淋巴结转移和患者预后密切相关。

RBMS3-AS3对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制

目的:探讨RNA结合基序单链相互作用蛋白3反义链3(RBMS3-AS3)对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:培养人宫颈永生化细胞Ect1/E6E7和宫颈癌HeLa、Caski和SiHa细胞,实时荧光定量PCR检测细胞中RBMS3-AS3表达水平,Western blot法检测RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RBMS3)蛋白水平。将HeLa细胞分为对照组(细胞正常培养)、si-RBMS3-AS3组(转染RBMS3-AS3小干扰RNA)、阴性序列组(转染乱序无意义阴性序列)、si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组(共转染RBMS3-AS3和RBMS3的小干扰RNA)和si-RBMS3-AS3+阴性序列组(共转染RBMS3-AS3与乱序无意义阴性序列),四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭能力,Western blot检测各组HeLa细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果:宫颈癌细胞系HeLa、Caski和SiHa中RBMS3-AS3表达水平均高于Ect1/E6E7细胞(P<0.05),而RBMS3蛋白表达低于Ect1/E6E7细胞(P<0.05)。与对照组或阴性序列组相比,si-RBMS3-AS3组HeLa细胞的活性、侵袭细胞数、Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率及RBMS3和Bax蛋白表达水平升高(P<0.05)。与si-RBMS3-AS3+阴性序列组比较,si-RBMS3-AS3+si-RBMS3组HeLa细胞活性、侵袭细胞数及Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:抑制RBMS3-AS3表达可抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭,并促进细胞凋亡,这可能与上调RBMS3表达有关。

RBMS3通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞侵袭及其上皮-间质转化

目的:研究RNA结合基序单链相互作用蛋白3(RNA-binding motif,single-stranded-interacting protein 3,RBMS3)对胃癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能的分子作用机制。方法:首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1以及胃癌细胞MKN-28、MKN-45、NCI-N87和SGC-7901中RBMS3的表达水平。然后采用脂质体转染法将RBMS3过表达载体[RBMS3-pcDNA3.1(+)]转染至胃癌MKN-45和SGC-7901细胞中,同时设置空白对照组和空载体转染的阴性对照组。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证RBMS3过表达效果后,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中上皮-间质转化相关蛋白以及Wnt信号通路中β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平变化。最后,用Wnt通路激动剂氯化锂(lithium chloride,LiCl)处理RBMS3过表达的胃癌MKN-45和SGC-7901细胞后,再次采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果:与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中RBMS3 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P值均<0.05)。RBMS3过表达质粒转染后,胃癌MKN-45和SGC-7901细胞中RBMS 3基因过表达,2种细胞的侵袭能力随之明显降低(P值均<0.05)。在RBMS3过表达的胃癌MKN-45和SGC-7901细胞中,N-钙黏蛋白(N-cadherin)和β-catenin表达水平均明显降低(P值均<0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平明显升高(P值均<0.05)。用LiCl处理RBMS3过表达的MKN-45和SGC-7901细胞后,RBMS3对2种细胞侵袭的抑制作用均被部分抵消(P值均<0.05)。结论:RBMS3可能通过阻滞Wnt/β-catenin信号通路,抑制人胃癌细胞的侵袭和上皮-间质转化。