RNA斑点印迹法检测人食管癌DNA聚合酶β的基因表达

目的 :探讨人食管癌组织DNA聚合酶 β(polβ)RNA水平的表达。 方法 :提取 5 1例食管癌患者的手术标本组织 ,包括 :17例癌灶组织 ,17例癌旁组织 ,17例“正常”组织细胞总RNA ,以生物素标记的polβcDNA探针进行RNA斑点印迹。结果 :DNApolβRNA水平的表达癌组织高于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,癌旁组织高于“正常”组织 (P <0 .0 5 ) ,癌组织高于“正常”组织 (P <0 .0 1)。结论 :人食管癌组织及癌旁组织的DNApolβ基因RNA水平表达显著高于“正常”组织 ,提示DNApolβ的过表达可能在食管癌的发生、发展中起 作用。

BMP-2 mRNA在实验性黄韧带骨化组织中的表达及其意义

目的 :从分子水平研究BMP 2在黄韧带骨化过程中的作用机理。方法 :以rhBMP 2诱导的黄韧带骨化 (实验组 ,O组 )为研究对象 ,分别于诱导物植入后 2、4、6周取实验节段黄韧带 ,提取总RNA ,采用Dotblot和Northernblot方法检测其BMP 2mRNA的表达程度 ,设立PBS溶液 /明胶海绵植入为实验对照组 (EC组 ) ,未手术动物为阴性对照组(N组 ) ,pSBMP 2质粒为阳性对照组 (P组 )。结果 :Dotblot和Northernbloe放射自显影图像显示 :rhBMP 2植入 2周时 ,黄韧带内BMP 2mRNA表达程度最高 ,然后逐渐下降 ,到 6周时明显减弱 ,与病理组织学研究中所见的韧带组织中成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关。实验对照组和阴性对照组均未见BMP 2mRNA表达。图像灰度扫描示 :0 2组、0 4组和 0 6组BMP 2mRNA的表达程度分别为 0 .6 15± 0 .14 84、 0 .443± 0 .0 982、 0 .2 32± 0 .0 749。结论 :rhBMP 2诱导的骨化过程中黄韧带组织内存在不同程度BMP 2mRNA的表达 ,其表达水平与成纤维细胞软骨化生的活跃程度呈正相关 ;内源性BMP -2可能参与黄韧带骨化的启动和持续发展。

蜕膜转化生长因子-β mRNA表达与自然流产的相关性研究

目的 :探讨蜕膜转化生长因子 β(TGF β)mRNA表达与自然流产的相关性。方法 :采用斑点杂交和图象分析技术检测自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2蜕膜TGF βmRNA表达情况 (n =8) ,以正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c为对照 (n =8)。结果 :自然流产模型组胚胎丢失率为 30 .0 0 % (15 /5 0 ) ,显著高于正常妊娠小鼠模型组的 4 .5 4 % (3/6 6 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。自然流产模型组蜕膜中TGF βmRNA表达的扫描灰度为4 4 .5 2± 9.2 8,明显低于正常妊娠模型组的 117.97± 3.11,差异有高度显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 :蜕膜TGF βmRNA表达异常在自然流产发病中起重要作用。

miRNA的鉴定及检测方法的概述

MicroRNA(miRNA)因其分子序列短小,与基因组中较多的序列以互补方式存在,在不同生物体内以不同的方式与靶基因结合,且能够与多种蛋白相互作用,因而建立一种有效且普遍适用的鉴定及检测方法异常困难。科研人员经过不断的研究和探索,总结出MicroRNA的鉴定和检测方法,研究重点介绍miRNA的两种鉴定方法及其几种有效的检测方法,为进一步对其进行研究提供理论基础。

miRNAs在甲状腺乳头状癌中的表达及临床病理意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中特征性的miRNA表达谱以及临床病理意义。方法对52例PTC及7例良性甲状腺肿瘤手术切除标本采用基因芯片技术及RNA印迹杂交法检测miRNA的表达,对过表达的miRNA表达水平与PTC临床病理特征之间的关系进行分析。结果 (1)用基因芯片技术筛检发现PTC组织中5例过表达的miRNAs(miR-375、miR-34a、miR-146b、miR-222、miR-31)。(2)RNA印迹杂交法验证芯片结果及检测其他miRNAs结果显示:miR-34a、miR-146b、miR-31、miR-21和miR-221在PTC组织中的表达水平较癌旁正常甲状腺组织显著升高(P<0.05)。MiR-146b和miR-221在PTC组织中的过表达率较良性甲状腺肿瘤组织显著升高(P<0.01)。PTC患者中包膜侵犯组、淋巴结转移组、TNM分期Ⅲ-Ⅵ期组及AGES系统评分≥5分组miR-221的表达水平均明显高于相应对照组(P<0.05或0.01);而男性PTC患者的miR-146b表达水平明显高于女性PTC患者(P<0.05)。结论 miR-146b、miR-221、miR-21和miR-31的过表达与PTC的发生、发展有关;过表达的miR-221和miR-146b与PTC的预后不良有关。

贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂化疗对非小细胞肺癌患者血清lncRNA H19及lncRNA HOTAIR表达的影响

目的探讨贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂化疗对非小细胞肺癌患者血清lncRNA H19及lncRNA HOTAIR表达的影响。方法选择非小细胞肺癌患者150例,根据患者的治疗方案分为观察组和对照组各75例。对照组基于培美曲塞联合顺铂治疗,观察组给予贝伐单抗联合培美曲塞与顺铂治疗,两组均治疗4个疗程后观察治疗效果、免疫功能、细胞因子及lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平。结果治疗后观察组治疗效果显著高于对照组(P<0.05);治疗后两组血管内皮生长因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C水平均显著下降,且观察组下降更显著(P<0.05);治疗后两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平明显提高,Treg、CD8^(+)细胞水平明显下降,且观察组改善更显著(P<0.05);治疗后两组干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著升高,转化生长因子(TGF)-β水平均显著下降,且观察组改善更显著(P<0.05);治疗后两组印迹基因H19长链非编码RNA(lncRNA H19)、同源盒基因转录长链非编码RNA(lncRNA HOTAIR)水平均显著下降,且观察组下降更显著(P<0.05);两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05);结论贝伐单抗结合培美曲塞与顺铂治疗非小细胞肺癌患者的治疗效果较好,并且可改善机体免疫功能,改善细胞因子水平,降低lncRNA H19、lncRNA HOTAIR水平,在临床上可广泛使用。

ErbB-3结合蛋白Ebp1 mRNA在肝癌细胞系中的差异表达及其意义

[目的]观察ErBb-3结合蛋白Ebp1mRNA在人肝癌细胞系中的表达.[方法]培养人肝癌细胞系Hep 3B,Hep G2,Huh7和正常人张氏肝细胞,提取总RNA,以P32标记的Ebp1为探针,18S为内参照,采用Northern Blot法检测Ebp1mRNA的表达水平.[结果]Northern Blot法检测结果示,Ebp1mRNA在人肝癌细胞系中的表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.01).[结论]人肝癌细胞系中Ebp1mRNA呈高表达.

OsCOI1,水稻中一个受茉莉酸甲酯和脱落酸诱导表达的F-box家族基因

利用Blast检索、EST分析和RT-PCR,在水稻中分离到一个与拟南芥COI1同源的新基因,命名为OsCOI1.OsCOI1编码595个氨基酸.推测的OsCOI1编码蛋白有一个F-boxmotif和16个富含亮氨酸的重复序列,这与拟南芥COI1相似.OsCOI1在氨基酸水平上和COI1有很高的同源性(74%).经半定量RT-PCR法和RNA印迹分析,表明水稻中OsCOI1表达水平在经茉莉酸甲酯和脱落酸处理后呈明显变化,但不受水杨酸和乙烯的影响,说明OsCOI1可能在茉莉酸信号途径和脱落酸途径中具有特定功能.

PKC基因在人肺癌中的转录表达

目的 探讨PKC β1基因转录表达与肺癌临床病理生理特征的关系。方法 应用Northern印迹杂交方法检测 5 0例肺癌组织、癌旁肺组织、远癌肺组织和 30例肺良性病变肺组织PKC β1mRNA表达水平。结果 (1)肺癌组织中PKC β1mRNA表达水平显著高于癌旁肺组织 ,远癌肺组织和肺良性病变肺组织 (P <0 .0 1) ;(2 )低分化肺癌中PKC β1表达水平显著高于中 高分化肺癌 (P <0 .0 5 ) ;(3)Ⅲ期肺癌PKC β1表达水平显著高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌 (P <0 .0 1) ;(4)伴有淋巴结转移肺癌PKC β1表达水平显著高于不伴淋巴结转移肺癌(P <0 .0 1)。结论 肺癌组织中存在PKC β1mRNA过度表达 ,它可能参与肺癌细胞分化以及肿瘤进展和转移过程的调控。

生物材料表面固定粘附肽调节小鼠成骨细胞骨钙素的表达

目的 :观察材料表面固定粘附肽RGD对小鼠成骨细胞骨钙素mRNA表达的影响。方法 :采用自组装单层结构法将含RGD的粘附肽RGDC共价结合在试件表面 ,建立RDGC和空白对照组。接种小鼠原代成骨细胞 ,分别收集培养第 10 ,15 ,2 1天的细胞 ,提取总RNA ,Northern印迹杂交法检测骨钙素mRNA的表达。结果 :RGD组第 15天即开始出现明显的骨钙素基因表达 ,对照组的基因表达出现在第 2 1天。结论 :材料表面固定RGD有促进骨钙素基因表达 ,影响小鼠成骨细胞分化的功能。

TNF对离体孵育骨骼肌的蛋白代谢与泛素系统基因表达的影响

为研究TNF α对离体孵育骨骼肌蛋白代谢及泛素系统基因表达的影响 ,采用含重组大鼠TNF α(6 0 0 0U/ml)的孵育液有氧孵育大鼠伸趾长肌 (EDL) ,对照组孵育液除不含TNF α外其余成分与实验组相同 ,高效液相色谱法测定总蛋白和肌纤维蛋白的代谢率 ,核糖核酸印迹法检测EDL泛素mRNA和C2 mRNA的表达变化。结果显示 ,实验组大鼠EDL总蛋白和肌纤维蛋白分解代谢率与对照组相比差异无统计学意义 ,但EDL泛素mRNA(2 4kb)和C2 亚基mRNA的表达较对照组分别升高约 15 1%和 5 6 % ,差异有统计学意义。提示TNF α能与骨骼肌细胞直接发生作用 ,增强细胞内泛素蛋白酶体途径的活性 ,但TNF α能否直接增强骨骼肌蛋白分解代谢尚有待进一步探讨。

烧伤早期大鼠骨骼肌组织泛素转录表达的变化研究

目的 :研究烧伤后大鼠骨骼肌组织泛素蛋白酶体 (ubiquitin proteasome)蛋白降解途径组成成分中泛素表达的变化 ,探讨烧伤后骨骼肌蛋白降解的增强与泛素蛋白酶体蛋白降解途径表达变化间的关系。方法 :借助烫伤大鼠动物模型 ,利用骨骼肌离体孵育系统 ,应用氨基酸自动分析仪测定孵育液和骨骼肌组织中酪氨酸(Tyr)和 3甲基组氨酸 (3MH)量的变化 ,用 RNA印迹技术 (Northern blot)方法测定骨骼肌组织中泛素m RNA表达水平。结果 :烧伤后大鼠骨骼肌释放 Tyr和 3MH增多 ,以 3MH增加显著 ;烧伤后骨骼肌组织中泛素 2 .4kb的 m RNA表达上调明显。泛素 m RNA表达增加量与 Tyr和 3MH增加量间均呈显著正相关。结论 :烧伤后大鼠骨骼肌蛋白降解明显增强 。

人类新型β3半乳糖基转移酶基因β3GalT7的克隆和鉴定

从人肺cDNA文库中克隆到人类β3-半乳糖基转移酶家族中的一个新成员β3GalT7(AY277592,EC2.4.1.-),并对其进行了鉴定. 该基因定位在人类染色体19q13.2. 它包含一个1 191 bp的开放阅读框(ORF). 编码的蛋白质包括一个信号肽和一个半乳糖基转移酶结构域,分子质量和等电点分别为43.3 ku和8.37. 从原核表达中获得的融合蛋白的分子质量和预测相符. RNA印迹杂交显示β3GalT7在肺、喉和回肠组织中高表达,而在舌、乳房、子宫、睾丸等组织中表达较低. 此外半定量RT-PCR显示β3GalT7在人类不同的肿瘤细胞中转录水平有明显差异.

猪生殖与呼吸综合征病毒5′非翻译区序列的反向遗传操作

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR获得在病毒基因组5′非编码区(5′UTR)和ORF1起始密码子之间插入NdeⅠ的全长克隆pTLNd4,并以此为基础将5′UTR替换为欧洲株的5′UTR,获得全长克隆pTLV8。以体外转录的RNA转染MARC-145细胞。结果显示,pTLNd4产生了细胞病变(CPE),而pTLV8未产生。通过RT-PCR和Northern blot试验,分别对这2株突变病毒的基因组RNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行了分析,同时还对pTLNd4进行了病毒学试验。证实,它们与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异;pTLV8虽未产生CPE,但在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换不同基因型5′UTR的突变病毒虽然丧失了复制能力和感染性,但仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子。

脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解增强与泛素转录表达关系的研究

目的 :测定脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解率的变化 ,探讨骨骼肌蛋白降解的分子机制。方法 :腹腔注射内毒素建立大鼠脓毒症模型 ,动物随机分成 4组 ,分别为腹腔注射内毒素后 2h、6h、12和 2 4h组 ,每组各设正常对照。借助骨骼肌充分氧供离体孵育系统 ,氨基酸自动分析仪测定不同时相点孵育液中伸指长肌总蛋白降解率和肌纤维蛋白降解率 ;应用northernblot方法测定伸指长肌组织泛素mRNA的表达变化 ,分析骨骼肌蛋白降解与泛素mRNA表达的关系。结果 :脓毒症大鼠伸趾长肌总蛋白降解率在 2h和 6h轻度增加 ,肌纤维蛋白降解率则在 2h和 6h增加 1 5～ 2 2倍 ,在 12h增加 40 %。伸指长肌组织泛素mRNA 2 4kb的水平主要在 2h和 6h增加明显 ,增幅达 2～ 5倍 ,泛素mRNA 1 2kb未见明显变化 ;肌纤维蛋白降解与泛素mRNA 2 4kb表达间呈显著正相关 (r =0 9731,P =0 0 0 3)。结论 :脓毒症时骨骼肌蛋白降解增加可能同泛素 蛋白酶体蛋白降解途径活性增强相关。

人肿瘤相关基因Dief 33L在肺癌中的表达

目的:观察Dief33L基因在肺癌组织中的表达情况,并初步探讨其与肺癌的关系.方法:通过Northern印迹技术,检测29例肺癌和正常肺组织中的Dief33L基因mRNA的表达,杂交结果用UVP全自动图像分析仪检测杂交信号,并分析mRNA的表达与肺癌临床特征的关系.结果:Dief33L基因在癌旁正常组织中均有不同程度表达,在肺鳞癌组织中均未见表达,在部分肺腺癌组织有表达,且相对表达量较癌旁肺组织显著降低(P<0.05);在有或无淋巴结转移的肺腺癌组织之间相比也有显著差异(P<0.05).结论:Dief33L 基因的表达量降低可能是肺腺癌发生发展过程中一个因素,且可能与腺癌的转移有关.

烧伤脓毒症早期膈肌内泛素基因和蛋白的表达变化及意义

目的 :探讨烧伤脓毒症时大鼠膈肌内蛋白降解信号分子——泛素的基因和蛋白表达变化及意义。方法 :大鼠背部 30 %总体表面积 度烫伤后 ,立即腹腔注射内毒素 (6 mg/ kg)制成烧伤脓毒症动物模型 ,随机分为脓毒症 2 h和 6 h组 ,另设对照组 ,每组 9只。通过 Northern杂交检测大鼠膈肌内泛素 m RNA表达的变化 ;免疫组织化学法测定膈肌内泛素蛋白水平的表达。结果 :烧伤脓毒症大鼠伤后 2和 6 h膈肌内泛素 m RNA2 .4 kb条带和 1.2 kb条带的表达较对照组均显著增强 ,且呈持续升高现象 ,其中 2 .4 kb条带的表达增强更明显 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 1)。烧伤脓毒症大鼠伤后 2和 6 h膈肌内泛素蛋白的表达较对照组也显著增强 ,以伤后 6 h增强更明显。结论 :烧伤脓毒症早期膈肌内泛素基因和蛋白表达即显著增强 ,且呈持续升高现象 ,提示膈肌内泛素系统活性上调 ,蛋白降解增强 ,这对进一步从肌组织蛋白代谢角度研究烧伤脓毒症时膈肌功能变化及其对呼吸功能的影响机制有重要意义。

细胞周期蛋白D_1基因表达在心肌肥大形成中的时相性变化

目的:观察心肌肥大形成过程中细胞周期蛋白D1(cyclinD1)基因表达的时相性变化,并探讨cyclinD1在心肌肥大形成中的作用。方法:采用腹主动脉缩窄法建立大鼠心肌肥大模型,设缩窄手术组及假手术对照组,观察两组大鼠手术后不同时间心脏左心室(含左心室游离壁与室间隔)质量与体质量比、左心室游离壁厚度及心肌细胞横径的变化,以确证模型的稳定建立;其后应用RNA印迹法分析检测cyclinD1基因表达的变化。结果:手术后2周时两组大鼠的心脏左心室质量与体质量比、左心室游离壁厚度以及心肌细胞横径均无显著差别,而缩窄手术组cyclinD1基因mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);4周时缩窄组大鼠上述3项病理学检测指标及cyclinD1基因mRNA表达均高于对照组(P<0.05)。结论:在心肌肥大形成过程中cyclinD1基因mRNA表达增加,且早于病理变化出现,提示cyclinD1可能参与了心肌肥大的形成。

针刺对快速老化小鼠SAMP10转录调节因子NF-E2、YB-1、LRG47的影响

目的:探讨针刺延缓衰老的机制。方法:采用快速老化小鼠(SAMP10)、正常老化小鼠(SAMR1)为模型,运用地高辛标记的非放射性Northernblot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马NF-E2、YB-1、LRG47基因表达的变化。结果:SAMP10对照组小鼠NF-E2、YB-1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论:SAMP10小鼠脑衰老与NF-E2、YB-1、LRG47基因表达异常有关,针刺可以通过调节NF-E2、YB-1、LRG47基因表达增强红细胞系统功能和细胞增殖,提高细胞抗菌免疫,从而起到延缓衰老的作用。