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地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用
被引量:
1
1
作者
沈爱国
龚蕾蕾
+3 位作者
丁斐
严美娟
王汉洲
顾建新
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期365-368,共4页
为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- ...
为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。
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关键词
地高辛标记
小鼠
β—1
4—半乳糖基转移酶I
rna
探针
rna原位杂交探针
RT—PCR
下载PDF
职称材料
正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用
2
作者
龚蕾蕾
沈爱国
+2 位作者
严美娟
何江虹
顾建新
《解剖学研究》
CAS
2003年第4期273-276,F003,共5页
目的 为了探讨 β1 ,4半乳糖基转移酶 Ⅱ和Ⅴ (β1 ,4 galactosyltransferaseI,β 1 ,4 GalT ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。 方法 设计引物 ,提...
目的 为了探讨 β1 ,4半乳糖基转移酶 Ⅱ和Ⅴ (β1 ,4 galactosyltransferaseI,β 1 ,4 GalT ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。 方法 设计引物 ,提取小鼠脑总RNA ,通过RT PCR方法 ,得到 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ基因序列 ,将其克隆到pGEM T载体。根据其多克隆酶切位点和Sp6及T7位置 ,分别酶切后作为转录模板 ,通过Sp6及T7RNA聚合酶 ,得到正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后 ,最后通过原位杂交分析标记探针的特异性和杂交效果。结果 本实验得到了高效价的正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针 ,并表现出很好的杂交效果。结论 正、反义β 1 ,4 GalT Ⅱ和ⅤRNA原位杂交探针的制备 ,为进一步研究 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ在组织中的表达 。
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关键词
Β1
4半乳糖基转移酶
分子生物学
地高辛
rna原位杂交探针
小鼠
神经元再生
下载PDF
职称材料
题名
地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用
被引量:
1
1
作者
沈爱国
龚蕾蕾
丁斐
严美娟
王汉洲
顾建新
机构
南通医学院
复旦大学上海医学院基因研究中心
出处
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期365-368,共4页
基金
国家自然科学基金 ( No.3 0 3 0 0 0 99)
江苏省自然科学基金 ( BK2 0 0 3 0 3 5 )
江苏省教育厅自然科学项目 ( O3 KJB180 10 9)资助项目
文摘
为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。
关键词
地高辛标记
小鼠
β—1
4—半乳糖基转移酶I
rna
探针
rna原位杂交探针
RT—PCR
Keywords
β-1,4- galactosyltransferase Ⅰ,
rna
probe, RT-PCR, digoxigenin label, mouse
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用
2
作者
龚蕾蕾
沈爱国
严美娟
何江虹
顾建新
机构
南通医学院江苏省神经再生重点实验室
复旦大学上海医学院基因研究中心
出处
《解剖学研究》
CAS
2003年第4期273-276,F003,共5页
基金
江苏省神经再生重点实验室开放课题 (JSK0 2 0 12 )
江苏省高校自然科学研究计划项目 ( 0 3KJB180 10 9)
文摘
目的 为了探讨 β1 ,4半乳糖基转移酶 Ⅱ和Ⅴ (β1 ,4 galactosyltransferaseI,β 1 ,4 GalT ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。 方法 设计引物 ,提取小鼠脑总RNA ,通过RT PCR方法 ,得到 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ基因序列 ,将其克隆到pGEM T载体。根据其多克隆酶切位点和Sp6及T7位置 ,分别酶切后作为转录模板 ,通过Sp6及T7RNA聚合酶 ,得到正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后 ,最后通过原位杂交分析标记探针的特异性和杂交效果。结果 本实验得到了高效价的正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针 ,并表现出很好的杂交效果。结论 正、反义β 1 ,4 GalT Ⅱ和ⅤRNA原位杂交探针的制备 ,为进一步研究 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ在组织中的表达 。
关键词
Β1
4半乳糖基转移酶
分子生物学
地高辛
rna原位杂交探针
小鼠
神经元再生
Keywords
β1,4-galactosyltransferase Ⅱ and Ⅴ
rna
probe
In situ hybridization
RT-PCR
Mouse
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用
沈爱国
龚蕾蕾
丁斐
严美娟
王汉洲
顾建新
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
下载PDF
职称材料
2
正、反义β-1,4半乳糖基转移酶Ⅱ和Ⅴ地高辛标记RNA探针的制备和应用
龚蕾蕾
沈爱国
严美娟
何江虹
顾建新
《解剖学研究》
CAS
2003
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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