血管内皮生长因子干扰RNA对鼠视网膜中血管内皮生长因子mRNA表达的抑制作用

目的研究血管内皮生长因子(vascular endothe-lial cell growthfactor,VEGF)小片段干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对鼠视网膜VEGF mRNA的抑制作用,探讨其对视网膜新生血管治疗的可行性。方法体外培养人鼻咽癌细胞(CNE-2Z),分成正常氧培养组(20%O2)和低氧培养组(1%O2)。采用脂质体(LF2000)将VEGF siRNA转染两组细胞,RT-PCR检测VEGF mRNA的表达,确立VEGF siRNA对VEGF mRNA的抑制效率。然后,建立高浓度氧(75%)诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型,以脂质体为载体,将VEGF siRNA重组质粒注射到鼠玻璃体腔内,RT-PCR检测视网膜组织中VEGF mRNA的表达水平。结果正常氧培养的CNE-2Z细胞有VEGF mRNA表达,低氧状态下VEGF mRNA表达增多,两者之间差异有显著性(P<0.01);与未转染组和转染空载体组相比,在正常氧和低氧状态下,VEGF siRNA均能明显抑制VEGF mRNA的表达(P<0.01);正常氧状态下VEGF siRNA的抑制效率比低氧状态高。高浓度氧诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型中,玻璃体腔注射VEGF siRNA组视网膜组织中VEGF mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论VEGF特异的siRNA能有效地抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z和C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型视网膜中VEGF mRNA的表达。

RNA干扰作用(RNAi)研究进展

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径 。

小干扰RNA治疗药物载体递送技术研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种控制靶基因表达的序列特异性调控机制。体内外研究结果表明,RNAi技术的应用对多种疾病治疗有巨大的前景,其瓶颈在于如何将基于RNAi的药物有效递送至靶细胞或靶组织。常用的载体递送系统可分为病毒载体系统和非病毒载体系统。研究载体递送系统需重点考虑的因素有脱靶效应、递送方式、免疫反应诱导及剂量等。如果这些关键问题能够解决,将大大增加RNAi成为治疗药物的可能性。

RNA干扰的作用机制及应用前景

RNA干扰是将双链RNA导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程,涉及多种蛋白质共同参与。此干扰机制可在转录、转录后和翻译水平上实现。转录水平上的干扰机制是通过对靶基因染色质结构的改变,使其基因转录受限,导致表达系统的关闭。翻译水平上的干扰机制,是通过抑制相应mRNA的翻译,使相应的蛋白质表达受阻。转录后水平则包括siRNA形成阶段和扩增循环阶段。siRNA形成阶段即外源性或内源性dsRNA通过Argonaute家族基因编码的蛋白质的识别,进一步诱导双链RNA与Dicer结合。扩增循环阶段即特异性siRNA与靶mR-NA结合后,没有被活性酶切割、降解;而是以siRNA中的一条链为引物,以靶mRNA为模板,在RNA依赖的RNA聚合酶的作用下,延伸形成新的双链RNA,被Dicer内切酶或相关酶切割为新的21 nt^23 nt siRNA。随着RNA干扰技术的不断进步,RNA干扰可广泛地应用到抗病毒,肿瘤治疗,药物靶点筛选以及免疫性疾病治疗等方面。

RNA干扰技术在药物转运体研究中的应用

RNA干扰是一种利用双链RNA分子特异的沉默靶基因表达的技术,目前已广泛用于基础生物医学研究。作为一种高选择性和有效的基因调控手段,这一技术也已用于临床疾病的治疗研究和药物转运体的研究。药物转运体是一类细胞膜蛋白,在药物的吸收、分布和排泄中发挥重要作用。转运体功能的抑制或缺失将改变药物的清除和药代动力学,导致药效降低或毒性增加。因此,在新药研发以及药物临床应用中,研究药物转运体在药物跨膜转运、组织分布、排泄清除和药-药相互作用中的作用,对于药物的有效安全使用,具有重要意义。RNA干扰技术在药物转运体介导的药物转运和药-药相互作用研究方面,具有明显的优势。本文对近年来RNA干扰技术在药物转运体研究中的应用进行综述,重点阐述这一技术在药物转运体介导的肿瘤耐药、药物体内转运、清除和相互作用研究中的应用,为药物转运体的功能和调节研究提供参考。

新城疫病毒P基因的RNA编辑及其抗干扰素作用

新城疫病毒的P基因转录过程中在第484特定位置插入非模板G碱基发生RNA编辑现象 ,产生两种非结构蛋白 ,即V和W蛋白。文章综述了副黏病毒 (主要是新城疫病毒 )P基因RNA编辑的机理。

成釉细胞瘤中MMP-2的表达及RNA干扰的抑制作用

目的:研究MMP-2在成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法:培养成釉细胞瘤细胞,应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达;体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体,将siRNA质粒表达载体转染原代培养的成釉细胞瘤细胞,激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效率,RT-PCR检测成釉细胞瘤细胞中MMP-2mRNA的改变,明胶酶谱法检测MMP-2的变化,应用SPSS11.0统计软件中的t检验对结果进行统计学分析。结果:成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达,siRNA质粒表达载体对原代培养的成釉细胞瘤细胞的转染率为41.8%;转染后,成釉细胞瘤细胞的MMP-2mRNA表达水平显著降低,酶原性MMP-2和活性MMP-2显著减少,P<0.05。结论:体外构建的MMP-2靶向siRNA质粒表达载体可以转染体外培养的成釉细胞瘤细胞,并导致MMP-2基因沉默。

RNA干扰对Smad7基因的抑制作用

小分子干扰RNA(siRNAs)可以高效、特异地阻断体内同源基因的表达,促进同源mRNA降解,称为RNA干扰(RNAi)。本研究旨在探讨Smad7基因的siRNAs是否能抑制基因的表达。利用RNA干扰技术,设计并合成了针对Smad7基因的siRNAs,用脂质体转染法瞬时转染BEP2D和BERP35T2细胞,用Northernblot法检测RNAi效应;同时设计并合成了绿色荧光蛋白(GFP)的siRNAs,瞬时转染稳定表达绿色荧光蛋白的BERP35T2细胞,检测荧光强度有无改变。结果表明RNA干扰技术能明显抑制Smad7基因的表达,并能显著减弱绿色荧光的表达强度,为进一步研究Smad7基因功能及TGF-β信号转导通路奠定了基础。

RNA干扰作用研究进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是指与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA分子 (double strandedRNA ,dsRNA)导入细胞时 ,该mRNA发生特异性的降解 ,导致基因表达的沉默。本文介绍RNAi作用的发现。

RNA干扰技术在药物研究中的应用

RNA干扰是由双链RNA引发的转录后基因沉默。双链RNA经Dicer酶降解成21 23nt的小干扰RNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mRNA。随着RNA干扰机制的深入研究与广泛应用,RNAi已用在药物研究中的各个领域,尤其在药物开发上,能够解决临床前药物开发的一些瓶颈问题,如药靶鉴定,优化药靶,从而节省时间和资金,并提高成功率,加速药物的临床研究。同时RNA在药物研究的其他领域都也显示了卓越的作用,为药物研究提供了强大的工具。

RNA干扰作用机制研究进展

RNA干扰 (RNAi)是一种转录后基因沉默现象 ,实验研究发现其机制主要可分为长双链RNA(dsRNA)被加工处理成小干扰RNA(siRNA)、识别并剪切mRNA、RNAi作用倍增放大 3个阶段。RNAi技术在肿瘤基因治疗、抑制病毒复制等方面显示出良好应用前景。

RNA干扰药物用于疾病治疗的安全性问题

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA介导的序列特异的转录后基因沉默。RNAi技术因其特异性、高效性而备受青睐,在疾病治疗方面表现出广阔的应用前景。然而,近年来的研究发现,基于RNAi技术开发的药物存在安全性问题,主要包括引起免疫反应、产生脱靶效应、以及存在竞争微RNA通路等。这些问题的突破将使RNAi技术获得更加广泛的应用。

RNA干扰诱导肝癌HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响

目的：探讨载体介导的RNA干扰技术诱导HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响。方法：应用靶向细胞周期E（cyclin E）基因的siRNA真核表达载体转染HepG2细胞诱导凋亡,再以丹参酮ⅡA处理48h（cy-clinE siRNA＋丹参酮ⅡA组）,同时设立cyclinE siRNA组、无义siRNA组、丹参酮ⅡA组以及空白对照组,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,吖啶橙荧光染色检测细胞凋亡形态,Western blot法观察细胞Caspase-3蛋白表达。结果：单用cyclinE siRNA质粒转染或丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞,细胞凋亡率显著高于空白对照组（P〈0.01）,2μg/ml剂量凋亡率分别达到21.6%、23.6%。cyclinE siRNA质粒转染预诱导再经丹参酮ⅡA处理,HepG2细胞G0-G1期比例显著增高,S期、G2-M期细胞所占有比例明显下降;与单用cyclinE siRNA质粒转染、丹参酮ⅡA两组比较,细胞凋亡率分别增高了1.81和1.61倍,比两组合计增高0.35倍,Caspase-3蛋白表达水平分别增高了0.91倍和0.66倍。结论：通过cyclinE siRNA质粒转染诱导的HepG2细胞凋亡可提高丹参酮ⅡA药物敏感性,其机制与增强凋亡控制相关基因表达有关。

RNA干扰ERCC1基因对肺癌细胞药物敏感性的影响

目的探讨RNA干扰切除修复交叉互补基因1(ERCC1)对肺癌细胞药物敏感性的影响。方法将肺癌A549/DDP细胞分为阴性组、空白组、ERCC1-shRNA1组及ERCC1-shRNA2组,通过不同方法检测分析ERCC1的mRNA和蛋白表达水平,及不同顺铂(DDP)浓度下肺癌细胞的凋亡程度。结果阴性组、空白组的ERCC1 mRNA及蛋白表达水平无显著差异(P>0.05);ERCC1-shRNA1组、ERCC1-shRNA2组的ERCC1 mRNA及蛋白表达水平与阴性组、空白组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ERCC1-shRNA1组、ERCC1-shRNA2组的ERCC1 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ERCC1-shRNA 1组、阴性组、空白组的A549/DDP细胞抑制率均随着DDP浓度的升高而增加;DDP浓度为8、16、32μg/mL时,ERCC1-shRNA1组的A549/DDP细胞抑制率高于阴性组及空白组(P<0.05);阴性组、空白组的A549/DDP细胞抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与0μg/mL相比,阴性组、空白组、ERCC1-shRNA 1组16、32μg/mL DDP的A549/DDP细胞凋亡率增加(P<0.05);DDP浓度为0、16、32μg/mL时,ERCC1-shRNA1组的A549/DDP凋亡率高于阴性组及空白组(P<0.05)。结论沉默ERCC1载体可减少肺癌A549/DDP细胞中ERCC1表达,可抑制肿瘤细胞增殖,增加化疗药物的敏感性。RNAi抑制交叉互补基因治疗肺癌患者的可行性高,能够为下一步临床工作提供理论基础。

RNA干扰对阿尔茨海默病家族性瑞典型APP突变的沉默作用邱

目的诱导小干涉RNA (small interference RNA, siRNA )对阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白家族性瑞典型突变(APPswe)的沉默作用。方法设计一对针对APPswe的寡核苷酸,构建成内源性表达相应siRNA的质粒,与构建的APP-EGFP重组质粒瞬时共转染COS-7细胞,利用GFP报告基因来间接观察siRNA对APPswe的沉默作用。结果siRNA可有效地下调突变型APP,相比APPwt而言,针对突变型APP的siRNA对APPswe的沉默作用更强。结论针对APPswe的siRNA可有效地沉默APPswe基因,并有一定的等位基因特异性。因此,针对APPswe的siRNA将在阿尔茨海默病治疗研究领域扮演重要角色。

RNA干扰(RNAi)的现象和作用机制以及在猪病防控中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)即双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的同源mRNA特异性降解过程。RNAi的分子机制的研究也不断取得进展,目前研究得最多的是转录后基因沉默机制,RNAi发生过程主要分为起始阶段、沉默信号的放大和转移阶段、效应阶段。RNAi目前已经用于许多动物病毒性疾病的研究中,其中以在猪病治疗中的应用较为突出。

RNA干扰作用——治疗HIV的新途径

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 ,RNA干扰作为抑制基因表达的有利工具 ,首次在无脊椎动物和植物中对付外目的基因 ,主要通过短的干扰RNA(siRNA ,大约 2 1个核苷酸的RNA的复合物 )有效地抑制同源性基因的表达。最近的研究表明 ,用siRNA抑制HIV 1的复制 ,即通过它抑制病毒或者细胞内的基因 ,取得了重要的成效。RNAi开辟了新的基因治疗药物研究途径 。

RNA干扰与药物的研究进展

RNA干扰是由双链RNA诱导的序列特异性的基因沉默 ,目前被广泛用于药物研究 ,特别是针对肿瘤、病毒感染性疾病、血液病及神经退行性疾病等的治疗药物。随着核酸药物在体内靶向转运技术的不断发展 。

RNA干扰及其在药物靶标识别和确证中的应用

RNA干扰是近年来分子生物学技术领域的研究热点之一。该技术以其高特异性、高效性等显著优势已经被广泛应用到生命科学各研究领域中。本文从目前研究较多的RNA干扰机制、siRNA的设计原则、siRNA的转染方法及RNA干扰在药物靶标识别和确证中的应用方面作一综述。

RNA干扰的抗病毒作用：阻止乙型肝炎病毒复制的新策略

近年来，科学家们发现了一种普遍存在的重要的基因调节机制，被称为RNA沉默或者是RNA干扰(RNAi)。虽然RNAi基因调节的机制并没有完全搞清楚，但科学家已将研究的重点放在治疗作用上，特别是抗病毒作用。本文介绍了近年利用小干扰RNA(siRNA)阻止乙肝病毒复制的多个成功的体内和体外研究。这些研究使我们离使用RNAi作为一种抗病毒治疗的手段越来越近。