RNA干扰作用(RNAi)研究进展

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 .RNAi主要通过dsRNA被核酸酶切割成 2 1～ 2 5nt的干扰性小RNA即siRNA ,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现 .RNAi要有多种蛋白因子以及ATP参与 ,而且具有生物催化反应特征 .RNAi是新发现的一种通过dsRNA介导的特异性高效抑制基因表达途径 。

RNA干扰作用研究进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是指与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA分子 (double strandedRNA ,dsRNA)导入细胞时 ,该mRNA发生特异性的降解 ,导致基因表达的沉默。本文介绍RNAi作用的发现。

RNA干扰作用——治疗HIV的新途径

RNA干扰作用 (RNAi)是生物界一种古老且进化上高度保守的现象 ,是基因转录后沉默作用 (PTGS)的重要机制之一 ,RNA干扰作为抑制基因表达的有利工具 ,首次在无脊椎动物和植物中对付外目的基因 ,主要通过短的干扰RNA(siRNA ,大约 2 1个核苷酸的RNA的复合物 )有效地抑制同源性基因的表达。最近的研究表明 ,用siRNA抑制HIV 1的复制 ,即通过它抑制病毒或者细胞内的基因 ,取得了重要的成效。RNAi开辟了新的基因治疗药物研究途径 。

血管内皮生长因子干扰RNA对鼠视网膜中血管内皮生长因子mRNA表达的抑制作用

目的研究血管内皮生长因子(vascular endothe-lial cell growthfactor,VEGF)小片段干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对鼠视网膜VEGF mRNA的抑制作用,探讨其对视网膜新生血管治疗的可行性。方法体外培养人鼻咽癌细胞(CNE-2Z),分成正常氧培养组(20%O2)和低氧培养组(1%O2)。采用脂质体(LF2000)将VEGF siRNA转染两组细胞,RT-PCR检测VEGF mRNA的表达,确立VEGF siRNA对VEGF mRNA的抑制效率。然后,建立高浓度氧(75%)诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型,以脂质体为载体,将VEGF siRNA重组质粒注射到鼠玻璃体腔内,RT-PCR检测视网膜组织中VEGF mRNA的表达水平。结果正常氧培养的CNE-2Z细胞有VEGF mRNA表达,低氧状态下VEGF mRNA表达增多,两者之间差异有显著性(P<0.01);与未转染组和转染空载体组相比,在正常氧和低氧状态下,VEGF siRNA均能明显抑制VEGF mRNA的表达(P<0.01);正常氧状态下VEGF siRNA的抑制效率比低氧状态高。高浓度氧诱导的C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型中,玻璃体腔注射VEGF siRNA组视网膜组织中VEGF mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论VEGF特异的siRNA能有效地抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z和C57BL/6J小鼠视网膜新生血管动物模型视网膜中VEGF mRNA的表达。

RNA干扰及其应用

RNA干扰作用(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默机制。RNAi主要是指dsRNA分子进入细胞内,特异性降解与之同源的mRNA,从而特异高效的抑制相应基因表达活性的现象。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。本文对RNA干扰的作用机制及近几年应用做一简要综述。

RAA干扰及其应用的研究进展

RNA干扰作用(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默机制(post transcriptional gene silencing,PTGs)。RNAi主要是指dsRNA分子进入细胞内,特异性降解与之同源的mRNA,从而特异高效的抑制相应基因表达活性的现象。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。本文介绍RNAi的作用机制与应用的研究进展。

RNAi在抗肿瘤研究中的应用

RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。RNAi技术的进一步发展,为肿瘤基因治疗开拓了一条新的途径。本文介绍RNAi的作用机制与抗肿瘤应用的研究进展。

植物小RNAs的研究进展

小RNAs(长度小于40nt)是nc-RNAs重要的一部分,现在植物中已发现了多种小RNAs,如小干扰RNAs(siRNAs)、微小RNAs(miRNAs)、反式作用的小干扰RNAs、天然反义转录小干扰RNAs、异染色质小干扰RNAs、长小片段小干扰RNAs、天然反义转录的微小RNAs及其一些未命名的小RNAs。成熟的小RNAs聚集相关的蛋白质因子,可以抑制转录,导致转录水平的基因沉默(TGS);或介导目标mRNA的剪切,抑制翻译,导致转录后水平基因沉默(PTGS)。

DNMT1 siRNA稳定表达载体的构建及其沉默效率的评价

目的 构建能在肝癌细胞系SMMC- 772 1中稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体。方法 合成特异性干扰DNMT1的小分子干扰RNA (small interfering RNA,si RNA )分子,并与p SUPER- GFP载体连接。脂质体转染SMMC- 772 1细胞,并以G4 18筛选稳定表达细胞系。应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹方法对细胞系中DNMT1的RNA表达水平和蛋白表达水平进行了分析。应用甲基化聚合酶链反应方法分析该细胞系中甲基化的基因E-钙粘着蛋白的甲基化状态。结果 转染DNMT1沉默载体的SMMC- 772 1细胞中DNMT1的m RNA表达量为对照载体p SU PER转染SMMC-772 1细胞的4 3% ,而前者中DNMT1蛋白表达水平小于后者的10 %。DNMT1的si RNA沉默效率大于90 % ,所构建的DNMT1的si RNA有较高的沉默效率。DNMT1的表达抑制使E-钙粘着蛋白基因启动子区出现去甲基化。结论 成功构建了能稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体,但目的基因沉默后其RNA表达水平与蛋白质表达水平表现不一致,评价si RNA干扰作用时应以目的基因相应蛋白质的表达水平为准。

miRNA与神经胶质瘤的研究进展

miRNA是一类内源性的非编码RNA,可以特异性诱导基因沉默现象,从而调控细胞增殖、分化、侵袭、凋亡等一系列生物学活动。近年来发现miRNA与神经胶质瘤关系密切,它们可以通过作用于肿瘤相关途径中的靶蛋白,在神经胶质瘤的发生、发展和转归等方面起到重要作用。这些发现和鉴定,为神经胶质瘤的致病机制、诊断方法、治疗途径的研究开辟了新的方向。目前miRNA与神经胶质瘤的相关性研究虽然取得了诸多进展,但仍处于初级阶段,距作为临床干预和治疗策略,缓解甚至攻克神经系统肿瘤的目标还有很大差距。本文对miRNA与神经胶质瘤关系的研究进展进行综述。